Name: non-invasive model of neuropathogenic escherichia coli infection in the neonatal rat
Uploaded: 2014-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat at JoVE.com

Bu çalışma Tıbbi Araştırma Konseyi araştırma hibeleri G0400268 ve MR / K018396 / 1 tarafından desteklenen ve Eylem Medical Research tarafından yapıldı. Daha fazla destek Sağlığı Araştırma University College London Hastaneleri Biyomedikal Araştırma Merkezi için Ulusal Enstitüsü tarafından sağlandı.

Bu çalışmada gerçekleştirilen tüm hayvan deneyleri, ulusal ve Avrupa mevzuatına uyduğu ve Eczacılık UCL Okulu Etik Komitesi ve İngiltere Home Office (HO) tarafından onaylanmıştır. HO projesi kapsamında yürütüldüğü bütün hayvan çalışmaları PPL 80/2243 ve PPL 70/7773 lisanslar. 1. Fare Hazırlama <ol><li> Patojen-free Wistar neonatal sıçan kullanarak tüm in vivo deneyler yürütmek. </li><li> 21 ° C, 45 - -% 55 nem, 15-20 hava değişikliği / saat ve optimum koşullarda (19 altında, - (11 haftalık kadın 9) kendi emzikli anneler ile bireysel kafeslere tüm sıçan ibrelerin (koloni başına 12 yenidoğan) saklayın 12 st ışık / karanlık döngüsü). </li></ol> 2. Bakteriyel hücrelerin hazırlanması <ol><li> Mağaza E. -80 ° C&#39;de% 20 (h / h) gliserol, E. coli K 1 stokları. Her deney için, agar plakaları Mueller-Hinton (MH) üzerine stok bakterileri plaka ve 37 ° CO / N inkübe. </li><li> Beslenme, inocu gün önceBir tek E ile MH suyu geç 10 mi E. coli K1 koloni ve kültür O / 37 ° C, 200 rpm&#39;de K. Orta kontaminasyonu için bir kontrol olarak, aşılanmamış MH suyu 10 ml hazırlamak ve 200 rpm&#39;de 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Aktarım MH suyu 9,9 ml &#39;si içerisine göre O / N bakteri süspansiyonu, 100 ul (1: 100 hacim / hacim), ve orta üslü faz 0.6&#39; lik bir optik yoğunluğa karşı gelen, ulaşana kadar, 37 ° C, 200 rpm&#39;de inkübe 600 nm (OD 600), bir dalga boyunda ölçülmüştür. </li></ol> E. ile Yenidoğan Sıçan 3. Besleme coli K1 <ol><li> Yavaşça ağız açmak için izin, ensesinden tek elle dikey hayvan tutun. Yavaşça hayvanın ağzına Steril bir pipet ucu yerleştirin ve 30 saniyelik bir süre boyunca hayvanın ağzına aşı (~ 37 ° C) pipet 20 ul. Hemen beslendikten sonra annesine hayvan dönün. </li><li> 8 x 10 6 bakteri t beslenmiş - 4 doğrulayıno seri PBS inokulum seyreltme ve MH agar plakaları üzerine tespit ederek, her yavru. </li></ol> E. tarafından Kolonizasyon 4. Değerlendirme coli K1 <ol><li> Yavaşça ensesinden itibaren bir yandan hayvan tutun. Steril PBS içinde steril pamuk uçlu çubukla ıslatın ve sonra yavaşça perianal bölgeyi çubukla. Hemen swabbing sonra anne hayvan dönün. </li><li> Steril PBS içinde 300 ul ihtiva eden bir tüp içine pamuklu çubuk ucu ile ve buz üzerinde muhafaza edin. </li><li> PBS içinde seri seyreltme ile canlı bakteri sayısını belirlemek MacConkey agar plakaları üzerine kaplama. </li><li> Canlı E. belirleyin bakteriyofaj duyarlılık testleri ile coli K1. Steril bir mikrobiyolojik döngü kullanarak bireysel bir koloni almak, girdap karıştırma sonra tabi steril PBS, 200 ul içine batırılmış. </li><li> Düz bir çizgi MH agar üzerine steril bir mikrobiyolojik döngü, alt-kültür kullanarak. Plaka 30 saniye süreyle kurumaya, ve sonra bac 10 ul pipet izin verteriophage K1E çizgisinin merkezi üzerine (10 9 plak birim / ml (pfu / mL) oluşturulması). 37 ° C&#39;de plaka O / N inkübe edin. </li><li> Bir sonraki gün, bakteriyofaj aracılı liziz için plaka inceleyin. </li></ol> Hastalık Şiddeti 5. Değerlendirme <ol><li> Tablo 1&#39;de özetlenen yedi nokta skorlama sistemi kullanılarak 5 kez günlük - 4 her bir hayvanın hastalık şiddetini değerlendirmek. </li><li> Bir hayvan puanları 7 takım ≥3, hemen acıyı en aza indirmek için hayvan itlaf. Ölü hayvan kaydedin. </li></ol> Yenidoğan Sıçanlar ve Kan Toplama 6. Euthanization <ol><li> Yavaşça başını ve boynunu açığa bir yandan hayvan tutun. Alkollü bir bezle silerek hayvanın boynunu dezenfekte edin. Iz etanolü çıkarmak için steril PBS içinde yıkamadan önce,% 70 etanol kullanılarak makas büyük bir çift dezenfekte. </li><li> Yavaşça bir Petri kabı üzerinde doğrudan hayvan tutun. Keskin Surgi kullanarak yenidoğan işten çıkarmakKan Petri kabı içine damlalar sağlamak cal makas. Cilt florası ile kan bulaşmasını önlemek için kafa temastan kaçının. </li><li> Hemen bir steril pipet kullanılarak, kan toplamak ve 20 arasında bir konsantrasyonda, heparin, sodyum tuzu ile karıştırmak - 0.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde, 50 birim / ml. </li><li> PBS içinde seri seyreltme ile canlı bakteri sayısını belirlemek MacConkey agar plakaları üzerine kaplama. Canlı E. numaraların belirlenmesidir bakteriyofaj K1E için canlı bakteri duyarlılığını test ederek coli K1. </li></ol> 7. Diseksiyon <ol><li> Neonatal sıçan Dekapitasyon takiben, tüketim ve ilgi dokuları toplamak için aseptik koşullarda kullanın. % 70 etanol ve steril PBS içinde (Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi) tüm araçları yıkayın. </li><li> Diseksiyon kurulu temizleyin ve% 70 etanol ile tamamen karın ıslak. Sol arka bacak çivileme sırtında cesedi yerleştirin ve (i) diseksiyon kurulu düzeltmeksteril bir iğne ile operasyon masası, (ii) cesedi germe ve işlem tablosuna doğru ön bacağını bağlantılarını, (iii) işlem tablosuna, sağ arka bacak, sol ön bacağını çivileme. </li><li> Forseps kullanarak alt karın sol tarafında deri çekin, sonra küçük diseksiyon makas kullanılarak sternum alt karın cesedin sol tarafında kesti. </li><li> Sternum eksizyonu uzatın ve ardından altta yatan yapıların hiçbirinin hasar sağlanması forseps ve küçük diseksiyon makas kullanarak alt karın sternum cesedin sağ tarafında, aşağı. </li><li> Son olarak, yavaşça periton maruz İris kavisli diseksiyon forseps kullanarak alt karın sternum flep aşağı çekin. </li><li> Temel organlarının hiçbirinin hasar sağlanması, forseps ile yavaşça periton yükseltmek ve iç organları açığa dikey kesilmiş. </li></ol> 8. ToplamaGI Yolu <ol><li> Mide, ince bağırsak, çekum, kolon ve mezenterik lenf sistemi tanımlamak. </li><li> Yavaşça iki tarafında transecting tarafından mide kaldırmak, daha sonra steril forseps kullanarak steril PBS 1.6 ml içeren bir bijou içine koyun. </li><li> Rektum kolon transect. Dikkatlice steril Petri kabındaki diseksiyon forseps ve yer kullanarak cesedinden tüm bağırsak kitle çekin. Bağırsak yapısı ve mezenterik lenf yapıları ayrı kalmamanız bu nazikçe yapılır emin olun. </li></ol> GI sistemi ve mezenterik lenf Sistemin 9. Ayırma (Şekil 2) <ol><li> Gastrointestinal sistem tamamen daldırılır sağlanması, bir Petri kabı içine steril PBS, 30 ml dökün. </li><li> Mezenterik lenf sisteminin merkezi kitle tespit ve ince diseksiyon forseps kullanarak çimdik. Ince bağırsağın proksimal kısmına tespit ve ince diseksiyon forseps kullanarak çimdik. </li><li> Yavaşça Centra çekinmezenterik lenf sistemi ve iki doku kadar bunları karşıt istikametlerde distal ince bağırsağın L kütle bütünüyle birbirinden ayrılır. Bu proksimal, orta ve distal bölgelerde tekrarlanabilir toplanmasını engeller olarak, ince bağırsak gergin değil emin olmak için dikkatle bu işlemi gerçekleştirmek. 300 mezenterik lenf sistemi yerleştirin - steril PBS içinde 500 ul ve buz üzerine yerleştirin. </li></ol> GI Yolu 10. Kesit <ol><li> Kolondan gelen ince bağırsağa ayırmak için çekum de gastrointestinal sistem transeksiyonu. </li><li> 300 kolon yerleştirin - 500 ul steril PBS ve buz üzerine yerleştirin. </li><li> İnce bağırsak, yakın orta ve uzak bölgelerden gelen temsilcisi dokuları toplayın. Orta noktasından ince bağırsak hizalayın. </li><li> Daha sonra, (i) distal ince bağırsak gibi çekuma önce doku son 2 cm toplanması, (ii) 5 den doku toplamak - yakınsal ince bağırsak gibi orta noktasının üzerinde 7 cm, veOrta ince bağırsak gibi orta noktasının altında 5 cm -, (iii) 3 &#39;den gelen doku toplanır. </li></ol> 11. Karaciğer Toplama <ol><li> Mide çıkarılmasından sonra sıçan karaciğer üç lobu belirlenmesi. </li><li> Uzakta ince diseksiyon forseps kullanılarak karın boşluğundan lobları çekin. </li><li> Ince makas kullanarak herhangi takılarak ligament kesilerek karaciğer çıkarın. Buz üzerinde 500 ul steril PBS ve yer - 300 karaciğer yerleştirin. </li></ol> 12. Dalak Toplama <ol><li> Dalak tanımlayın. </li><li> Uzakta mide dalak çekin ve gastrosplenic ligament kesmek için ince makas kullanın. </li><li> Buz üzerinde 500 ul steril PBS ve yer - 300 dalak yerleştirin. </li></ol> 13. Böbrekler Toplama <ol><li> Gastrointestinal sistem ve diğer organ çıkarılmasından sonra karın boşluğunun arka görülebilir hale gelecektir böbrekleri belirlenmesi. </li><li> Kesim üreter ve herhangi takılarak ligament uince diseksiyon makas şarkı ve ince forseps kullanılarak böbrekleri kaldırın. Adrenal bezleri ve ince forseps ve diseksiyon makas kullanılarak (hala bağlıysa) herhangi bir yağ malzemelerini çıkarın. </li><li> 300-500 ul steril PBS içinde her iki böbreği koyun ve buz üzerine yerleştirin. </li></ol> 14. Beyin Toplama <ol><li> Başlarının kesilmesi işleminden sonra, kıvrık forsepsler kullanılarak dik bir konumda kafa tutun. Uzunlamasına kavisli bir forseps başka bir dizi kullanarak başınızın üstüne cilt Pinch, ve ince diseksiyon makas kullanarak bir kesi yapmak. Boyun yakın kalan cilt, yine uzunlamasına ince diseksiyon makas kesti. </li><li> Ince diseksiyon makas kullanılarak deri kanatlar kafatası ortaya ve ortadan kaldırmak her iki tarafta ince forseps kullanarak dışa doğru cilt çekin. Spinal açılış ince diseksiyon makas yerleştirin ve kürsüden doğru kafatası boyunca bir kesi yapmak. </li><li> Ince forseps kullanarak dışarıya doğru bir yönde kafatası iki bölümünü de çekin. Kafatası parçalarını kaldırmak için kesti. </li><li&gt; kürsüsünden doğru spinal açıklıktan yukarı doğru bir scooping hareket kullanan, geniş forseps kullanarak beyin çıkarın. Decapitation prosedürden herhangi bir kan çıkarmak için iki kez PBS içinde beyin yıkayın. </li></ol> 15. Doku İşleme ve Homojenizasyon <ol><li> Steril PBS içeren tüpler içine canlılığı sayım veya DNA çıkarma, yer dokuları gerektiren deneyler için. Hemen kısa dönem için% 20 gliserol ile, -20 ° C&#39;de PBS içinde seri seyreltme ve MacConkey agar plakaları üzerine kaplama veya deposu tarafından canlı bakteri sayısını belirler. DNA ekstraksiyonu, -20 ° C&#39;de mağaza dokular için. </li><li> RNA ekstraksiyonu, RNAlater çözeltisinin uygun hacim içine bir yer dokular (1 mg doku başına 10 ul) gerektiren deneyleri için, daha sonra, kısa süreli ya da -80 ° C&#39;de uzun süreli depolama -20 ° C &#39;de hemen saklayın. </li><li> 10 mi metakarn çözeltisi içinde görüntüleme gerektiren deneyler, bir yer dokularda (% 60 metanol,% 30 kloroform ve% 10 asetik asit), daha sonra da bir mağazat RT - 3 haftaya kadar (20 25 ° C). </li><li> Önce ve dokulara ilave edildikten sonra tüpler ağırlıkça karşılaştırılmasıyla doku ağırlığı hesaplayın. Bir homojenleştirici kullanılarak dokular homojenize edilir. Her numunenin homojenleştirilmesi arasında, steril PBS içinde bir kez% 70 etanol ile iki kez homojenize edici yıkayın. NOT: metakarn sabitleme müsin ilgili mukozal savunma yapılarını korumak amacıyla bağırsak örneklerinin tespiti için arzu edilir; Formalin sabitleme sistemik dokular için kullanılabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Harvey, D., Holt, D. E., Bedford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+meningitis+in+the+newborn:+a+prospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Bacterial meningitis in the newborn: a prospective study of mortality and morbidity.</a> 23 (5), 218-225 (1999).</li><li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+diagnosis,+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis.">Epidemiology diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 23 (3), (2010).</li><li>Silva, L. P. A., Cavalheiro, L. G., Queir&#243;s, F., Nova, C. V., Lucena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+newborn+bacterial+meningitis+and+sepsis+during+the+pregnancy+period+for+public+health+care+system+participants+in+Salvador,+Bahia,+Brazil.">Prevalence of newborn bacterial meningitis and sepsis during the pregnancy period for public health care system participants in Salvador, Bahia, Brazil.</a> J. Infect. Dis. 11 (2), 272-276 (2007).</li><li>Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+of+the+newborn:+basic+mechanisms+and+clinical+correlates.">Innate immunity of the newborn: basic mechanisms and clinical correlates.</a> Nat. Rev. Immunol. 7 (5), 379-390 (2007).</li><li>Robbins, J. B., et al., Med, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+K1+capsular+polysaccharide+associated+with+neonatal+meningitis.">Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis.</a> N. Eng. J. 290 (22), 1216-1220 (1974).</li><li>Korhonen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hemolysin+production,+and+receptor+recognition+of+Escherichia+coli+strains+associated+with+neonatal+sepsis+and+meningitis.">hemolysin production, and receptor recognition of Escherichia coli strains associated with neonatal sepsis and meningitis.</a> Infect. Immun. 48 (2), 486-491 (1985).</li><li>Rutishauser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysialic+acid+in+the+plasticity+of+the+developing+and+adult+vertebrate+nervous+system.">Polysialic acid in the plasticity of the developing and adult vertebrate nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (1), 26-35 (2008).</li><li>Koedel, U., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+experimental+bacterial+meningitis.">Models of experimental bacterial meningitis.</a> Infect. Dis. Clin. North Am. 13 (3), 549-577 (1999).</li><li>Tunkel, A. R., Scheld, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+pathophysiology+of+bacterial+meningiits.">Pathogenesis and pathophysiology of bacterial meningiits.</a> Clin. Microbiol. Rev. 6 (2), 118-136 (1993).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+K1+capsule+is+the+critical+determinant+in+the+development+of+Escherichia+coli+meningitis+in+the+rat.">The K1 capsule is the critical determinant in the development of Escherichia coli meningitis in the rat.</a> J. Clin. Invest. 90 (3), 897-905 (1992).</li><li>Obata-Yasuoka, M., Ba-Thein, W., Tsukamoto, T., Yoshikawa, H., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+Escherichia+coli+share+common+virulence+factor+profiles,+serotypes+and+phylogeny+with+other+extraintestinal+E.+coli.">Vaginal Escherichia coli share common virulence factor profiles, serotypes and phylogeny with other extraintestinal E. coli.</a> Microbiology. 148 (9), 2745-2752 (2002).</li><li>Sarff, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Escherichia+coli+K1+in+healthy+and+diseased+newborns.">Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns.</a> Lancet. 305 (7916), 1099-1104 (1975).</li><li>Schiffer, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review:+relation+between+invasiveness+and+the+K1+capsular+polysaccharide+of+Escherichia+coli.">A review: relation between invasiveness and the K1 capsular polysaccharide of Escherichia coli.</a> Pediatr. Res. 10 (2), 82-87 (1976).</li><li>Palmer, C., Bik, E. M., DiGuilio, D. B., Relman, D. A., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+human+infant+intestinal+microbiota.">Development of the human infant intestinal microbiota.</a> PLoS Biol. 5 (7), 1556-1573 (2007).</li><li>Nassif, X., Bourdoulous, S., Eug&#232;ne, E., Couraud, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+extracellular+pathogens+cross+the+blood-brain+barrier.">How do extracellular pathogens cross the blood-brain barrier.</a> Trends Microbiol. 10 (5), 227-232 (2002).</li><li>Moxon, E. R., Glode, M. P., Sutton, A., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infant+rat+as+a+model+of+bacterial+meningitis.">The infant rat as a model of bacterial meningitis.</a> J. Infect. Dis. 136, 186-190 (1977).</li><li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+innate+defenses+in+the+neonatal+gastrointestinal+tract+in+response+to+colonization+by+neuropathogenic+Escherichia+coli.">Altered innate defenses in the neonatal gastrointestinal tract in response to colonization by neuropathogenic Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 81 (9), 3264-3275 (2013).</li><li>Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensins:+antimicrobial+peptides+of+innate+immunity.">Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 3 (9), 710-720 (2003).</li><li>Bevins, C. L., Salzman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells,+antimicrobial+peptides+and+maintenance+of+intestinal+homeostasis.">Paneth cells, antimicrobial peptides and maintenance of intestinal homeostasis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9 (5), 356-368 (2011).</li><li>Moxon, E. R., Smith, A. L., Averill, D. R., Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+meningitis+in+infant+rats+after+intranasal+inoculation.">Haemophilus influenzae meningitis in infant rats after intranasal inoculation.</a> J. Infect. Dis. 129 (2), 154-162 (1974).</li><li>Bortolussi, R., Ferrieri, P., Bj&#246;rkst&#233;n, B., Quie, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsular+K1+polysaccharide+of+Escherichia+coli:+relationship+to+virulence+in+newborn+rats+and+resistance+to+phagocytosis.">Capsular K1 polysaccharide of Escherichia coli: relationship to virulence in newborn rats and resistance to phagocytosis.</a> Infect. Immun. 25 (1), 293-298 (1979).</li><li>Glode, M. P., Sutton, A., Moxon, E. R., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+neonatal+Escherichia+coli+meningitis:+induction+of+bacteremia+and+meningitis+in+infant+rats+fed+E.+coli+K1.">Pathogenesis of neonatal Escherichia coli meningitis: induction of bacteremia and meningitis in infant rats fed E. coli K1.</a> Infect. Immun. 16 (1), 75-80 (1977).</li><li>Pluschke, G., Mercer, A., Kuse&#263;ek, B., Pohl, A., Achtman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+bacteremia+in+newborn+rats+by+Escherichia+coli+K1+is+correlated+with+only+certain+O+(lipopolysaccharide)+antigen+types.">Induction of bacteremia in newborn rats by Escherichia coli K1 is correlated with only certain O (lipopolysaccharide) antigen types.</a> Infect. Immun. 39 (2), 599-608 (1983).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+capsule-selective+endosialidase+E+minimizes+changes+in+organ+gene+expression+induced+by+experimental+systemic+infection+with+Escherichia+coli+K1.">Administration of capsule-selective endosialidase E minimizes changes in organ gene expression induced by experimental systemic infection with Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 156 (7), 2205-2215 (2010).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+the+polysialyl+capsule+during+blood-to-brain+transit+of+neuropathogenic+Escherichia+coli+K1.">Differential expression of the polysialyl capsule during blood-to-brain transit of neuropathogenic Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 154 (8), 2522-2532 (2008).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+cure+of+systemic+Escherichia+coli+K1+infection+by+modification+of+the+bacterial+phenotype.">Prevention and cure of systemic Escherichia coli K1 infection by modification of the bacterial phenotype.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 48 (1), 1503-1508 (2004).</li><li>Achtman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+widespread+bacterial+clones+among+Escherichia+coli+K1+isolates.">Six widespread bacterial clones among Escherichia coli K1 isolates.</a> Infect. Immun. 39 (1), 315-335 (1983).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+experimental+Escherichia+coli.+infection+with+recombinant+bacteriophage-derived+capsule+depolymerase.">Treatment of experimental Escherichia coli. infection with recombinant bacteriophage-derived capsule depolymerase.</a> J. Antimicrob. Chemother. 56 (5), 160-165 (2005).</li><li>Gross, R. J., Cheasty, T., Rowe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+bacteriophages+specific+for+the+K1+polysaccharide+antigen+of+Escherichia+coli.">Isolation of bacteriophages specific for the K1 polysaccharide antigen of Escherichia coli.</a> J. Clin. Microbiol. 6 (6), 548-550 (1977).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Burada açıklanan hayvan modeli doğal olarak insanlarda enfeksiyonlara meydana gelen belirgin özellikleri yeniden amaçlanmıştır önceki çalışmaları üzerine inşa edilmiştir. Yenidoğan rat başlangıçta H. nedeniyle bebek menenjit çalışmaya istihdam edildi tür enfeksiyon sağlam bir model için önemli kriterleri yerine b influenza tip. Böylece, ilgili patojenin giriş portal doğal insan enfeksiyonu bunu yansıtmalıdır ve tekrarlanabilir bir terapötik müdahale için izin vermek için yeterli bir süre benzer patolojiye neden olmaktadır. Teknikler işleminin uygulanabilirliğinin sınırlandırmamalıdır kullanılmış ve hastalık sonucu 20 yol açmamalıdırlar. H. modeli Moxon ve arkadaşları tarafından geliştirilen bebek farelerde influenza menenjit bu kriterleri 20 karşılamaktadır; üst solunum yolları ve bu önemli özelliği mukoza zarlarının kolonizasyonu olmayan travmasının sıçan yavrularından çoğaltılmış sonra doğal enfeksiyon meydanaBurun geçişlerinin zarları üzerine bakterilerin tik uygulanmasını kapsamaktadır. Önemli olarak, enfeksiyonun yaşa bağlı doğası modelinde tekrarlanmıştır. Aynı grup, aynı zamanda E. non-invaziv bir model geliştirmek için ilk idi Yenidoğan sıçan 22 coli K1 NBM. Patojen-free Sprague-Dawley yavrular oral gastrik tüp aracılığıyla 10 Ağustos - 10 Ekim bakterileri besleyerek kolonize edildi; aşı bu nedenle bize göre istihdam bundan çok daha yüksekti. Üç K1 suşları incelenmiş olan kolonizasyon, C94 (O7: K1: H-), EC3&#39;ün (O1: K1: H-) ve LH (O75: K1: H 3), nispeten yüksek bir oranda (48-74%) arasında meydana gelen hayvanlar K1-beslenen, ancak bakteriyemi, menenjit ve mortalite insidansı değişken ve kolonizasyon oranlarının anlamlı olarak daha düşüktü. E. klonal doğası coli K1 deneysel enfeksiyon geç 23 kurulmuş ve sadece Ø18 olduğu açıktır: K1 ve, bir dereceye kadar, O7: K1 serotipi edebiliyoruzsürekli sistemik enfeksiyona neden. Bu nedenle, neuropathogenic E. patojenez için bu araştırmalar için K1 soyu A192PP: E. coli K1 hastalık oluşturma geliştirilmiş Ø18 kullanımına dayanmaktadır. E. karşılaştırılması tarafından mukoza yüzeylerine zararlardan dolayı kesinlikle eski yöntem kullanılarak ölüm aşırı sayılarını Achtman grubunun 23 tarafından kullanıldığı gibi Glöde ve arkadaşları 22, ve bir damla besleme kullanılan metod ile kullanılabilir ortaya çıktığı gibi bir mide tüpü aracılığıyla yenidoğan sıçanlarda, coli K1 beslenmesi gastrik tüp. Kolonizasyon oranları, bu iki yöntem ile benzer olduğu için, bu iletişim de tarif edildiği gibi, bu, steril bir ucu ile bir pipet kullanılarak, bakterilerin besleme az invaziv yöntemi kullanmak tavsiye edilir. Çalışmalarımızda kullanılan E. coli A192PP Ø18 olduğu: K1. Bu klinik suş E. daha öldürücü türevidir Başlangıçta septisemi 27 olan bir hastadan elde edildi Coli A192 </&gt; sup. Soyunun artan hastalık oluşturma yeni doğmuş sıçanlarda 26 boyunca bir seri pasaj olarak elde edildi. 2 gün eski hayvanlara 28 uygulandığında gerilme% 100 bakteriyemi ve mortalite ile, yaşa bağlı bir hastalık şiddetini ortaya çıkarmaktadır. Buna karşılık, 9 gün eski hayvanlar hastalığa karşı dirençlidir. K1 spesifik litik bakteriyofaj, E. ayırt etmek için kullanılabilir Diğer E. Coli K1 coli 29 suşları. Bu çalışmada, bakteriyofaj K1E için canlı bakterilerin duyarlılık E. saflığını kontrol (i) için kullanılmalıdır E. coli K1 süspansiyonlar hayvanlara yem olarak hazırlanmıştır, ve (ii) E. ayırt etmek için perianal sürüntü, kan ve doku örneklerinde canlılığını hesaplamak için diğer koliform gelen coli K1. Koloni E. ise E. coli K1, bu bakteriyofaj K1E lize duyarlı olacaktır ve bakteri üremesi bakteriyofaj inokülasyon yerinde önlenir. Koloni E. değilse coli K1, o b olacakKİE bakteriyofaj liziz dirençli, e ve bakteriyofaj inokülasyon yerinde bakteri büyümesinin bir alan olmalıdır. Bu hayvan modelleri doğal olarak oluşan hastalığın tüm özelliklerini yansıtmıyor olabileceği akılda tutulmalıdır. Mevcut model E dışındaki neuropathogenic bakterilerin hastalık oluşturma özelliklerini incelemek üzere değiştirilebilir E. coli A192PP ve kolonize aşı boyutunda farklılıklar yerleştirilebilir. Tekniğinin gelecek uygulamaları çok ihtiyaç duyulan ilaçların değerlendirilmesi durumu tedavi etmek ve kolonizasyon ve doku işgali konak yanıtının ayrıntılarını ortaya çıkarmak için içerebilir. Burada açıklanan yöntem basit ama etkili. 10 Tek yavrular - 12 yavruların test veya kontrol grubu olarak istihdam edildi ve bu kapsamda-çöp yaklaşım tekrarlanabilirlik ve istatistiksel geçerlilik yüksek derecede sağlar. Bu yavrular herhangi bir prosedüründe sonra en kısa sürede kendi doğal annelerine iade edilir zorunludurE ve yavrular bu nedenle farklı müdahaleler geçiren hayvanlar ihtiva etmemelidir. Bu beslenen aşı aksi yavrular sunulan kültürünü reddetmek olacaktır ısındı olması önemlidir. Yavrular hızlı bir şekilde karmaşık Mikrobiyota geliştirmek ve doğum iki gün içinde GI bebek ve yetişkin bağırsağında en bol bulunan mikroplar olarak kurulan filum bakterilerin geniş bir yelpazesi ile kolonize olur. E. beslenen değil yavrular coli A192PP E. taşımak yok kolonizasyon oranlarının coli K1 GI bölgesinde 17 ve bu nedenle saptanması nispeten basittir. Bununla birlikte, neus E. kolonize tespiti için QPCR yöntem tabanlı coli K1 geleneksel kültür yöntemleri olduğunu çok daha hassas ve şiddetle 17 tavsiye edilir.

Sistemik bakteriyel enfeksiyonlar refahı ve yenidoğanın hayatta kalması için büyük bir tehdittir; Erken bebekler özellikle hassastır. Sık sık bakteriyel sepsis ile ilişkili neonatal bakteriyel menenjit (NBM), yaşamın ilk birkaç haftasında mortalite ve morbidite önemli bir kaynak olmaya devam ediyor ve sorun cephe antibakteriyel ilaçlara 1,2 direnç sürekli evrim ile şiddetlenir. NBM olgusu yüksek, tıbbi, sosyal ve ekonomik yükü 3 taşıyan acil bir tıbbi durumdur; Sonuç olarak, enfeksiyonun yükünü azaltmak için, yeni tedavi ve, özellikle de, bu yeni profilaktik stratejileri için acil bir ihtiyaç vardır. NBM bazı özellikleri sıradışı: gelişmiş ülkelerde, Escherichia coli ve B grubu streptokok hemen hemen her zaman koruyucu bir polisakarit ca varlığı ile ilişkili vakaların büyük çoğunluğunda ve NBM ortaya çıkarmak için bu soyların kapasitesinden sorumlubağışıklık tanıma kaçmasına patojeni sağlayan psule 4 işler. Neuroinvasive E. - (85% 80) çok yüksek bir oranı coli K1 kapsülü 5,6, nöronal plastisite 7 modülatörlerini ev sahipliği yapısal özdeş olan bir α-2,8-bağlı polysialic asit polimeri ifade eder. Yeni tedavi ve NBM yönelik profilaktiklerde ve ilgili bakteriyemi ve sepsis değerlendirilmesi açık bir şekilde, özellikle güçlü bir yaş-bağımlılık ve enfeksiyonunun doğal yolu, insan yenidoğanlarda hastalığın başlıca özelliklerini taklit eden enfeksiyonun sağlam bir hayvan modelinde yararlanacak . Gram-pozitif ve Gram-negatif bakteriyel menenjit modelleri geniş bir yelpazede 8,9 mevcuttur ve bu ölçüde, bu enfeksiyonların patogenezi, patofizyolojisi ve tedavi seçenekleri hakkındaki bilgimizi genişletilmiş var. Bu durumda, fare, sıçan, tavşan ve maymun deneysel enfeksiyonları n menenjit incelemek için kullanılmıştıreonate ve yetişkin. Ancak, bu modellerin birçoğu kolonizasyon sitesinden yayılması doğal süreçlerini atlayarak bir yapay patogenezi yaratarak, enfeksiyon başlaması için bakterilerin direkt intrasisteraal veya deri altı enjeksiyon kullanır. Bazı durumlarda inokülasyon Bu yöntemler patolojisinde önemli değişikliklere yol açtı; Örneğin, E. deri altına coli K1 suşları yenidoğan ve yetişkinlerde 10 hem de bakteriyemi ve merkezi sinir sistemi (MSS) işgali üreten, doğal enfeksiyon ile ilişkili yaş bağımlılık ortadan kaldırmıştır. E. yatkınlık coli NBM de bebeğin anneden etkenin dikey geçiş kritik bağımlı veya doğumdan hemen 11 sonradır. E. maternal türetilmiş coli K1 bakteriler doğumda steril ama hızla karmaşık bir mikrobiyotasını 14 kazanır Yenidoğan gastrointestinal (GI) yolu 11-13, kolonize. Kolonize yenidoğanlarda, E. coliK1 bakterilerin kan-beyin ya da kan-beyin-omurilik sıvısı engellerin 9,15 arasında merkezi sinir sistemini girmeden önce sistemik dolaşıma bağırsak lümeninden translokasyonunda kapasitesine sahiptir. Deneysel enfeksiyon sağlam modellerinin tasarımı dikkate bu ayrıntıları almalıdır. Farenin yaygın bakteriyel menenjit 8 bazı şekillerinin çalışma için kullanılmış olmasına rağmen, bunlar, neonatal enfeksiyon çalışmalar için uygun değildir: bunlar, sistemik enfeksiyon ile aşırı insan bebeklerin 16 güçlü bir yaş bağımlılık özelliği göstermezler. Bundan başka, α-defensinler, E. tarafından sistemik işgaline karşı koruma sağlayan GI bölgesinin önemli peptidler E. coli K1 17, yüksek insanlarda ve farelerde, Paneth hücreleri ve nötrofillerde ama farelerde 18 olarak ifade edilmiştir. Bir diğer bulunmayan çoğaltma, yedekleme ve fare defensin heterojenlikten ve ilgili cryptidin genlerin dikkate değer bir derecede olduğunu19 imals. Yenidoğan sıçan başlangıçta Moxon tarafından kullanılan ve coworkers 20 intranazal inokülasyon aşağıdaki Hemofilus influenza menenjiti patogenezi araştırmak için, insanda bu yenidoğan patojenin kolonizasyonu doğal siteyi kopyalayan ve sonra yaşa bağlı E. için uyarlandı coli K1 bakteriyemi ve menenjit. BORTOLUSSI ve diğ., Bakteriyel inokulum 21 çalışan intraperitoneal enjeksiyon enfeksiyon başlatmak için, ancak önemli Glöde çalışma ve Gl kolonizasyonundan sonra enfeksiyonunun doğal yolu ile paralel 22 kullanılan oral gastrik besleme coworkers. Gastrik tüp mukozal yüzeylere zarar verebilir gibi, prosedür yenidoğanlarda 23 inokulum beslenmedir için rafine oldu. Burada, gastrointestinal sistem kolonizasyonu ve açıklanan duyarlı sıçan yavrularında enfeksiyonu izleme prosedürleri için yöntem; ayrıca, modelin terapötik ve önleyici uygulamalar tartışılmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Pathogen-free Wistar rats (12 x neonate, 1 x lactating mother)</td><td><a href="http://www.harlan.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Harlan, UK</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli K1 A192PP</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>Bacteriophage K1E</td><td><a href="http://www.ucl.ac.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Taylor lab</a></td><td></td><td>Mushtaq &lt;em&gt;et al.&lt;/em&gt; 2004</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton Agar</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0037</td><td></td></tr><tr><td>Mueller-Hinton Broth</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0405</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey Agar</td><td><a href="http://www.oxoid.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Oxoid, UK</a></td><td>CM0007</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol 100%</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Sodium Salt</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>84020</td><td>Prepare 20 - 50 units/ml</td></tr><tr><td>RNAlater Solution</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>R0901</td><td>10 &amp;mu;l/mg tissue</td></tr><tr><td>Acetic Acid</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>320099</td><td></td></tr><tr><td>Chloroform</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>C2432</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>322415</td><td></td></tr><tr><td>Cotton-tipped swabs</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>11542483</td><td></td></tr><tr><td>Alcotip Swabs</td><td><a href="http://www.scientificlabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Scientific Laboratory Supplies, UK</a></td><td>SWA1000</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Sigma, UK</a></td><td>P5856</td><td></td></tr><tr><td>30 ml Universal Tube</td><td><a href="http://www.alphalabs.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> AlphaLaboratories, UK</a></td><td>CW3890</td><td></td></tr><tr><td>0.5 ml microcentrifuge tubes</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>I1405-1500</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml microcentrifuge tubes</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>I1415-1000</td><td></td></tr><tr><td>0.1 &amp;mu;l calibrated loops</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>E1412-0112</td><td></td></tr><tr><td>L-shaped spreaders</td><td><a href="http://www.starlab.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> StarLab, UK</a></td><td>E1412-1005</td><td></td></tr><tr><td>Cuvettes</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>10594175</td><td></td></tr><tr><td>Forceps straight with fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12780036</td><td></td></tr><tr><td>Forceps straight with blunt tips</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12391369</td><td></td></tr><tr><td>Forceps watchmaker&#039;s curved with very fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12740926</td><td></td></tr><tr><td>Scissors straight with very fine points</td><td><a href="http://www.fisher.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Fisher Scientific, UK</a></td><td>12972055</td><td></td></tr><tr><td>Laboratory Scissors</td><td><a href="http://www.vwr.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> VWR, UK</a></td><td>USBE4251</td><td></td></tr><tr><td>25 G Syringe Needles</td><td><a href="http://www.greinerbioone.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Greiner Bio-One Ltd</a></td><td>N2525</td><td></td></tr><tr><td>LAMBDA 25 UV/Vis Spectrophotometers</td><td><a href="http://www.perkinelmer.co.uk" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> PerkinElmer, UK</a></td><td>L60000BB</td><td></td></tr><tr><td>Unitemp Incubator</td><td>B&amp;amp;T, UK</td><td>OP958</td><td></td></tr><tr><td>Multitron shaking incubator</td><td><a href="http://www.infors-ht.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> INFORS HT, UK</a></td><td>AJ118</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Turrax T-10 homogenizer</td><td><a href="http://www.ika.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> IKA Werke</a></td><td>0003737000</td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive model of neuropathogenic escherichia coli infection in the neonatal rat

Istihdam enfeksiyon modeli doğal enfeksiyon temel özelliklerini çoğaltır eğer hayvan sahibi ve bakteriyel patojen arasındaki etkileşimlerin incelenmesi anlamlıdır. Bu protokolünün neonatal sıçanda neuropathogenic Escherichia coli K1 sistemik enfeksiyon oluşturulması ve değerlendirme usulleri tarif etmektedir. Mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu enfeksiyonun bağırsak lenf kan-beyin istikameti boyunca patojenin yayılmasına yol açar ve model güçlü bir yaş bağımlılığını gösterir. E. A suşu coli Ø18: yenidoğan sıçan için geliştirilmiş virülansa K1 kolonizasyon derece yüksek oranları, kan bölmesi ve koroid pleksus üzerinden transit aşağıdaki menenjlerin işgaline translokasyonu üretir. Insan vücudunda gibi, merkezi sinir sistemi penetrasyon iltihaptan ve değişmez ölümcül sonucu ile eşlik eder. Model mekanizmasının çalışmalar için kanıtlanmış bir tedavi yaklaşımıdırpatogenezi, terapötik müdahalelerin değerlendirilmesi ve bakteriyel virulans değerlendirilmesi için.

E. Burada anlatılan coli K1 sistemik enfeksiyon modeli insanlarda doğal enfeksiyon özellikleri birçok çoğaltır. Bakterileri, gastrointestinal sistem kolonize beynin 24 bağlantılı iltihap ile organa özgü hastalığı sağlamadan önce mezenterik lenf düğümleri üzerinden kan bölmesine transloke, sindirilen. Önemlisi, model, güçlü bir yaş bağımlılık görüntüler; Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi, iki gün yaşlı (P2) sıçan yavruları invaziv hastalığa son derece duyarlı olan, ancak yedi günlük bir süre içinde hayvanlar enfeksiyon giderek daha dirençli olur, ama sistem kolonizasyonu 17 GI değil. Kan bölmesine GI kolonizasyon sitesinden geçiş sonra, bakteriler koroid pleksus 25 ağırlıklı olarak merkezi sinir sistemini girmeden önce floresan mikroskobu (Şekil 4) tarafından alınan kan örneklerinde görülebilir. Bazı hayvanlarda, bu gibi diğer ana organların yaygın invazyonakciğer, dalak ve böbrek 25. Dokulardaki bakteri sayısı tek yavruların 25 arasında ama esas olarak değişebilir biyolojik yük mevcut olan ya da organ tutulumuna konusunda tekrarlanabilirliği yüksek olduğu için mevcut olarak skorlanmıştır zaman. Tek bir test kohort olarak 12 yavrular bir çöp ile, G * Güç Yazılımı kullanarak güç hesapları bu örneklem büyüklüğü altı kohortundan hayvanları ve eğer tüm&gt;% 99 olasılık kullanarak hayatta dayalı bir etkisi bulma% 98.6 olasılık eşittir tespit oniki dikkate alınır. Bu model, özellikle yeni doğan bakteriyel enfeksiyonların tedavisi için uygun yeni maddelerin değerlendirilmesi için elverişlidir ve selektif bir şekilde bakteriyel yüzey 24-26 den K1 kapsül kaldırır EndoE depolimeraz kapsülün terapotik potansiyelini değerlendirmek üzere prosedüründe kullanılmıştır. Ayrıca konak-bakteri etkileşimlerini pat üzerinde etkisi araştırmak için kullanılan olabilirE. patogenezinde immün sisteme E. coli neuropathogens; Bu bağlamda o, E. çalışmalar için istihdam edilmiştir coli A192PP kolonizasyon ve yaygınlaştırma. Bu ispat edilmiştir, E. E. coli A192PP hücreleri, çok sayıda P2, P5 ve P9 yavruların GI bölgesinde devam; Bu üç grupta kolonizasyon zamansal yönleri (Şekil 5) çok benzer ve çoğaltmak ve bağırsak içinde nüfus yoğunluğunu korumak için bakterilerin kapasitesini yansıtır. Klinik izolat A192 ve hastalık oluşturma hayvan kullanımı için çok küçük bir fazlalık sağlamak amacıyla, yeni doğmuş sıçanlarda bir seri pasaj olarak geliştirilmiştir. E. coli A192,% 100 verimle P2 yenidoğan sıçanlar hayvanların kolonize% 35 bakteriyemi ortaya çıkardı ve% 25 27 öldürücü etkisi yarattı. Pasajlamaya türevi A192PP, gastrointestinal sistem kolonize bakteriyemi üretir ve tüm P2 yavrular ölüme neden olmaktadır. Bu sistem, di ölümcüllüğünü araştırmak için kullanılabilecektirfferent K1 kolonizasyon sitesinden CNS ve diğer organ sistemlerini işgal etme kapasitesine göre suşları. Bu bağlamda, Plüschke ve arkadaşları 23 95 E. kapasitesini belirlemek için bir yenidoğan sıçan enfeksiyon modeli kullanılır coli K1 gut kolonizasyon sonrası bakteriyemi neden insan kaynaklı suşları; ve E. klonal doğasını destekleyen, kolonizasyon ve invazif yeteneği hem de etkinliği geniş varyasyonlar gözlemlenmiştir coli K1 neuropathogens. <img alt="Şekil 1," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" width="600" /> Şekil doku toplama 1. Malzemeler: (A) terazi, (B) gerekli ortamı içeren önceden tartılmış tüpler, (C) operasyon masası, cetvel ve hayvan aşağı pin iğneler, (D)% 70 (v / v) etanol ve PBS, doku toplama ekipmanı sterilize etmek <ssterilizasyonu için trong&gt; (E) dokuları korumak için hayvanın başı kesildikten için makas ve makas ve cımbız ve çeşitli boyut ve şekillerde, (F), buz içinde bıçakları büyük bir çift de dahil olmak üzere doku toplama takımı (G)% 70 (h / h) etanol operasyon masa ve çevreler. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" width="600" /> Şekil 2. GI bölgesinin ayrılması ve mezenterik lenf sistemi. (A) Kavrama ince diseksiyon forseps ile mezenterik lenf sisteminin merkezi kitle. (B) Kavrama ince bağırsağın proksimal ve zıt yönlerde çekin. (C) GI ve mezenterik lenf sistemi tamamen separat olacake. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig3highres.jpg" width="500" /> E. oral uygulaması sonraki dokuz gün (sayfa 9) iki gün (P2) arasında değişen yenidoğan sıçan yavrularından Şekil 3. Yaşam coli A192PP, sistemik enfeksiyon güçlü bir yaş bağımlılık gösteren. Her grup 24 yenidoğanlar temsil eder. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" width="600" /> E. Şekil 4. Floresan görüntüleri P2 yavru bir kan yaymasında coli A192PP hücreleri bakteri oral uygulanmasından sonra enfekte. bakteri yüzeyinde lipopolisakkaritin O antijeni st oldutavşan anti-Ø18 poliklonal antikoru ve Alexa546-konjuge keçi-anti-tavşan ikinci antikoruyla ained. K1 kapsül EndoE-GFP reaktif ile görüntülendi. Hemen hemen kan örneklerinde saptanan tüm bakteriler koruyucu K1 kapsülü görüntülenir. Görüntüler Dr Andrea ZELMER tarafından esir edildi. <a href="https://jove.unicartagenaproxy.elogim.com/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig5highres.jpg" width="500" /> Şekil 5. E. bakteriyel inokulum. DNA coli A192PP bağırsak kolonizasyonu aşağıdaki İdarenin tüm bağırsak ve E. çıkarılmıştır polysialyltransferase (neus) genini hedef kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) ile tespit E. coli K 1 koloni oluşturan birim / gr (CFU / g), doku başka bir yerde 17 tarif edildiği gibi </sus&gt;. LOD: algılama sınırı. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Özellik </td><td> Sağlıklı </td><td> Sağlıksız </td></tr><tr><td> Derinin rengi </td><td> Pembe </td><td> Sarı / Soluk </td></tr><tr><td> Çeviklik (doğrulma refleksi) </td><td> Pup hemen geri yerleştirme tersine </td><td> Geriye yerleştirme (&gt; 3 sn) tersine çevirmede zorluk veya elde edemez </td></tr><tr><td> Karın üzerinde hafif bir basınç </td><td> Ses yok </td><td> Ajitasyon Ses </td></tr><tr><td> Mide / süt hattı </td><td> Görünür ve beyaz </td><td> Görünür değil </td></tr><tr><td> Sıcaklık </td><td> Sıcak </td><td> Nispeten soğuk * </td></tr><tr><td> Ağırlık </td><td> Günde 1.5-2 g Kazanç </td><td> Hiçbir kilo alma veya kilo kaybı </td></tr><tr><td> Kafese yerleştirildi Davranış </td><td> Annesine karşı hamle ve f başlareeding </td><td> Annesine karşı hareket ve beslenme zorluklar gösterir olamaz </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Yedi-noktalı puanlama sistemi: Listelenen ilk üç puanları genellikle gözlenen ilk işaretleridir. * Sistemik enfeksiyon deneyim yükselmiş vücut sıcaklığında (&gt; 2 ° C) ile Yenidoğanlar. Ancak nedeniyle hayvanların çeviklik eksikliği vücut ısısını korumak için annelerini ulaşmak için, sağlıksız hayvanların çöp ayrı düşebilirler ve çıplak elle soğuk hissedebilirsiniz.

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat at JoVE.com

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

non-invasive-model-neuropathogenic-escherichia-coli-infection

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

10.9K Görüntüleme.  University College London.  Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir. 

Video: Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

Perinatal İskemi Hipoksik İskemik Ensefalopati Modeli

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Biyoloji

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

This protocol outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and colitis, as well as the methods used to characterize Citrobacter rodentium infection in mice. C. rodentium is a gram negative, murine specific bacterial pathogen that is closely related to the clinically important human pathogens enteropathogenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli. Upon infection with C. rodentium, immunocompetent mice suffer from modest and transient weight loss and diarrhea. Histologically, intestinal crypt elongation, immune cell infiltration, and goblet cell depletion are observed. Clearance of infection is achieved after 3 to 4 weeks. Measurement of intestinal epithelial barrier integrity, bacterial load, and histological damage at different time points after infection, allow the characterization of mouse strains susceptible to infection.
The virulence mechanisms by which bacterial pathogens colonize the intestinal tract of their hosts, as well as specific host responses that defend against such infections are poorly understood. Therefore the C. rodentium model of enteric bacterial infection serves as a valuable tool to aid in our understanding of these processes. Enteric bacteria have also been linked to Inflammatory Bowel Diseases (IBDs). It has been hypothesized that the maladaptive chronic inflammatory responses seen in IBD patients develop in genetically susceptible individuals following abnormal exposure of the intestinal mucosal immune system to enteric bacteria. Therefore, the study of models of infectious colitis offers significant potential for defining potentially pathogenic host responses to enteric bacteria. C. rodentium induced colitis is one such rare model that allows for the analysis of host responses to enteric bacteria, furthering our understanding of potential mechanisms of IBD pathogenesis; essential in the development of novel preventative and therapeutic treatments.

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infection provides a valuable model to study enteric bacterial infections as well as host immune responses and colitis in mice. This protocol outlines the measurement of barrier integrity, pathogen load and histological damage allowing for the thorough characterization of pathogen and host contributions to murine infectious colitis.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best advance translational objectives and uncover new therapeutic strategies for brain injury associated with preterm birth, preclinical models of EoP must include similar mechanisms of prenatal global injury observed in humans and involve multiple components of the maternal-placental-fetal system. Ideally, models should produce a similar spectrum of functional deficits in the mature animal and recapitulate multiple aspects of the pathophysiology. To mimic human systemic placental perfusion defects, placental underperfusion and/or chorioamnionitis associated with pathogen-induced inflammation in early preterm birth, we developed a model of prenatal transient systemic hypoxia-ischemia (TSHI) combined with intra-amniotic lipopolysaccharide (LPS). In pregnant Sprague Dawley rats, TSHI via uterine artery occlusion on embryonic day 18 (E18) induces a graded placental underperfusion defect associated with increasing CNS damage in the fetus. When combined with intra-amniotic LPS injections, placental inflammation is increased and CNS damage is compounded with associated white matter, gait and imaging abnormalities. Prenatal TSHI and TSHI+LPS prenatal insults meet several of the criteria of an EoP model including recapitulating the intrauterine insult, causing loss of neurons, oligodendrocytes and axons, loss of subplate, and functional deficits in adult animals that mimic those observed in children born extremely preterm. Moreover, this model allows for the dissection of inflammation induced by divergent injury types.

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

Prematüre Modelleme Ensefalopati Sıçanlarda İçi amniyotik Lipopolisakkarid ile Prenatal Hipoksi-iskemi kullanma

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

Tıp

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal inflammation and fibrosis ultimately resulting in declining kidney function. Before improved clinical management and prevention of pyelonephritis can be instituted, a reliable animal model must be established in order to study the mechanisms of progression, recurrence, and therapeutic efficacy. The transurethral infection model closely mimics human pyelonephritis but exhibits considerable variation due to its reliance on urethral reflux to transport the bacteria to the kidney. Herein, a detailed surgical protocol for performing bacterial injections into the rat renal pelvis is provided and confirmed by non-invasive Magnetic Resonance Imaging (MRI). Using this protocol, animals receive direct exposure to a desired concentration of E. coli bacteria and can fully recover from the surgical procedure with adequate post-operative care. This facilitates subsequent longitudinal MRI assessments of the experimental animal models for comparison with saline (sham) controls. Using this direct delivery approach, the severity of infection is controllable and applicable for mechanistic studies of progression as well as development of novel treatment strategies.

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

This manuscript describes a rat surgical model of pyelonephritis using direct intra-renal infection by Escherichia coli into the renal pelvis. The experimental procedure can be utilized to study the pathogenesis of pyelonephritis as well as the associated inflammation and fibrosis.

Intrarenal enjeksiyon<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Piyelonefritli Sıçan Modelinde

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal ...

A Novel Human Epithelial Enteroid Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease of newborn infants. It is characterized by multiple pathophysiologic alterations in the human intestinal epithelium, leading to increased intestinal permeability, impaired restitution, and increased cell death. Although there are numerous animal models of NEC, response to injury and therapeutic interventions may be highly variable between species. Furthermore, it is ethically challenging to study disease pathophysiology or novel therapeutic agents directly in human subjects, especially children. Therefore, it is highly desirable to develop a novel model of NEC using human tissue. Enteroids are 3-dimensional organoids derived from intestinal epithelial cells. They are ideal for the study of complex physiologic interactions, cell signaling, and host-pathogen defense. In this manuscript we describe a protocol that cultures human enteroids after isolating intestinal stem cells from patients undergoing bowel resection. The crypt cells are cultured in media containing growth factors that encourage differentiation into the various cell types native of the human intestinal epithelium. These cells are grown in a synthetic, collagenous mix of proteins that serve as a scaffold, mimicking the extra-cellular basement membrane. As a result, enteroids develop apical-basolateral polarity. Co-administration of lipopolysaccharide (LPS) in media causes an inflammatory response in the enteroids, leading to histologic, genetic, and protein expression alterations similar to those seen in human NEC. An experimental model of NEC using human tissue may provide a more accurate platform for drug and treatment testing prior to human trials, as we strive to identify a cure for this disease.

Enteroids are emerging as a novel model in the study of human disease. The protocol describes how to simulate an enteroid model of human necrotizing enterocolitis using lipopolysaccharide (LPS) treatment of enteroids generated from neonatal tissue. Collected enteroids demonstrate inflammatory changes akin to those seen in human necrotizing enterocolitis.

Bir roman insan epitel Enteroid nekrotizan enterokolit modeli

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a devastating disease of newborn infants. It is characterized by multiple pathophysiologic alterations in the human ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a protocol for studying the pathogenesis of E. coli O1:K1:H7, a serotype responsible for high mortality rates in neonates. Our method utilizes intravital imaging of neonatal pups at different time points during the progression of infection. This imaging, paralleled by measurement of bacteria in the blood, inflammatory profiling, and tissue histopathology, signifies a rigorous approach to understanding infection dynamics during sepsis. In the current report, we model two infectious inoculums for comparison of bacterial burdens and severity of disease. We find that subscapular infection leads to disseminated infection by 10 h post-infection. By 24 h, infection of luminescent E. coli was abundant in the blood, lungs, and other peripheral tissues. Expression of inflammatory cytokines in the lungs is significant at 24 h, and this is followed by cellular infiltration and evidence of tissue damage that increases with infectious dose. Intravital imaging does have some limitations. This includes a luminescent signal threshold and some complications that can arise with neonates during anesthesia. Despite some limitations, we find that our infection model offers an insight for understanding longitudinal infection dynamics during neonatal murine sepsis, that has not been thoroughly examined to date. We expect this model can also be adapted to study other critical bacterial infections during early life.

Infection of neonatal mice with bioluminescent E. coli O1:K1:H7 results in a septic infection with significant pulmonary inflammation and lung pathology. Here, we describe procedures to model and further study neonatal sepsis using longitudinal intravital imaging in parallel with enumeration of systemic bacterial burdens, inflammatory profiling, and lung histopathology.

Gram-Negatif Bakteriyel Sepsisin Yenidoğan Görüntüleme Modeli

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate across the gut invade the newborn's bloodstream, causing life-threatening bacteremia. The methodology presented here utilizes polarized intestinal epithelial cells grown on semipermeable inserts to assess the transcytosis of neonatal E. coli bacteremia isolates in vitro. This method uses the established T84 intestinal cell line that has the ability to grow to confluence and form tight junctions and desmosomes. After reaching confluence, mature T84 monolayers develop transepithelial resistance (TEER), which can be quantified using a voltmeter. The TEER values are inversely correlated with the paracellular permeability of extracellular components, including bacteria, across the intestinal monolayer. The transcellular passage of bacteria (transcytosis), on the other hand, does not necessarily alter the TEER measurements. In this model, bacterial passage across the intestinal monolayer is quantified for up to 6 h post-infection, and repeated measurements of TEER are made to monitor the paracellular permeability. In addition, this method facilitates the use of techniques such as immunostaining to study the structural changes in tight junctions and other cell-to-cell adhesion proteins during bacterial transcytosis across the polarized epithelium. The use of this model contributes to the characterization of the mechanisms by which neonatal E. coli transcytose across the intestinal epithelium to produce bacteremia.

Assessment of Intestinal Transcytosis of Neonatal Escherichia coli Bacteremia Isolates

Escherichia coli&#160;causes sepsis in neonates who ingest the bacteria around the time of birth. The process involved in&#160;E. coli&#8217;s&#160;ability to travel from the enteric tract to the bloodstream is poorly understood. This&#160;in vitro&#160;model assesses the ability of&#160;E. coli&#160;strains to travel through the intestinal epithelial cells.

Yenidoğan Escherichia coli Bakteriyemi İzolasyonlarının İntestinal Transsitozunun Değerlendirilmesi

Newborns ingest maternal E. coli strains that colonize their intestinal tract around the time of delivery. E. coli strains with the ability to translocate ...

A Murine Model of Fetal Exposure to Maternal Inflammation to Study the Effects of Acute Chorioamnionitis on Newborn Intestinal Development

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing enterocolitis (NEC). However, a mechanistic link between these two conditions remains yet to be discovered. We have adopted a murine model of chorioamnionitis involving lipopolysaccharide (LPS)-induced fetal exposure to maternal inflammation (FEMI). This model of FEMI induces a sterile maternal, placental, and fetal inflammatory cascade, which is also present in many cases of clinical chorioamnionitis. Although models exist that utilize live bacteria and more accurately mimic the pathophysiology of an ascending infection resulting in chorioamnionitis, these methods may cause indirect effects on development of the immature intestinal tract and the associated developing microbiome. Using this protocol, we have demonstrated that LPS-induced FEMI results in a dose-dependent increase in pregnancy loss and preterm birth, as well as disruption of normal intestinal development in offspring. Further, we have demonstrated that FEMI significantly increases intestinal injury and serum cytokines in offspring, while simultaneously decreasing goblet and Paneth cells, both of which provide a first line of innate immunity against intestinal inflammation. Although a similar model of LPS-induced FEMI has been used to model the association between chorioamnionitis and subsequent abnormalities of the central nervous system, to our knowledge, this protocol is the first to attempt to elucidate a mechanistic link between chorioamnionitis and later perturbations in intestinal development as a potential link between chorioamnionitis and NEC.

We developed a model of chorioamnionitis to simulate fetal exposure to maternal inflammation (FEMI) without complications of live organisms to examine the effects of FEMI on development of the offspring&#8217;s intestinal tract. This allows for study of mechanistic causes for development of intestinal injury following chorioamnionitis.

Akut Chorioamnionitis'in Yenidoğan Bağırsak Gelişimi Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Anne İltihaba Fetal MaruzIyetin Bir Murine Modeli

Chorioamnionitis is a common precipitant of preterm birth and is associated with many of the morbidities of prematurity, including necrotizing ...

A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight infants, with high mortality and unclear pathogenesis. The cause of NEC may be related to inflammatory immune regulatory system abnormalities. An NEC animal model is an indispensable tool for NEC disease immune research. NEC animal models usually use C57BL/6J neonatal mice; BALB/c neonatal mice are rarely used. Related studies have shown that when mice are infected, Th2 cell differentiation is predominant in BALB/c mice compared to C57BL/6J mice. Studies have suggested that the occurrence and development of NEC are associated with an increase in T helper type 2 (Th2) cells and are generally accompanied by infection. Therefore, this study used neonatal BALB/c mice to induce an NEC model with similar clinical characteristics and intestinal pathological changes as those observed in children with NEC. Further study is warranted to determine whether this animal model could be used to study Th2 cell responses in NEC.

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Early Pathological and Magnetic Resonance Detection of Cerebral Injury Using a Rat Model of Neonatal Hypoxic Ischemic Encephalopathy

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term neurodevelopmental outcomes. Early diagnosis is critical to identifying infants who may benefit from intervention; however, early diagnosis relies heavily on clinical criteria. No molecular or radiological tests have shown promise in detecting early cerebral injury. Studies have shown that magnetic resonance imaging (MRI) can show changes in both blood flow/ischemia and metabolic disruption. However, they have all been used to evaluate the secondary phase of the disease (&gt;12 h) after the onset of the injury. Early diagnosis is critical to rapidly starting therapeutic hypothermia in eligible infants, which is currently recommended to be initiated within 6 h of birth. The rat model of hypoxic-ischemic injury was developed in 1981 and has been validated and used extensively to study changes in brain perfusion, cerebral injury markers, and morphology. However, it has primarily been used as a "late model", evaluating injury several days after the initial ischemic insult. The model has been known to have poor sensitivity in evaluating reliable and reproducible early cerebral changes. The objective of this study was to develop a reliable model to study early gross morphological and radiological markers of HIE using pathological staining and cerebral magnetic resonance imaging/magnetic resonance spectroscopy.

The present protocol describes a rodent model of newborn hypoxic-ischemic injury for identifying early changes in cerebral tissue by gross morphology and magnetic resonance imaging. This has benefits over existing models, which can be used to study late injury but do not allow the evaluation of reproducible early changes.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler