Probiotische Studien, bei neonatalen Mäusen mit Gavage. Einführung, dieses Video-Protokoll wird die Einrichtung und Verfahren für gavaging Probiotika zu einer neonatalen Maus detailliert, an ihrem Tag des Lebens zwei. Die sterile Darmsammlung zur Darmanalyse ist auch in diesem Protokoll detailliert.
Einige repräsentative Ergebnisse sind auch in diesem Protokoll enthalten, um einige der Arten von Daten einzuführen, die aus dem Befolgen dieses Verfahrens abgeleitet werden können. Intra-ösophageale Gavage der neonatalen Maus, Tag des Lebens zwei. Legen Sie den Dammkäfig in die gleiche Haube, in der die versuchsweisekäfige auf dem Heizkissen platziert sind, das Heizkissen ist auf mittleres Niveau eingestellt, das ist etwa 38 Grad Celsius.
Entfernen Sie einige Erde Nistplätze aus dem Hauskäfig, reiben Sie die Verschachtelung mit Handschuhen, um die Düfte, des Nistmaterials auf den Handschuh zu übertragen. Dies reduziert die Übertragung von ausländischen Düften, auf den Welpen, wenn behandelt. Dies wiederum reduziert das Risiko, der Aufgabe oder Kannibalisierung durch den Damm aufgrund fremder Düfte.
Wenn die Welpen in den heimischen Käfig zurückgebracht werden, nach dem Eingriff. Erstellen Sie ein konisch geformtes Haltenest und legen Sie es in den neuen und sterilen Versuchskäfig, der vorgewärmt wurde. Übertragen Sie alle Welpen aus dem heimischen Käfig in den Versuchskäfig.
Bewegen Sie die Welpen in die konische Verschachtelung, in den Versuchskäfig. Entfernen Sie den Käfig des Damms und legen Sie ihn weg vom Staubereich. Dies reduziert die stressigen Bedingungen für den Damm, indem der Damm daran gehindert wird, den Welpen zu hören, das Verfahren zu tun.
Öffnen Sie die Spritzenverpackung für einen einfachen Zugang. Entfernen Sie die Auto-Clave-Gavage-Fütterungsnadel auf sterile Weise und befestigen Sie sie am Kopf der Spritze. Die Nadel wird vor dem Autoklavieren mit 70% Ethanol und Wasser gewaschen.
Verschiedene Sätze von Fütterungsnadeln werden zwischen den Behandlungs- und Kontrollgruppen verwendet, um Kreuzkontaminationen zu vermeiden. Zeichnen Sie die probiotische Farbstofflösung in die Spritze, invertieren und flicken Sie mit dem Finger, um Blasen zu entfernen, und leeren Raum im Volumen in der Spritze. Ziehen Sie auf dem Kolben zurück, um Flüssigkeit zu löschen, aus den Nadeln Totraum, und dann drücken Sie den Kolben, um Luft und Luftblasen zu vertreiben, ist dies wichtig, um sicherzustellen, dass keine Luftblasen in das Tier gegavagt werden.
Passen Sie das gewünschte Volumen in der Spritze, für einen Tag des Lebens zwei Maus, nicht mehr als 30 Mikroliter gavaged werden. Die schwarze Markierung, die Sie auf der Nadel sehen, gibt die maximale Länge an, dass die Nadel in die Maus eingeführt werden kann. Diese Länge wird durch externe Messung der Länge zwischen schnupz und dem xiphoiden Prozess ermittelt.
Legen Sie die Spritze auf eine sterile Oberfläche, entfernen Sie den Welpen, der aus dem Versuchskäfig gegavagt werden soll, und achten Sie auf Gesundheitszeichen. Diese gesundheitlichen Zeichen sind, regelmäßige Atmung und rosa Färbung der Haut. Legen Sie den Welpen auf das sterile Beobachtungsblech, auf das Heizkissen.
Schmieren Sie die äußere Oberfläche der Fütterungsnadel, mit dem Lösungsmittel verwendet, um das Probiotikum aufzulösen. Hier ist dextrose Wasser, dies einrichtungen den glatten Eintritt der Nadel, in die Speiseröhre des Tieres. Scruff den Welpen durch die Haut am Hals, mit dem Daumen und dem Zeigefinger.
Greifen Sie die Spritze in Ihrer dominanten Hand, in einer Position, die es Ihnen ermöglicht, die Nadel einzulegen, und drücken Sie den Kolben, ohne Ihre Finger einzustellen. Setzen Sie die Glühbirne der Zuführnadel in einem 45-Grad-Winkel ein, bis sie die Rückseite des Mundes erreicht. Drehen Sie Ihre Hand mit der Nadel weg von Ihnen, während die Glühbirne der Nadel an Ort und Stelle zu halten, sobald die Nadel ist einfach mit dem Oberkörper, wird es beginnen zu gleiten.
Stellen Sie sicher, dass kein zusätzlicher Druck auf die Spritze ausgeübt wird, um die Bewegung zu stimulieren. Der Prozess des Schluckens wird langsam sein, und Geduld ist der Schlüssel. Wenn der Welpen älter wird, wird das Schlucken der Nadel schneller und einfacher.
Die Fütterungsnadel wurde vormarkiert, um zu verhindern, dass die Glühbirne in den Magen gelangt. Sobald sich die Markierung der Schnarbe nähert, die Bewegung der Nadel zu verhaften, und liefern langsam die probiotische Lösung. Sobald die Lieferung abgeschlossen ist, entfernen Sie die Nadel langsam.
Legen Sie die Maus auf das Heizkissen und beobachten Sie die Erholung. Ein Gasschlagreflex löst sich auf und die Herzfrequenz steigt, eine gesunde rosa Färbung taucht wieder auf, und ungelöste Gasreflexe nach 45 Sekunden deutet auf eine fehlgeschlagene Gavage hin und die Maus muss eingeschläfert werden. Der Gavage-Farbstoff sollte durch die blasse Haut sichtbar sein, der Farbstoff sollte nur in dem Bereich sichtbar sein, wo der Milchfleck normalerweise gefunden wird.
Die Einschließung des Farbstoffs auf den Magen deutet auf eine erfolgreiche Vermehrung hin. Wenn der Farbstoff in der Brusthöhle oder einem anderen Hohlraum als dem Magen gefunden wird, muss die Maus eingeschläfert werden, da sie auf eine fehlgeschlagene Gavage hindeutet. Minimaler Druck ist erforderlich, um einen Tag des Lebens zwei Maus zu scruff.
Anzeichen von Scruffing zu hart können, Unfähigkeit zu atmen, erheblicheS Gasen, und die Zunge für eine lange Dauer heraushalten. Ein paar Vorschläge für das Gavaging-Verfahren, ruhen Sie die Rückseite Der schroffen Hände Finger, auf der Handfläche hält die Spritze, dies stellt sicher, dass die Welpen Position stabil ist, während des Eingriffs und die Nadel, wird nicht innerhalb des Tieres bewegt. Während der Gavage, das Gewicht der Nadel, wird das Gleiten erleichtern, so dass die Nadel durch den Welpen geschluckt werden, ohne Druck von außen auszuüben.
Bringen Sie die Welpen in den Käfig des Damms zurück und folgen Sie der Überwachung gemäß Ihrem Zeitplan. Sammlung von Darmproben für die Kolonisationsanalyse. Das Tier wurde auf humane Weise eingeschläfert, und zwar durch Methoden, die im Tierpflege- und Gebrauchsprotokoll zugelassen sind.
Der Operationstisch ist mit einer sterilen saugfähigen Matte ausgekleidet. Die Werkzeuge wurden mit 70 Prozent Ethanol und einer Heißschlagsterilisation bei 250 Grad Celsius sterilisiert. Der externe Service des Tieres wird mit 70 Prozent Ethanol desinfiziert.
Schneiden Sie die äußere Haut mit Zangen und Schere, in vier Quadranten, unter besonderer Vorsicht, um das Peritoneum nicht zu schnüren. Stecken Sie die Haut zur Seite, so dass das Peritoneum gut exponiert ist. Verwenden Sie verschiedene, neue sterile Werkzeuge, um das Peritoneum offen zu schneiden, und nehmen Sie zusätzliche Vorsicht nicht zu schnüren, die inneren Organe in diesem Prozess.
Suchen Sie den Magen des Welpen, und klemmen Sie am Zwölffingerdarm. Mit zwei sterilen Zangen, lokalisieren Sie den Magen, und lokalisieren Sie das Duodenalende des Magens. Klemme direkt an der Kreuzung, des Magens und des Zwölffingerdarms.
Verwenden Sie zwei neue sterile Zangen, um den Darm laufen, verwenden Sie eine Zange, um auf dem Zwölffingerdarm zu halten, während die andere verwenden, um jedes Bindegewebe wegzureißen, halten Sie den Darm intakt. Während Sie sich entwirren, legen Sie den Darm auf das sterile saugfähige Pad, das das Tier bedeckt. Wenn Sie zufällig den Darm reißen, während des Entwirrens Verfahren, markieren Sie den Bereich, an dem es gerissen, so dass die Ausrichtung des Darms intakt ist.
Klemmen Sie am rektalen Ende, und machen Schnitte an beiden Klemmen. Legen Sie den intakten Darm auf eine steril markierte Aluminiumfolie in der richtigen Ausrichtung. Markieren Sie alle Abschnitte des Darms, die für Ihre nachfolgende Analyse erforderlich sind.
DNA wird aus diesen Darm extrahiert, mit einem optimierten Extraktionsverfahren, und QPCR-Analyse wird durchgeführt, um das Probiotikum zu quantifizieren. Die DNA wird aus dem frischen Darm extrahiert, oder der Darm kann gespeichert werden, bei negativen 80 Grad Celsius mit einer Gefrierbox. Repräsentative Ergebnisse, Lactobacillus Plantarium, Besiedlung mit Gavage jeden Tag und jeden zweiten Tag.
Ein höheres LP-Signal wurde im Darm von Mäusen beobachtet, die jeden zweiten Tag im Vergleich zu Mäusen, die täglich gegavaged, gegavaged. So wurden nachfolgende Experimente gebaut, die jeden zweiten Tag mit Gavages verwendet werden. Lactobacillus plantarum gavaged Mäuse, zusammen mit nicht gavaged Mäuse untergebracht.
Variable LP-Signale wurden bei unbehandelten Mäusen beobachtet, die mit LP-Gavaged-Mäusen untergebracht waren. Die Kolonisationsausbreitung von LP ist mit den Wurfgefährten möglich und somit die Behandlungsbedingungen wurden für unsere nachfolgenden Experimente durch Käfige getrennt. Fazit: Dieses Verfahren kann verwendet werden, um neugeborenen Mäusen präzise Mengen beliebiger Flüssigkeit zu liefern.
Die Probenahme von Darm kann extrapoliert werden, um die Veränderungen des Mikrobioms zu erforschen, durch andere Methoden der Analyse. Der Umfang dieses Videos ist es, eine Plattform zu bieten, für Forscher, um neonatale Maus-Gavage-Modelle zu verwenden, um die Mechanismen hinter den beobachteten Effekten zu verstehen, mit früher Verabreichung von Probiotika. Ein besonderer Dank geht an das Kollmann Lab Team, The Animal Care Services der University of British Colombia, für die Möglichkeit dieser Studie.
