עבודה זו נתמכה על ידי G0400268 מענקי מחקר וMR / K018396 / 1 מהמועצה למחקר הרפואי, ועל ידי מחקר רפואי פעולה. תמיכה נוספת סופקה על ידי המכון הלאומי לחקר בריאות באוניברסיטת קולג &#39;בלונדון בתי חולים ביו-רפואי מרכז מחקר.

כל הניסויים בבעלי החיים שבוצעו במחקר זה תאמו את חקיקה לאומית ואירופית ואושרו על ידי הוועדה האתית של בית הספר לרוקחות UCL והמשרד בבריטניה הבית (HO). כל העבודה בבעלי החיים שנערכה במסגרת פרויקט HO רישיונות PPL 80/2243 וPPL 70/7773. 1. עכברוש הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע את כל in vivo הניסויים באמצעות חולדות ילודות Wistar הפתוגן ללא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את כל המלטות העכברוש (12 ילודים למושבה) בכלובים בודדים עם אמהותיהם נשים (9 - 11 בשבוע שנקבות זקנות), בתנאים אופטימליים (19-21 מעלות צלזיוס, 45-55% לחות, 15-20 שינויי אוויר / שעה ו 12 שעות אור / חושך מחזור). </li></ol> 2. תא חיידק הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות E. מניות coli K1 ב -20% (V / V) גליצרול ב -80 מעלות צלזיוס. עבור כל ניסוי, צלחת את חיידקי המניה על מילר-הינטון (MH) צלחות אגר, ולדגור על 37 מעלות CO / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היום לפני ההאכלה, inocuמאוחר 10 מיליליטר של מרק MH עם ה יחידה מושבה והתרבות O coli K1 / N על 37 מעלות צלזיוס, 200 סל&quot;ד. כביקורת על זיהום בינוני, להכין 10 מיליליטר של מרק MH uninoculated ולדגור על 37 מעלות צלזיוס ב 200 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת O / השעיה חיידקי N 100 μl ל9.9 מיליליטר של מרק MH (1: 100 V / V), ולדגור על 37 מעלות צלזיוס, 200 סל&quot;ד, עד שיגיע לאמצע מעריכי-שלב, מתאים לצפיפות אופטית של 0.6 הנמדד באורך גל של 600 ננומטר (OD 600). </li></ol> 3. האכלת חולדות ילודים עם א &#39; K1 coli <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את בעלי החיים בצורה אנכית ביד אחת מהעורף, המאפשר לפתוח את הפה. לאט לאט להכניס את קצה פיפטה סטרילית לתוך פיו של בעל החיים, ופיפטה 20 μl של הבידוד (~ 37 ° C) לתוך הפה של בעלי החיים על פני פרק זמן של 30 שניות. להחזיר את בעל החיים לאמו מייד לאחר הנקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא ש4 - 8 x 10 6 חיידקים לא האביסו to כל גור על ידי דילול סדרתי של הבידוד בPBS ואיתור על גבי צלחות אגר MH. </li></ol> 4. הערכה של התיישבות על ידי א K1 coli <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את החיה ביד אחת מהעורף. להרטיב מקל אוזני סטרילי בסטרילי PBS, ולאחר מכן בעדינות לשטוף את האזור פי הטבעת. להחזיר את בעל החיים לאמו מייד לאחר קירצוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את קצה הצמר-הגפן לצינור המכיל 300 μl של PBS סטרילית ולאחסן על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע א קיימא coli K1 על ידי בדיקת רגישות bacteriophage. פיק מושבה בודדת באמצעות לולאת מיקרוביולוגית סטרילי, טבל 200 μl סטרילי PBS, אז בכפוף לערבוב מערבולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות לולאת מיקרוביולוגית סטרילי, תת-תרבות על אגר MH בקו ישר. לאפשר את הצלחת לייבוש למשך 30 שניות, ולאחר מכן פיפטה 10 μl של BACK1E teriophage (10 9 פלאק ויוצרים מיליליטר / יחידות (PFU / ml)) על גבי במרכז הקו. דגירה O הצלחת / N על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, לבחון את הצלחת לתמוגה בתיווך bacteriophage. </li></ol> 5. הערכה של מחלת חומרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך את חומרת המחלה של כל חיה 4 - 5 פעמים ביום באמצעות מערכת ניקוד שבע נקודות המפורטים בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם ציונים של בעלי חיים ≥3 מתוך 7, לברור באופן מיידי לבעלי החיים כדי למזער את הסבל. רשום את בעלי החיים למתים. </li></ol> 6. Euthanization של חולדות ילודים ודם אוסף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את החיה ביד אחת, וחושף את הראש וצוואר. לחטא את צווארו של בעל החיים על ידי מנגב עם ספוגית אלכוהול. לחטא זוג מספריים גדול באמצעות אתנול 70%, לפני השטיפה בPBS סטרילי כדי להסיר אתנול עקבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד בעדינות את בעלי החיים ישירות מעל צלחת פטרי. לערוף את הילוד באמצעות surgi החדמספריים קאל, על מנת להבטיח כי הדם מטפטף לתוך צלחת פטרי. יש להימנע ממגע עם הראש על מנת למנוע זיהום של דם עם צמחיית עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לאסוף את הדם באמצעות פיפטה סטרילית ומערבבים עם מלח נתרן הפרין בריכוז של 20-50 מיליליטר / יחידות בצינור 0.5 מיליליטר microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey. לקבוע את מספריו של ע &#39;בר-הקיימא coli K1 על ידי בדיקת הרגישות של חיידקי קיימא לK1E bacteriophage. </li></ol> 7. Dissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות עריפת ראשו של העכברוש בילוד, להשתמש תנאי ספטית לחתוך ולאסוף רקמות של עניין. לשטוף את כל המכשירים (מוצגים באיור 1) ב- 70% אתנול וסטרילי PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הלוח לנתיחה ולהרטיב את הבטן לגמרי עם 70% אתנול. מקם את הגופה על הגב שלה ולתקן ללוח לנתיחה על ידי (i) מצמיד את רגלו האחורית השמאלית לשולחן העבודה עם מחט סטרילית, (ii) מתיחת הגופה ומצמיד את הרגל הקדמית הימנית לשולחן הפעולה, (iii) מצמיד את רגל ימין אחורית ורגל קדמית השמאלית לשולחן הפעולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את העור לאורך הצד השמאלי של הבטן התחתונה באמצעות מלקחיים, ואז לחתוך לאורך צדו השמאלי של הגופה מהבטן התחתונה לעצם החזה באמצעות מספריים לנתיחה קטנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להאריך את הכריתה פני עצם החזה, ואז למטה בצד ימין של הגופה מעצם החזה ועד הבטן התחתונה באמצעות מלקחיים ומספריים לנתיחה קטנה, להבטיח שאף אחד ממבני היסוד פגום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, משוך בעדינות את דש העור מעצם החזה ועד הבטן התחתונה באמצעות קשתית מלקחיים לנתיחה מעוקלות כדי לחשוף את הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להעלות את הצפק עם מלקחיים ולחתוך בצורה אנכית על מנת לחשוף את האיברים הפנימיים, כדי להבטיח שאף אחד מהאיברים שבבסיסם ניזוקו. </li></ol> 8. איסוףמערכת העיכול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הקיבה, מערכת הלימפה mesenteric מעי דק, cecum, מעי גס ו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הבטן בעדינות על ידי transecting בכל צד, ואז למקם לתוך קומפקטי המכיל 1.6 מיליליטר של PBS סטרילי באמצעות מלקחיים סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect המעי הגס בפי הטבעת. משוך בזהירות את המסה במעי כולו מהגופה באמצעות מלקחיים לנתיחה ומניחים בצלחת פטרי סטרילית. ודא שזה נעשה בעדינות כך שמבנה המעיים ומבני הלימפה mesenteric אינם מפריד. </li></ol> 9. הפרדה של מערכת העיכול ומערכת הלימפה mesenteric (איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 30 מיליליטר של PBS סטרילי לתוך צלחת פטרי, להבטיח את מערכת העיכול היא שקועה לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את המסה של מערכת הלימפה mesenteric המרכזית, ולצבוט באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. זהה את החלק הפרוקסימלי ביותר של המעי הדק, ולצבוט באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט למשוך CENTRAמסת l של מערכת הלימפה mesenteric והמעי הדק דיסטלי בכיוונים מנוגדים, עד שתי הרקמות מופרדות לחלוטין זו מזו. לבצע תהליך זה בזהירות כדי להבטיח שהמעי הדק לא נמתח, כמו זה מונע גבייה לשחזור של הפרוקסימלי, אמצע ואזורי דיסטלי. הנח את מערכת הלימפה mesenteric ב300-500 μl סטרילי PBS ומניח על קרח. </li></ol> 10. חתך של מערכת העיכול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transect מערכת העיכול בcecum להפריד המעי דק מהמעי הגס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את המעי הגס ב300-500 μl סטרילי PBS ומניח על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגימות של רקמות נציג מאזורים הפרוקסימלי, אמצע ואחורי של המעי הקטן. יישר את המעי דק מנקודת האמצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז, (i) לאסוף את 2 סנטימטר האחרון של רקמה לפני המעי האטום כמו המעי הדק דיסטלי, (ii) לאסוף את רקמת 5-7 סנטימטר מעל לנקודת האמצע כמו המעי הדק הפרוקסימלי, ו(Iii) לאסוף את רקמת 3-5 סנטימטר מתחת לנקודת האמצע כמו המעי הדק האמצע. </li></ol> 11. איסוף הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לזהות שלוש אונות של כבד החולדה לאחר ההסרה של הקיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך אונות מחלל הבטן באמצעות מלקחיים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הכבד על ידי חיתוך כל רצועות חיבור באמצעות מספריים עדינים. הנח כבד ב300-500 μl סטרילי PBS ומניחים על קרח. </li></ol> 12. איסוף הטחול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הטחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך טחול מהבטן ולהשתמש במספריים עדינים לחתוך את רצועות gastrosplenic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח טחול ב300-500 μl סטרילי PBS ומניחים על קרח. </li></ol> 13. איסוף הכליות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את הכליות שתהיינה גלויים בחלק האחורי של חלל הבטן עם ההסרה של המערכה העיכול ואיברים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השופכנים Cut וכל רצועות הצמדת uלשיר מספריים לנתיחה קנס ולהסיר כליות באמצעות מלקחיים בסדר. הסר בלוטת יותרת הכליה וכל חומר שומני (אם עדיין מחובר) באמצעות מלקחיים בסדר ומספריים לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שני הכליות ב300-500 סטרילי PBS μl ומניח על קרח. </li></ol> 14. איסוף המוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר עריפת הראש, להחזיק את הראש בתנוחה זקופה באמצעות מלקחיים מעוקלים. צובט את העור על ראש של אורכית באמצעות קבוצה נוספת של מלקחיים מעוקלים, ולהפוך את חתך באמצעות מספריים לנתיחה קנס. לחתוך את עור שנותר ליד צוואר, שוב אורכית עם מספריים לנתיחה קנס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך עור בכיוון החוצה באמצעות מלקחיים בסדר בשני הצדדים כדי לחשוף את הגולגולת ולהסיר דשי עור באמצעות מספריים לנתיחה קנס. הנח מספריים לנתיחה קנס בפתיחת השדרה ולעשות חתך לאורך הגולגולת לכיוון הדוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך את שני החלקים של גולגולת בכיוון החוצה באמצעות מלקחיים בסדר. חותך להסרת מקטעי גולגולת. </li><li&gt; הסרת מוח באמצעות מלקחיים רחבים, תוך שימוש בתנועה כלפי מעלה גורפת מפתיחת השדרה לכיוון הדוכן. שטוף את המוח בPBS פעמיים כדי להסיר כל דם מהליך עריפת הראש. </li></ol> 15. עיבוד רקמות ולתפעול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים ספירת כדאיות או מיצוי DNA, רקמות מקום לצינורות המכילים סטרילי PBS. מייד לקבוע את המספרים של חיידקי קיימא על ידי דילול סדרתי בPBS וציפוי על צלחות אגר MacConkey, או בחנות ב -20 ° C עם גליצרול 20% לטווח קצר. להפקת DNA, רקמות חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים מיצוי RNA, רקמות מקום באמצעי האחסון מתאים של פתרון RNAlater (10 μl לכל רקמת 1 מ&quot;ג), ולאחר מכן לאחסן באופן מיידי ב -20 ° C לטווח קצר או באחסון לטווח ארוך -80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בניסויים הדורשים הדמיה, רקמות מקום 10 מיליליטר פתרון Methacarn (מתנול 60%, כלורופורם 30% ו -10% חומצה אצטית), לאחר מכן לאחסןלא RT (20-25 מעלות צלזיוס) לתקופה של עד 3 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את משקל רקמה על ידי השוואת משקל של צינורות של לפני ואחרי תוספת של רקמות. Homogenize רקמות באמצעות homogenizer. שטוף את homogenizer פעם אחת בשנת 70% אתנול ו פעמים PBS סטרילי בין הומוגניזציה של כל דגימה. הערה: קיבעון Methacarn רצוי לקיבעון של דגימות מעיים במטרה לשמר את מבני הגנה ריריים הקשורות mucin; קיבעון פורמלין עשוי לשמש לרקמות מערכתיות. </li></ol>

<ol>
	<li>Harvey, D., Holt, D. E., Bedford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+meningitis+in+the+newborn:+a+prospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Bacterial meningitis in the newborn: a prospective study of mortality and morbidity.</a> 23 (5), 218-225 (1999).</li><li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+diagnosis,+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis.">Epidemiology diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 23 (3), (2010).</li><li>Silva, L. P. A., Cavalheiro, L. G., Queir&#243;s, F., Nova, C. V., Lucena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+newborn+bacterial+meningitis+and+sepsis+during+the+pregnancy+period+for+public+health+care+system+participants+in+Salvador,+Bahia,+Brazil.">Prevalence of newborn bacterial meningitis and sepsis during the pregnancy period for public health care system participants in Salvador, Bahia, Brazil.</a> J. Infect. Dis. 11 (2), 272-276 (2007).</li><li>Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+of+the+newborn:+basic+mechanisms+and+clinical+correlates.">Innate immunity of the newborn: basic mechanisms and clinical correlates.</a> Nat. Rev. Immunol. 7 (5), 379-390 (2007).</li><li>Robbins, J. B., et al., Med, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+K1+capsular+polysaccharide+associated+with+neonatal+meningitis.">Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis.</a> N. Eng. J. 290 (22), 1216-1220 (1974).</li><li>Korhonen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hemolysin+production,+and+receptor+recognition+of+Escherichia+coli+strains+associated+with+neonatal+sepsis+and+meningitis.">hemolysin production, and receptor recognition of Escherichia coli strains associated with neonatal sepsis and meningitis.</a> Infect. Immun. 48 (2), 486-491 (1985).</li><li>Rutishauser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysialic+acid+in+the+plasticity+of+the+developing+and+adult+vertebrate+nervous+system.">Polysialic acid in the plasticity of the developing and adult vertebrate nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (1), 26-35 (2008).</li><li>Koedel, U., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+experimental+bacterial+meningitis.">Models of experimental bacterial meningitis.</a> Infect. Dis. Clin. North Am. 13 (3), 549-577 (1999).</li><li>Tunkel, A. R., Scheld, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+pathophysiology+of+bacterial+meningiits.">Pathogenesis and pathophysiology of bacterial meningiits.</a> Clin. Microbiol. Rev. 6 (2), 118-136 (1993).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+K1+capsule+is+the+critical+determinant+in+the+development+of+Escherichia+coli+meningitis+in+the+rat.">The K1 capsule is the critical determinant in the development of Escherichia coli meningitis in the rat.</a> J. Clin. Invest. 90 (3), 897-905 (1992).</li><li>Obata-Yasuoka, M., Ba-Thein, W., Tsukamoto, T., Yoshikawa, H., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+Escherichia+coli+share+common+virulence+factor+profiles,+serotypes+and+phylogeny+with+other+extraintestinal+E.+coli.">Vaginal Escherichia coli share common virulence factor profiles, serotypes and phylogeny with other extraintestinal E. coli.</a> Microbiology. 148 (9), 2745-2752 (2002).</li><li>Sarff, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Escherichia+coli+K1+in+healthy+and+diseased+newborns.">Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns.</a> Lancet. 305 (7916), 1099-1104 (1975).</li><li>Schiffer, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review:+relation+between+invasiveness+and+the+K1+capsular+polysaccharide+of+Escherichia+coli.">A review: relation between invasiveness and the K1 capsular polysaccharide of Escherichia coli.</a> Pediatr. Res. 10 (2), 82-87 (1976).</li><li>Palmer, C., Bik, E. M., DiGuilio, D. B., Relman, D. A., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+human+infant+intestinal+microbiota.">Development of the human infant intestinal microbiota.</a> PLoS Biol. 5 (7), 1556-1573 (2007).</li><li>Nassif, X., Bourdoulous, S., Eug&#232;ne, E., Couraud, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+extracellular+pathogens+cross+the+blood-brain+barrier.">How do extracellular pathogens cross the blood-brain barrier.</a> Trends Microbiol. 10 (5), 227-232 (2002).</li><li>Moxon, E. R., Glode, M. P., Sutton, A., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infant+rat+as+a+model+of+bacterial+meningitis.">The infant rat as a model of bacterial meningitis.</a> J. Infect. Dis. 136, 186-190 (1977).</li><li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+innate+defenses+in+the+neonatal+gastrointestinal+tract+in+response+to+colonization+by+neuropathogenic+Escherichia+coli.">Altered innate defenses in the neonatal gastrointestinal tract in response to colonization by neuropathogenic Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 81 (9), 3264-3275 (2013).</li><li>Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensins:+antimicrobial+peptides+of+innate+immunity.">Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 3 (9), 710-720 (2003).</li><li>Bevins, C. L., Salzman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells,+antimicrobial+peptides+and+maintenance+of+intestinal+homeostasis.">Paneth cells, antimicrobial peptides and maintenance of intestinal homeostasis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9 (5), 356-368 (2011).</li><li>Moxon, E. R., Smith, A. L., Averill, D. R., Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+meningitis+in+infant+rats+after+intranasal+inoculation.">Haemophilus influenzae meningitis in infant rats after intranasal inoculation.</a> J. Infect. Dis. 129 (2), 154-162 (1974).</li><li>Bortolussi, R., Ferrieri, P., Bj&#246;rkst&#233;n, B., Quie, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsular+K1+polysaccharide+of+Escherichia+coli:+relationship+to+virulence+in+newborn+rats+and+resistance+to+phagocytosis.">Capsular K1 polysaccharide of Escherichia coli: relationship to virulence in newborn rats and resistance to phagocytosis.</a> Infect. Immun. 25 (1), 293-298 (1979).</li><li>Glode, M. P., Sutton, A., Moxon, E. R., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+neonatal+Escherichia+coli+meningitis:+induction+of+bacteremia+and+meningitis+in+infant+rats+fed+E.+coli+K1.">Pathogenesis of neonatal Escherichia coli meningitis: induction of bacteremia and meningitis in infant rats fed E. coli K1.</a> Infect. Immun. 16 (1), 75-80 (1977).</li><li>Pluschke, G., Mercer, A., Kuse&#263;ek, B., Pohl, A., Achtman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+bacteremia+in+newborn+rats+by+Escherichia+coli+K1+is+correlated+with+only+certain+O+(lipopolysaccharide)+antigen+types.">Induction of bacteremia in newborn rats by Escherichia coli K1 is correlated with only certain O (lipopolysaccharide) antigen types.</a> Infect. Immun. 39 (2), 599-608 (1983).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+capsule-selective+endosialidase+E+minimizes+changes+in+organ+gene+expression+induced+by+experimental+systemic+infection+with+Escherichia+coli+K1.">Administration of capsule-selective endosialidase E minimizes changes in organ gene expression induced by experimental systemic infection with Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 156 (7), 2205-2215 (2010).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+the+polysialyl+capsule+during+blood-to-brain+transit+of+neuropathogenic+Escherichia+coli+K1.">Differential expression of the polysialyl capsule during blood-to-brain transit of neuropathogenic Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 154 (8), 2522-2532 (2008).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+cure+of+systemic+Escherichia+coli+K1+infection+by+modification+of+the+bacterial+phenotype.">Prevention and cure of systemic Escherichia coli K1 infection by modification of the bacterial phenotype.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 48 (1), 1503-1508 (2004).</li><li>Achtman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+widespread+bacterial+clones+among+Escherichia+coli+K1+isolates.">Six widespread bacterial clones among Escherichia coli K1 isolates.</a> Infect. Immun. 39 (1), 315-335 (1983).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+experimental+Escherichia+coli.+infection+with+recombinant+bacteriophage-derived+capsule+depolymerase.">Treatment of experimental Escherichia coli. infection with recombinant bacteriophage-derived capsule depolymerase.</a> J. Antimicrob. Chemother. 56 (5), 160-165 (2005).</li><li>Gross, R. J., Cheasty, T., Rowe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+bacteriophages+specific+for+the+K1+polysaccharide+antigen+of+Escherichia+coli.">Isolation of bacteriophages specific for the K1 polysaccharide antigen of Escherichia coli.</a> J. Clin. Microbiol. 6 (6), 548-550 (1977).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

מודל החיה המתואר כאן מתבסס על עבודה קודמת שנועדה לשחזר את המאפיינים הבולטים של מתרחש באופן טבעי בזיהומים בבני אדם. חולדות בילוד בתחילה הועסקו ללמוד דלקת קרום מוח תינוקות עקב H. סוג אינפלואנזה b כמינים עומדים בקריטריונים המרכזיים למודל חזק של זיהום. כך, פורטל כניסה של הפתוגן הרלוונטי צריך לשקף את זה של הדבקת בני אדם הטבעית וreproducibly להצמיח פתולוגיה דומה של משך מספיק כדי לאפשר התערבות טיפולית. הטכניקות המשמשות לא צריך להגביל את תחולתו של ההליך ולא צריך לתרום לתוצאה מחלה 20. המודל של ה &#39; דלקת קרום מוח המופילוס בחולדות תינוק שפותחו על ידי Moxon ועמיתים עונה על קריטריונים אלה 20; ההדבקה הטבעית מתרחשת לאחר קולוניזציה של הקרומים הריריים של דרך הנשימה העליונה, תכונה חשובה זו שוכפלה בגורי החולדה על ידי אי-טראומההחדרת טיקים של החיידקים על גבי הקרומים של מעברי האף. חשוב לציין, הטבע תלוי הגיל של הזיהום היה משוכפל במודל. אותה הקבוצה גם היתה הראשונה לפתח מודל לא פולשנית של א &#39; coli K1 NBM בחולדה בילוד 22. גורי ספראג-Dawley הפתוגן ללא שיישבו על ידי האכלת 8 אוקטובר - 10 אוקטובר חיידקים דרך צינור קיבה דרך הפה; הבידוד לכן היה גבוה במידה ניכרת מזה מועסק על ידינו. קולוניזציה עם שלושה זני K1 בדקו, C94 (O7: K1: H-), EC3 (O1: K1: H-) ו- LH (O75: K1: H3), התרחשה בשיעור גבוה יחסית (48-74%) של K1-האכיל בעלי חיים, אבל מקרים של בקטרמיה, דלקת קרום המוח ולתמותה היו משתנים ונמוכים משמעותי משיעורים של קולוניזציה. הטבע המשובט של א &#39; זיהום ניסיון coli K1 הוקם מאוחר יותר 23 ונראה עכשיו כי רק O18: K1 ו, ובמידה פחותה, O7: קפסיד K1 יכוליםלגרום באופן עקבי זיהום מערכתי. מסיבה זו, החקירות של פתוגנזה של א &#39;neuropathogenic אלה coli K1 היו מבוסס על השימוש בO18 משופר הארסיות: A192PP מתח K1. השוואה של א &#39; האכלת coli K1 של חולדות בילוד דרך צינור קיבה, כפי שGlode ועמיתי 22, ושיטת האכלת טיפה כפי שהיא מתבצעת על ידי הקבוצה של Achtman 23 חשפו מספרים מוגזמים של מוות תוך שימוש בשיטה הקודמת, כמעט בודאות כתוצאה מניזק לרירית משטחים על ידי צינור קיבה. כמו שיעורים של קולוניזציה דומים עם שתי שיטות אלה, מומלץ להשתמש בשיטה פחות פולשנית של האכלת החיידקים באמצעות פיפטה עם טיפ סטרילי, כפי שתואר בתקשורת זו. A192PP זן החיידק המשמש במחקרים שלנו הוא O18: K1. זה הוא נגזר אלים יותר של הזן הקליני E. A192 coli שהתאושש במקור ממטופל עם הרעלת דם 27 </sup&gt;. האלימות המוגברת של הזן הייתה מתקבלת על ידי מעבר סדרתי דרך חולדות ילודות 26. המתח מעורר את חומרת מחלה תלוית גיל, עם בקטרמיה 100% ותמותה כאשר ניתן לבעלי החיים ישנים 2 יום 28. בניגוד לכך, ישנות חיות 9 יום הן לגמרי עמידות למחלות. K1 הספציפי bacteriophage ממס ניתן להשתמש כדי לבדל את ה coli K1 מא האחר coli זני 29. במחקר זה, רגישות של חיידקי קיימא לK1E bacteriophage יש להשתמש כדי (i) לבדוק את הטוהר של E. השעיות coli K1 מוכנות להיות מוזנות לבעלי החיים, וכן (ii) כדי לבדל את E. K1 coli מהקוליפורמים אחרים על מנת לחשב את הכדאיות במטליות פי טבעת, דם ודגימות רקמה. אם המושבה היא E. coli K1, זה יהיה רגיש לתְמוּגָה K1E bacteriophage, והתפתחות חיידקים יהיו מעוכב באתר של חיסון bacteriophage. אם המושבה לא E. coli K1, זה יהיה בדואר עמיד לתְמוּגָה bacteriophage kie, ולא צריך להיות על שטח של התפתחות חיידקים באתר של חיסון bacteriophage. יש לזכור שמודלים של בעלי החיים אינם יכולים לשקף את כל התכונות של המחלה מתרחשת באופן טבעי. המודל הנוכחי יכול להיות שונה כדי לבחון את מאפייני האלימות של חיידקי neuropathogenic אחרים מאשר E. ניתן לאכלס coli A192PP ושינויים בגודל של הבידוד והמיישבים. יישומים עתידיים של הטכניקה יכולים לכלול ההערכה של תרופות נחוצות לטיפול במצב ולחשוף פרטים על תשובות המארח לפלישת קולוניזציה ורקמה. השיטה המתוארת כאן היא פשוטה אך יעילה. המלטות יחידה של 10-12 גורים הועסקו כקבוצות מבחן או שליטה וגישה בתוך-אפריון זה מבטיחה רמה גבוהה של שחזור ותוקף סטטיסטי. זה הכרחי כי הגורים יוחזרו לאמהות טבעיות שלהם בהקדם האפשרי לאחר כל procedurדואר והמלטות לא צריכים לכן מהווים חיות עוברות התערבויות שונות. חשוב שהבידוד נמאס לחמם אחרת הגורים ידחו את התרבות המוצעת. הגורים לפתח במהירות חיידקים מורכבים ובתוך יומיים של לידה במערכת העיכול היא יישבה עם מגוון רחב של חיידקים מהמערכת הנוספת שהוקמה כחיידקים הנפוצים ביותר במעיים של התינוקות ומבוגרים. גורים שלא היה מאכילים א coli A192PP אינו נושא את ה coli K1 נחישות במערכת העיכול 17 וכן שיעורים של קולוניזציה היא פשוטה יחסית. עם זאת, Neus המבוסס על מתקפות שיטת qPCR לגילוי של מיישבי E. coli K1 הוא הרבה יותר רגיש כי שיטות תרבות מסורתיות, והוא מומלץ בחום 17.

זיהומים חיידקיים מערכתיים הם איום עיקרי לרווחת ולהישרדותו של הוולד; פגים פגיעים במיוחד. דלקת קרום המוח בילוד בקטריאלי (NBM), קשור לעתים קרובות עם אלח דם חיידקים, ממשיך להיות מקור משמעותי לתמותה ותחלואה בשבועות הראשונים לחייהם והבעיה מחריפה בפיתוח המתמשך של התנגדות לתרופות אנטי-בקטריאלי חזית 1,2. מקרה של NBM הוא מצב חירום רפואי שנושא בנטל רפואי, חברתי וכלכלי גבוה 3; כתוצאה מכך, יש צורך דחוף בתרופות חדשות ו, במיוחד, אסטרטגיות מניעתי רומן להפחית את הנטל של זיהום. חלק מהתכונות של NBM הן יוצאי דופן: בעולם המפותח, Escherichia coli וקבוצת B סטרפטוקוקוס אחראים לרוב הגדול של המקרים ואת היכולת של זנים אלה כדי לעורר NBM כמעט תמיד קשור בנוכחות של CA פוליסכריד מגןpsule המאפשר פתוגן להתחמק הכרה חיסונית מעבד 4. אחוז גבוה מאוד (80-85%) של neuroinvasive E. coli להביע כמוסת K1 5,6, פולימר חומצת polysialic α-2,8 צמוד שהוא מבני זהה לארח מאפננים של פלסטיות עצבית 7. ההערכה של תרופה חדשה ואמצעי מניעה לNBM ובקטרמיה קשורה ואלח דם הייתה ברורה תועלת ממודל של בעלי חיים חזק של זיהום המחקה את התכונות העיקריות של המחלה בילוד האנושי, בפרט בגיל-התלות החזקה והמסלול הטבעי של זיהום . מגוון רחב של מודלים לדלקת קרום המוח חיידקית שלילי גרם גראם-חיובי והם זמינים 8,9 ואלה שיש לי משמעותי הרחיבו את הידע של אפשרויות פתוגנזה, פתופיזיולוגיה וטיפול בזיהומים אלה שלנו. כך, זיהומים ניסיוניים בחולדות, עכברים, ארנבים וקופים היו בשימוש ללמוד דלקת קרום מוח בשני neonate והמבוגר. עם זאת, רבים מהמודלים האלה להעסיק הזרקה תת עורית או intracisternal ישירה של חיידקים לייזום של זיהום, יצירת פתוגנזה מלאכותית על-ידי עקיפת תהליכים טבעיים של הפצה מהאתר של קולוניזציה. בחלק מהמקרים בשיטות של חיסון אלה הביאו לשינויים משמעותיים בפתולוגיה; לדוגמא, מנהל תת-עורי של א &#39; coli זני K1 ביטלו את גיל תלות הקשורים לזיהום הטבעי, ייצור בקטרמיה ופלישה של מערכת העצבים המרכזית (CNS) בשני ילודים ומבוגרים 10. נטייה לE. coli NBM תלוי באופן קריטי על העברת אנכית של הסוכן סיבתי מאם לתינוק באו מייד לאחר לידת 11. אימהי המופק E. חיידק E. K1 ליישב את מערכת עיכול של ילוד (GI) 11-13, שהוא סטרילי בלידה, אבל במהירות רוכשת חיידקים מורכבים 14. בילודים יישבו, E. coliיש חיידקי K1 יכולת translocate מחלל המעי למחזור הדם המערכתי לפני הכניסה למערכת העצבים המרכזית על פני מחסום הדם-המוח או מחסומי נוזל דם-המוח והשדרה 9,15. העיצוב של דגמים חזקים של זיהום ניסיון צריך לקחת פרטים אלה בחשבון. למרות שעכברים היו בשימוש נרחב למחקר של צורות מסוימות של דלקת קרום מוח חיידקית 8, הם אינם מתאימים ללימודים של זיהום בילוד: הם מוצפים על ידי זיהום מערכתי ולא מראים אופייני תלות גיל החזקה של תינוקות אנושיים 16. יתר על כן, α-defensins, פפטידים מפתח של מערכת עיכול מתן הגנה מפני פלישה מערכתית על ידי א coli K1 17, באים לידי ביטוי מאוד בתאי פנט ונויטרופילים בבני אדם ובחולדות, אך לא בעכברים 18. יש מידה ראויה לציון של כפילות, יתירות וההטרוגניות בdefensin עכבר והגנים cryptidin קשורים לא נמצאה באחרimals 19. העכברוש בילוד שימש בתחילה על ידי Moxon ועמיתים לעבודה 20 לחקור את פתוגנזה של דלקת קרום מוח המופילוס אינפלואנזה הבאה חיסון intranasal, משכפלים את האתר הטבעי של קולוניזציה של הפתוגן בילוד באדם, ולאחר מכן הותאם לתלוי גיל E. בקטרמיה coli K1 ודלקת קרום מוח. Bortolussi et al. 21 זריקת intraperitoneal מועסק של הבידוד החיידקים ליזום זיהום, אך המחקר המרכזי של Glode ועמיתים לעבודת 22 האכלת קיבה דרך הפה בשימוש במקביל לתוואי הטבעי של זיהום לאחר קולוניזציה GI. כצינור הקיבה עלול לגרום נזק משטחים ריריים, ההליך היה מעודן לכלול האכלה של הבידוד לילודים 23. כאן, השיטה להתיישבות מערכת עיכול ונהלים למעקב אחר הזיהומים בגורי חולדה רגישים מתוארים; בנוסף, יישומים טיפוליים ומניעתי של המודל נדונים.

<table><tbody><tr><td>Pathogen-free Wistar rats (12 x neonate, 1 x lactating mother)</td><td><a href="http://www.harlan.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Harlan, UK</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli K1 A192PP</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>Bacteriophage K1E</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton Agar</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0037</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton Broth</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0405</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey Agar</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0007</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 100%</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium Salt</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>84020</td><td>Prepare 20 - 50 units/ml</td></tr><tr><td>RNAlater Solution</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>R0901</td><td>10 &amp;mu;l/mg tissue</td></tr><tr><td>Acetic Acid</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>320099</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>322415</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped swabs</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>11542483</td><td></td></tr><tr><td>Alcotip Swabs</td><td><a href="http://www.scientificlabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Scientific Laboratory Supplies, UK</a></td><td>SWA1000</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>P5856</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Universal Tube</td><td><a href="http://www.alphalabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> AlphaLaboratories, UK</a></td><td>CW3890</td><td></td></tr><tr><td>0.5 ml microcentrifuge tubes</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>I1405-1500</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>I1415-1000</td><td></td></tr><tr><td>0.1 &amp;mu;l calibrated loops</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>E1412-0112</td><td></td></tr><tr><td>L-shaped spreaders</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>E1412-1005</td><td></td></tr><tr><td>Cuvettes</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>10594175</td><td></td></tr><tr><td>Forceps straight with fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12780036</td><td></td></tr><tr><td>Forceps straight with blunt tips</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12391369</td><td></td></tr><tr><td>Forceps watchmaker&#039;s curved with very fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12740926</td><td></td></tr><tr><td>Scissors straight with very fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12972055</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory Scissors</td><td><a href="http://www.vwr.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> VWR, UK</a></td><td>USBE4251</td><td></td></tr><tr><td>25 G Syringe Needles</td><td><a href="http://www.greinerbioone.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Greiner Bio-One Ltd</a></td><td>N2525</td><td></td></tr><tr><td>LAMBDA 25 UV/Vis Spectrophotometers</td><td><a href="http://www.perkinelmer.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> PerkinElmer, UK</a></td><td>L60000BB</td><td></td></tr><tr><td>Unitemp Incubator</td><td>B&amp;amp;T, UK</td><td>OP958</td><td></td></tr><tr><td>Multitron shaking incubator</td><td><a href="http://www.infors-ht.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> INFORS HT, UK</a></td><td>AJ118</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Turrax T-10 homogenizer</td><td><a href="http://www.ika.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> IKA Werke</a></td><td>0003737000</td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive model of neuropathogenic escherichia coli infection in the neonatal rat

חקירה של יחסי הגומלין בין בעלי החיים ומארח הפתוגן חיידקים היא משמעותית רק אם מודל הזיהום המועסק משכפל את המאפיינים העיקריים של ההדבקה הטבעית. פרוטוקול זה מתאר הליכים להקמה וההערכה של זיהום מערכתי עקב K1 coli Escherichia neuropathogenic בחולדה בילוד. קולוניזציה של מערכת העיכול גורמת להפצה של הפתוגן לאורך מסלול מעי-לימפה-דם-המוח של זיהום והמודל מציג תלות גיל חזקה. זן של א &#39; coli O18: K1 בארסיות משופרת עבור העכברוש בילוד מייצר שיעורים גבוהים במיוחד של קולוניזציה, טרנסלוקציה לתא הדם והפלישה של קרומי המוח הבאים מעבר דרך המקלעת דמית העין. כמו במארח האנושי, חדירה של מערכת העצבים המרכזית מלווה בדלקת מקומית ותוצאה תמיד קטלנית. המודל הוא של שירות מוכח ללימודים של המנגנוןשל פתוגנזה, להערכת התערבויות טיפוליות, ולהערכה של אלימות חיידקים.

E. מודל זיהום מערכתי coli K1 המתואר כאן משכפל רב מהתכונות של ההדבקה הטבעית בבני אדם. החיידקים הם מעובדים, ליישב את מערכת העיכול, translocate לתוך תא הדם דרך בלוטות לימפה mesenteric לפני הקמת מחלה ספציפית לאיבר עם הדלקת הקשורים במוח 24. חשוב לציין, המודל מציג תלות גיל חזקה; כפי שמוצגים באיור 3, גורי חולדה שתי בנות יום (P2) רגישים מאוד למחלה פולשנית אלא על פני תקופה של שבעה ימים והחיות נעשות יותר ויותר עמידות לזיהום, אך לא למערכת עיכול קולוניזציה בדרכי 17. לאחר מעבר מהאתר של קולוניזציה GI לתא הדם, יכולים להיות דמיינו את החיידקים בדגימות דם על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי (איור 4) לפני הכניסה למערכת העצבים המרכזית בעיקר במקלעת דמית העין 25. אצל בעלי חיים מסוימים, יש פלישה נרחבת של איברים מרכזיים אחרים כגוןריאות, טחול וכליות 25. מספרי חיידקים ברקמות יכולים להשתנות באופן משמעותי בין גורים הבודדים 25 אבל כאשר bioburden הוא הבקיע כמו גם בהווה או בנעדר יש רמה גבוהה של שחזור בכל קשור לפלישת איבר. בשגר של 12 גורים כעוקבת בדיקה אחת, חישובי כוח באמצעות ה- G * תוכנת כוח נקבעו כי גודל מדגם זה משווה להסתברות 98.6% להימצאות השפעה המבוססת על הישרדות באמצעות שישה בעלי חיים מהמחזור ו&gt; הסתברות של 99% אם כל שנים עשר נלקחות בחשבון. המודל לכן הוא מתאים להערכה של תרופות חדשות מותאמות במיוחד לטיפול בזיהומים חיידקיים בילוד ונעשה שימוש בהליך כדי להעריך את הפוטנציאל הטיפולי של הכמוסה depolymerase EndoE כי סלקטיבי מסירה את הקפסולה K1 ממשטח חיידקי 24-26. גם זה יכול לשמש כדי לחקור אינטראקציות מארח-חיידקים המשפיעים על הטפיחהhogenesis של א &#39; neuropathogens coli; בהקשר זה היא שמשה ללימודים של א &#39; קולוניזציה coli A192PP והפצה. הוכח כי א קולי תאי A192PP להתמיד במערכת העיכול של גורי P2, P5 וP9 במספרים גדולים; היבטים זמניים של קולוניזציה בשלוש קבוצות אלה היו דומים מאוד (איור 5) ומשקפים את היכולת של החיידקים כדי לשכפל ולשמור על צפיפות אוכלוסייה בתוך הבטן. הארסיות של A192 הבודד הקליני הייתה משופר על ידי מעבר סדרתי בחולדות ילודות כדי להבטיח יתירות מעט או ללא שימוש בבעלי חיים. E. coli A192 יישב חולדות ילודות P2 עם 100 יעילות%, שהושרו בקטרמיה ב -35% מבעלי החיים וניב תוצאה קטלנית ב -25% 27. A192PP הנגזר passaged colonizes מערכת העיכול, מייצר בקטרמיה וגורם קטלני בכל גורי P2. כך, המודל יכול להיות מועסק על מנת לחקור את האלימות של דיfferent K1 זנים ביחס ליכולתם לחדור לתוך מערכת העצבים המרכזית ומערכות גוף שונות מהאתר של קולוניזציה. בהקשר זה, Pluschke ועמיתים לעבודה 23 השתמשו במודל זיהום עכברוש בילוד כדי לקבוע את הקיבולת של 95 E. coli K1 זנים ממקור אנושי כדי לגרום לבקטרמיה לאחר קולוניזציה הבטן; הם נצפו וריאציות רחבות ביעילות של שני קולוניזציה ויכולת פולשנית, שבבסיס הטבע המשובט של א &#39; coli K1 neuropathogens. <img alt="איור 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" width="600" /> איור 1. חומרים לאוסף רקמות: (א) בקנה מידה במשקל, (ב) צינורות-שקל מראש המכילים תקשורת הכרחית, (ג) פעולת שולחן, שליט ומחטים להצמיד בעלי החיים, 70% (ד) (V / V) אתנול וPBS לעקר ציוד אוסף רקמות, <sטרונג&gt; ערכת איסוף רקמות כוללים זוג מספריים גדול לעריפת הראש והמספריים ופינצטה ולהבים בגדלים שונים ובצורות קרח, (F) לשימור הרקמות (E), (G) 70% (V / V) אתנול לחיטוי שולחן הפעילות ומקיף. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" width="600" /> איור 2. הפרדה של מערכת העיכול ומערכת הלימפה mesenteric. גריפ ההמוני של מערכת הלימפה mesenteric עם מלקחיים לנתיחה קנס המרכזי מערכת עיכול מערכת הלימפה mesenteric (). גריפ (ב &#39;) החלק הפרוקסימלי של המעי הדק, ומושך בכיוונים מנוגדים. (ג) וseparat מלאדואר. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3. הישרדות של גורי חולדה יילודים בגילים מ יומיים (P2) לתשעה ימים (P9) לאחר נטילה דרך הפה של א &#39; coli A192PP, הממחיש את תלות גיל החזקה של זיהום מערכתי. כל קבוצה מייצגת 24 ילודים. <img alt="איור 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" width="600" /> איור 4. תמונות הקרינה של ה קולי תאי A192PP בכתם דם מגור P2 נגועים לאחר הנטילה דרך הפה של חיידקים. אנטיגן O lipopolysaccharide על פני השטח של החיידקים היה stained עם נוגדן ארנב נגד O18 polyclonal ונוגדן שני עז-נגד ארנב Alexa546 מצומדות-. כמוסת K1 הייתה דמיינה עם מגיב EndoE-GFP. כמעט כל החיידקים שאותרו בדגימות דם מוצג כמוסת K1 מגן. תמונות שנתפסו על ידי ד&quot;ר אנדריאה Zelmer. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig5highres.jpg" width="500" /> איור 5. E. הממשל הבא קולוניזציה במעי coli A192PP של הבידוד החיידקים. DNA הופק מכל מעי וא רקמת coli K1 המושבה להרכיב יחידות / g (CFU / g) שנקבעה על ידי תגובת השרשרת של פולימראז כמותית (QPCR) מיקוד גן polysialyltransferase (Neus) כפי שמתוארת במקום אחר 17 </sup&gt;. לוד: גבול של זיהוי. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> תכונה </td><td> בריא </td><td> לא בריא </td></tr><tr><td> צבע של העור </td><td> ורוד </td><td> חיוור / צהוב </td></tr><tr><td> Agility (רפלקס ליישר) </td><td> גור הופך באופן מיידי על מיקום אחורה </td><td> קושי בהיפוך מיקום לאחור (&gt; 3 שניות) או לא יכול להשיג </td></tr><tr><td> לחץ עדין על הבטן </td><td> אין קול </td><td> קול של תסיסה </td></tr><tr><td> בטן קו חלב / </td><td> גלוי ולבן </td><td> לא נראה לעין </td></tr><tr><td> טמפרטורה </td><td> חם </td><td> * קר יחסית </td></tr><tr><td> משקל </td><td> רווח של 1.5-2 גרם ליום </td><td> ללא עלייה במשקל או ירידה במשקל </td></tr><tr><td> התנהגות כאשר הניחו בכלוב </td><td> נע לכיוון אמא ומתחיל Feeding </td><td> לא יכול לזוז לכיוון אמא ומראה האכלת קושי </td></tr></tbody></table> 1. מערכת שולחן שבע נקודות ניקוד: שלושה הציונים הראשונים ברשימה הן בדרך כלל הסימנים הראשונים שנצפו. * ילודים עם טמפרטורת זיהום מערכתי ניסיון מוגבה גוף (&gt; 2 מעלות צלזיוס). עם זאת, בשל חוסר הגמישות של בעלי החיים כדי להגיע לאמא שלהם כדי לשמור על טמפרטורת גוף, בעלי חיים לא בריאים עשויים להיות מופרדים מהפסולת ומרגישים קר ליד החשופה.

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat at JoVE.com

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

כאן, הליך מתואר להקמת זיהום מערכתי בחולדה היילודים עם תרבויות של Escherichia coli K1. הליך בלתי פולשני זה מאפשר קולוניזציה של מערכת העיכול, טרנסלוקציה של הפתוגן למחזור המערכתי, ופלישה של מערכת העצבים המרכזית במקלעת דמית העין.

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; זיהום בעכברוש הילודים

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

non-invasive-model-neuropathogenic-escherichia-coli-infection

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

10.9K Views.  University College London.  כאן, הליך מתואר להקמת זיהום מערכתי בחולדה היילודים עם תרבויות של Escherichia coli K1. הליך בלתי פולשני זה מאפשר קולוניזציה של מערכת העיכול, טרנסלוקציה של הפתוגן למחזור המערכתי, ופלישה של מערכת העצבים המרכזית במקלעת דמית העין. 

Video: Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best advance translational objectives and uncover new therapeutic strategies for brain injury associated with preterm birth, preclinical models of EoP must include similar mechanisms of prenatal global injury observed in humans and involve multiple components of the maternal-placental-fetal system. Ideally, models should produce a similar spectrum of functional deficits in the mature animal and recapitulate multiple aspects of the pathophysiology. To mimic human systemic placental perfusion defects, placental underperfusion and/or chorioamnionitis associated with pathogen-induced inflammation in early preterm birth, we developed a model of prenatal transient systemic hypoxia-ischemia (TSHI) combined with intra-amniotic lipopolysaccharide (LPS). In pregnant Sprague Dawley rats, TSHI via uterine artery occlusion on embryonic day 18 (E18) induces a graded placental underperfusion defect associated with increasing CNS damage in the fetus. When combined with intra-amniotic LPS injections, placental inflammation is increased and CNS damage is compounded with associated white matter, gait and imaging abnormalities. Prenatal TSHI and TSHI+LPS prenatal insults meet several of the criteria of an EoP model including recapitulating the intrauterine insult, causing loss of neurons, oligodendrocytes and axons, loss of subplate, and functional deficits in adult animals that mimic those observed in children born extremely preterm. Moreover, this model allows for the dissection of inflammation induced by divergent injury types.

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Medicine

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

חוט השדרה עכבר בילוד דגם פגיעה דחיסה

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal inflammation and fibrosis ultimately resulting in declining kidney function. Before improved clinical management and prevention of pyelonephritis can be instituted, a reliable animal model must be established in order to study the mechanisms of progression, recurrence, and therapeutic efficacy. The transurethral infection model closely mimics human pyelonephritis but exhibits considerable variation due to its reliance on urethral reflux to transport the bacteria to the kidney. Herein, a detailed surgical protocol for performing bacterial injections into the rat renal pelvis is provided and confirmed by non-invasive Magnetic Resonance Imaging (MRI). Using this protocol, animals receive direct exposure to a desired concentration of E. coli bacteria and can fully recover from the surgical procedure with adequate post-operative care. This facilitates subsequent longitudinal MRI assessments of the experimental animal models for comparison with saline (sham) controls. Using this direct delivery approach, the severity of infection is controllable and applicable for mechanistic studies of progression as well as development of novel treatment strategies.

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

This manuscript describes a rat surgical model of pyelonephritis using direct intra-renal infection by Escherichia coli into the renal pelvis. The experimental procedure can be utilized to study the pathogenesis of pyelonephritis as well as the associated inflammation and fibrosis.

הזרקת Intranenal של<em&gt; Escherichia coli</em&gt; במודל עכברוש של Pyelonephritis

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal ...

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse polymicrobial sepsis can be induced by injecting cecal slurry intraperitoneally into day of life 7 mice and monitoring them for the following week. Presented here are the detailed steps necessary for the implementation of this neonatal sepsis model. This includes making a homogeneous cecal slurry stock, diluting it to a weight- and litter-adjusted dose, an outline of the monitoring schedule, and a definition of observed health categories used to define humane endpoints. The generation of a homogeneous cecal slurry stock from pooled donors allows for the administration into many litters over time, reducing the variation between donors, and preventing the use of potentially toxic glycerol. The monitoring strategy used allows for the anticipation of survival outcome and the identification of mice that would later progress to death, allowing for an earlier identification of the humane endpoint. Two main behavioral features are used to define the health scores, namely, the ability of the neonatal mice to right themselves when placed on their back and their level of mobility. These criteria could potentially be applied to address humane endpoints in other studies of neonatal disease in mice, as long as a pilot study is performed to confirm accuracy. In conclusion, this approach provides a standardized method to model newborn sepsis in mice, while providing resources to assess animal welfare used to define early humane endpoints for challenged animals.

This protocol provides the necessary steps to establish and evaluate neonatal sepsis in 7-day-old mice.

דגם עכבר מבוקר Neonatal אלח דם Polymicrobial

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

מודל הדמיה יילודים של אלח דם חיידקי גרם שלילי

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate across the gut invade the newborn's bloodstream, causing life-threatening bacteremia. The methodology presented here utilizes polarized intestinal epithelial cells grown on semipermeable inserts to assess the transcytosis of neonatal E. coli bacteremia isolates in vitro. This method uses the established T84 intestinal cell line that has the ability to grow to confluence and form tight junctions and desmosomes. After reaching confluence, mature T84 monolayers develop transepithelial resistance (TEER), which can be quantified using a voltmeter. The TEER values are inversely correlated with the paracellular permeability of extracellular components, including bacteria, across the intestinal monolayer. The transcellular passage of bacteria (transcytosis), on the other hand, does not necessarily alter the TEER measurements. In this model, bacterial passage across the intestinal monolayer is quantified for up to 6 h post-infection, and repeated measurements of TEER are made to monitor the paracellular permeability. In addition, this method facilitates the use of techniques such as immunostaining to study the structural changes in tight junctions and other cell-to-cell adhesion proteins during bacterial transcytosis across the polarized epithelium. The use of this model contributes to the characterization of the mechanisms by which neonatal E. coli transcytose across the intestinal epithelium to produce bacteremia.

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Escherichia coli&#160;causes sepsis in neonates who ingest the bacteria around the time of birth. The process involved in&#160;E. coli&#8217;s&#160;ability to travel from the enteric tract to the bloodstream is poorly understood. This&#160;in vitro&#160;model assesses the ability of&#160;E. coli&#160;strains to travel through the intestinal epithelial cells.

הערכה של טרנסציטוזה מעיים של חיידקי חיידקי חיידקי Escherichia coli ילודים

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.

מודל מורין של חשיפה עוברית לדלקת אימהית כדי ללמוד את ההשפעות של Chorioamnionitis חריפה על התפתחות מעיים שזה עתה נולד

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

מודל עכבר BALB /c יילודים של דלקת אנטרוקוליטיס נמק

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Early Pathological and Magnetic Resonance Detection of Cerebral Injury Using a Rat Model of Neonatal Hypoxic Ischemic Encephalopathy

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term neurodevelopmental outcomes. Early diagnosis is critical to identifying infants who may benefit from intervention; however, early diagnosis relies heavily on clinical criteria. No molecular or radiological tests have shown promise in detecting early cerebral injury. Studies have shown that magnetic resonance imaging (MRI) can show changes in both blood flow/ischemia and metabolic disruption. However, they have all been used to evaluate the secondary phase of the disease (&gt;12 h) after the onset of the injury. Early diagnosis is critical to rapidly starting therapeutic hypothermia in eligible infants, which is currently recommended to be initiated within 6 h of birth. The rat model of hypoxic-ischemic injury was developed in 1981 and has been validated and used extensively to study changes in brain perfusion, cerebral injury markers, and morphology. However, it has primarily been used as a "late model", evaluating injury several days after the initial ischemic insult. The model has been known to have poor sensitivity in evaluating reliable and reproducible early cerebral changes. The objective of this study was to develop a reliable model to study early gross morphological and radiological markers of HIE using pathological staining and cerebral magnetic resonance imaging/magnetic resonance spectroscopy.

The present protocol describes a rodent model of newborn hypoxic-ischemic injury for identifying early changes in cerebral tissue by gross morphology and magnetic resonance imaging. This has benefits over existing models, which can be used to study late injury but do not allow the evaluation of reproducible early changes.

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term ...

מודל Necrotizing Enterocolitis למחקרים מכניסטיים וגילוי תרופות

Microfluidic Model of Necrotizing Enterocolitis Incorporating Human Neonatal Intestinal Enteroids and a Dysbiotic Microbiome

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe and potentially fatal intestinal disease that has been difficult to study due to its complex pathogenesis, which remains incompletely understood. The pathophysiology of NEC includes disruption of intestinal tight junctions, increased gut barrier permeability, epithelial cell death, microbial dysbiosis, and dysregulated inflammation. Traditional tools to study NEC include animal models, cell lines, and human or mouse intestinal organoids. While studies using those model systems have improved the field&#39;s understanding of disease pathophysiology, their ability to recapitulate the complexity of human NEC is limited. An improved in vitro model of NEC using microfluidic technology, named NEC-on-a-chip, has now been developed. The NEC-on-a-chip model consists of a microfluidic device seeded with intestinal enteroids derived from a preterm neonate, co-cultured with human endothelial cells and the microbiome from an infant with severe NEC. This model is a valuable tool for mechanistic studies into the pathophysiology of NEC and a new resource for drug discovery testing for neonatal intestinal diseases. In this manuscript, a detailed description of the NEC-on-a-chip model will be provided.

Author Spotlight: שיפור אסטרטגיות הבנה וטיפול באמצעות מודל NEC-on-a-Chip 

This protocol describes an in vitro model of necrotizing enterocolitis (NEC), which can be used for mechanistic studies into disease pathogenesis. It features a microfluidic chip seeded with intestinal enteroids derived from the human neonatal intestine, endothelial cells, and the intestinal microbiome of a neonate with severe NEC.

מודל מיקרופלואידי של אנטרוקוליטיס נמקית המשלב אנטרואידים ממעיים של ילודים אנושיים ומיקרוביום דיסביוטי

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe and potentially fatal intestinal disease that has been difficult to study due to its complex pathogenesis, ...

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video