מחקרים פרוביוטיים, בעכברים יילודים באמצעות gavage. הקדמה, פרוטוקול וידאו זה יפרט את ההתקנה ואת ההליך עבור gavaging פרוביוטיקה לעכבר יילודים, ביום החיים השני שלה. האוסף הסטרילי של המעיים, לניתוח מיקרוביום מעיים, מפורט גם בפרוטוקול זה.
חלק מהתוצאות הייצוגיות, נכללות גם בפרוטוקול זה, כדי להציג חלק מסוגי הנתונים, שניתן להפיק מהליך זה. גבאז' תוך-ושט של עכבר יילודים, יום החיים השני. מניחים את כלוב הסכר באותו מכסה המנוע שבו, כלובים ניסיוניים ממוקם על כרית החימום, כרית החימום מוגדרת לרמה בינונית, שהוא כ 38 מעלות צלזיוס.
הסר כמה קינון אדמה מכלוב הבית, לשפשף את הקינון בידיים כפפות כדי להעביר את הריחות, של חומר הקינון על הכפפה. זה מקטין את העברת ריחות זרים, על הגור כאשר מטופלים. זה בתורו מפחית את הסיכון, של נטישה או קניבליזציה, על ידי הסכר בשל ריחות זרים.
כאשר הגורים מוחזרים לכלוב הבית, לאחר ההליך. צרו קן אחזקות חרוטי, והמקמו אותו בכלוב הניסוי החדש והסטרילי, שהתחמם מראש. מעבירים את כל הגורים מכלוב הבית, לכלוב הניסיוני.
הזז את הגורים לתוך הקינון חרוט, בכלוב הניסיוני. מוציאים את כלוב הסכר ומ מניחים אותו, הרחק מאזור הגוועינג. זה מפחית את התנאים המלחיצים עבור הסכר, על ידי מניעת הסכר לשמוע את הגור, עושה את ההליך.
פתח את אריזות המזרק לגישה נוחה. מוציאים את מחט ההזנה האוטומטית, בצורה סטרילית, ומצמידים אותה לראש המזרק. המחט נשטפת עם 70% אתנול, ומים, לפני autoclaving.
סטים שונים של מחטי האכלה, משמשים בין קבוצות הטיפול והבקרה, כדי למנוע זיהום צולב. צייר את פתרון הצבע הפרוביוטי לתוך המזרק, הפוך וצליף באצבע כדי להסיר בועות, וריק מקום בנפח בתוך המזרק. משוך בחזרה על הבוכנה כדי לנקות את הנוזל, מן המחטים שטח מת, ולאחר מכן לדכא את הבוכנה, כדי לגרש בועות אוויר ואוויר, זה חשוב להבטיח, כי אין בועות אוויר gavaged, לתוך החיה.
כוונן את עוצמת הקול הרצויה במזרק, ליום של חיים שני עכברים, לא יותר מ 30 microliters צריך להיות gavaged. הסימון השחור שאתה רואה על המחט, מציין את האורך המרבי, כי המחט ניתן להכניס לתוך העכבר. אורך זה מתקבל על ידי מדידה חיצונית, האורך בין האף לתהליך xiphoid.
מניחים את המזרק על משטח סטרילי, מסירים את הגור כדי להיות gavaged מכלוב הניסוי, ולבחון סימנים בריאותיים. סימנים בריאותיים אלה כוללים, נשימה קבועה וצבע ורוד של העור. מניחים את הגור על גיליון שומרי מצוות סטריליים, על כרית החימום.
לשמן את המשטח החיצוני של מחט האכלה, באמצעות הממס המשמש להמסת פרוביוטיקה. הנה זה מים דקסטרוז, מתקנים אלה הכניסה החלקה של המחט, לתוך הוושט של החיה. לקשקש את הגור על ידי העור על הצוואר, באמצעות האגודל והאצבע המורה שלך.
אחוז במזרק בידך הדומיננטית, בתצב המאפשר לך להכניס את המחט, ודכא את הבוכנה מבלי להתאים את האצבעות. הכנס את הנורה של מחט האכלה בזווית של 45 מעלות, עד שהוא מגיע האחורי של הפה. לסובב את היד שלך עם המחט ממך, תוך החזקת הנורה של המחט במקום, פעם המחט היא פשוטה עם פלג הגוף העליון, זה יתחיל להחליק.
ודא שאין לחץ נוסף מוחל על המזרק, כדי לעורר את התנועה. תהליך הבליעה יהיה איטי, וסבלנות היא המפתח. ככל שהגור מזדקן בליעת המחט, תהפוך למהירה וקלה יותר.
מחט ההאכלה סומנה מראש, כדי למנוע מהנורה להיכנס לקיבה. לאחר הסימון מתקרב חוטם, לעצור את התנועה של המחט, ולאט לאט לספק את הפתרון פרוביוטיקה. לאחר השלמת המשלוח, להסיר את המחט לאט.
מניחים את העכבר על כרית החימום ולצפות להתאוששות. רפלקס מתנשף נפתר וקצב הלב עולה, צבע ורוד בריא מופיע שוב, רפלקס התנשפות לא פתור לאחר 45 שניות, מצביע על gavage נכשל ואת העכבר חייב להיות המתת דם. צבע gavage צריך להיות גלוי דרך העור החיוור, הצבע צריך להיות גלוי רק באזור, שבו כתמי החלב נמצא בדרך כלל.
הכליאה לצבע לקיבה, מצביעה על גבאז' מוצלח. אם הצבע נמצא בחלל בית החזה, או בכל חלל אחר מאשר הקיבה, יש להותיע את העכבר, כיוון שהוא מצביע על הבטן הכושלת. יש צורך בלחץ מינימלי, כדי לקשקש יום של עכבר שני בחיים.
סימנים של scruffing קשה יכול לכלול, חוסר יכולת לנשום, התנשפויות משמעותיות, והדבקת הלשון החוצה במשך זמן רב. כמה הצעות להליך gavaging, לנוח את החלק האחורי של האצבע הידיים מגרדות שלך, על כף היד מחזיק את המזרק, זה מבטיח את תנוחת הגורים יציבה, במהלך ההליך ואת המחט, לא זז בתוך החיה. במהלך gavage, המשקל של המחט, יקל על ההזזה, לאפשר את המחט להיבלע על ידי הגור, מבלי להפעיל כל לחץ חיצוני.
החזירו את הגורים לכלוב הסכר, ועקבו אחר הניטור לפי לוח הזמנים שלכם. אוסף של דגימות מעיים לניתוח קולוניזציה. החיה הייתה בהרת דם אנושית, בשיטות שאושרו בפרוטוקול טיפול ושימוש בבעלי חיים.
השולחן הכירורגי מרופד מחצלת סופגת סטרילית. הכלים עברו עיקור באמצעות 70 אחוז אתנול, ועיקור פעימה חמה ב 250 מעלות צלזיוס. השירות החיצוני של החיה, הוא חיטוי עם 70 אחוז אתנול.
חותכים את העור החיצוני באמצעות מדפים ומספריים, לארבעה רבעים, תוך נקיטת זהירות רבה, כדי לא לגרד את החצץ. תוחב את העור לצד כך, peritoneum חשוף היטב. השתמש בכלים סטריליים שונים, חדשים, כדי לחתוך את peritoneum פתוח, ולנקוט זהירות נוספת לא לגרד, האיברים הפנימיים בתהליך זה.
אתר את הקיבה של הגור, ומהדק על התריסום. באמצעות שני מטלאים סטריליים, לאתר את הבטן, ולאתר את הקצה התריסים של הבטן. מהדקים ישר בצומת, בבטן ובתריסרון.
השתמש בשני מדפים סטריליים חדשים כדי להפעיל את המעיים, להשתמש בכוח אחד להחזיק את התריסום, תוך שימוש השני לקרוע כל רקמת חיבור, מחזיק את המעיים שלמים. כפי שאתה לפענח, למקם את המעיים, על כרית סופג סטרילי מכסה את החיה. אם יקרה לך לקרוע את המעיים, במהלך הליך ההתפרקות, לסמן את האזור שבו הוא קרע, כך הכיוון של המעי הוא שלם.
מהדק בקצה רקטלי, ולעשות חתכים בשני המהדקים. מניחים את המעי שלם, על רדיד אלומיניום מסומן סטרילי בכיוון הנכון. סמן את כל החלקים של המעי, הכרחי לניתוח הבא שלך.
DNA מופק ממעיים אלה, באמצעות הליך מיצוי אופטימיזציה, וניתוח QPCR נעשה כדי לכמת את פרוביוטיקה. הדנ"א מופק ממעיים טריים, או שניתן לאחסן את המעיים, ב-80 מעלות צלזיוס שליליות באמצעות קופסת מקפיא. תוצאות מייצגות, פלנטריום לקטובצילוס, קולוניזציה עם gavage כל יום וכל יומיים.
אות LP גבוה יותר נצפתה במעיים של עכברים, gavaged כל יומיים, בהשוואה לעכברים gavaged כל יום. לכן, הם ניסויים הבאים נבנו, באמצעות gavages כל יומיים. לקטובצילוס plantarum gavaged עכברים, שוכנים במשותף עם עכברים ungavaged.
אותות משתנים של LP נצפו בעכברים לא מטופלים, שהיו שוכנים במשותף עם עכברים gavaged LP. התפשטות הקולוניזציה של LP, אפשרית עם חברי המלטה, ולכן תנאי הטיפול, הופרדו על ידי כלובים לניסויים הבאים שלנו. מסקנה, הליך זה יכול לשמש כדי לספק, כמויות מדויקות של כל נוזל לעכברים שזה עתה נולדו.
הדגימה של המעיים ניתן לשער, כדי לחקור את השינויים microbiome, באמצעות שיטות אחרות של ניתוח. היקף הסרטון הזה הוא לספק פלטפורמה, לחוקרים להשתמש במודלים gavage עכבר יילודים, כדי להבין את המנגנונים מאחורי ההשפעות שנצפו, עם ניהול מוקדם של פרוביוטיקה. תודה מיוחדת לצוות מעבדת קולמן, שירותי הטיפול בבעלי חיים של, אוניברסיטת קולומביה הבריטית, על שאפשרו את המחקר הזה.
