Probiotic 연구, gavage를 사용 하 여 신생아 쥐에서. 소개, 이 비디오 프로토콜신생아 마우스에 probiotics를 gavaging에 대 한 설정 및 절차를 자세히 설명 합니다., 그것은 생활의 날에 2. 장 내 미생물군유전체 분석을 위한 장의 멸균 컬렉션도 이 프로토콜에 상세합니다.
일부 대표적인 결과는 이 프로토콜에도 포함되어 있으며, 이 절차에 따라 파생될 수 있는 데이터 유형 중 일부를 소개합니다. 신생아 마우스의 식도 가증, 생활의 둘째 날. 댐의 케이지를 같은 후드에 놓고 실험용 케이지가 가열 패드에 배치되고, 가열 패드는 약 섭씨 38도인 중간 수준으로 설정됩니다.
홈 케이지에서 중첩 된 토양을 제거하고 장갑을 낀 손으로 중첩을 문질러 서 냄새를 전달합니다. 이렇게 하면 처리 시 강아지에게 외국 향이 옮겨갈 수 있습니다. 이것은 차례로 외국 향기로 인해 댐에 의한 포기 또는 식인풍화의 위험을 줄입니다.
새끼가 시술 후 홈 케이지로 반환될 때. 원물 모양의 홀딩 둥지를 만들고, 미리 데워진 새롭고 멸균 된 실험 케이지에 놓습니다. 홈 케이지에서 모든 새끼를 실험 케이지로 옮기습니다.
새끼를 실험 케이지에서 원물 중첩으로 이동합니다. 댐의 케이지를 제거하고, 구비 영역에서 멀리 놓습니다. 이렇게 하면 댐이 새끼를 듣지 못하게 하여 댐의 스트레스가 많은 조건을 줄여 절차를 수행합니다.
쉽게 접근할 수 있는 주사기 포장을 엽니다. 자동 클래브 가베 수유 바늘을 멸균 방식으로 제거하고 주사기의 머리에 부착하십시오. 바늘은 오토클레이브전에 70%에탄올과 물로 세척됩니다.
수유 바늘의 다른 세트는 교차 오염을 피하기 위해 치료 및 대조군 사이에 사용됩니다. 프로바이오틱 염료 용액을 주사기에 넣고 손가락으로 뒤집어 거품을 제거하고 주사기 내부의 부피의 빈 공간을 제거합니다. 플런저에 다시 끌어서 바늘 죽은 공간에서 액체를 맑게 한 다음 플런저를 우울하게하여 공기와 기포를 추방하는 것이 중요하며, 기포가 동물로 변조되지 않도록하는 것이 중요합니다.
주사기에서 원하는 볼륨을 조정, 생활의 하루 동안 두 마우스, 더 이상 30 마이크로 리터는 gavaged해야한다. 바늘에 표시되는 검은 색 표시는 최대 길이를 나타내며 바늘을 마우스에 삽입 할 수 있습니다. 이 길이는 주아웃과 xiphoid 과정 사이의 외부 측정, 길이에 의해 얻어진다.
주사기를 멸균 표면에 내려놓고, 실험 케이지에서 구비되는 새끼를 제거하고, 건강 징후를 관찰한다. 이러한 건강 징후는 피부의 정기적 인 호흡과 분홍색 착색을 포함합니다. 강아지를 멸균 관찰 시트에 가열 패드에 놓습니다.
프로바이오틱을 용해시키는 데 사용되는 용매를 사용하여 수유 바늘의 외부 표면을 윤활합니다. 여기서 덱스트로스 워터, 이것은 바늘의 원활한 입구를 동물의 식도로 갖추고 있습니다. 엄지와 검지 손가락을 사용하여 목의 피부로 새끼를 으스스럽습니다.
바늘을 삽입 할 수있는 위치에 지배적 인 손에 주사기를 잡고 손가락을 조정하지 않고 플런저를 우울. 입 뒤쪽에 도달할 때까지 먹이 바늘의 전구를 45도 각도로 삽입합니다. 바늘을 바늘로 피벗하고 바늘의 전구를 제자리에 잡고 바늘이 몸통이 일반화되면 미끄러지기 시작합니다.
움직임을 자극하기 위해 주사기에 추가 압력이 가해지는지 확인하십시오. 삼키는 과정은 느려질 것이며 인내심이 중요합니다. 강아지가 나이가 들어감에 따라 바늘을 삼키면 더 빠르고 쉬워집니다.
전구가 위장에 들어가는 것을 방지하기 위해 수유 바늘이 미리 표시되었습니다. 마킹이 주아웃에 도달하면 바늘의 움직임을 체포하고 천천히 프로바이오틱 솔루션을 전달합니다. 배달이 완료되면 바늘을 천천히 제거하십시오.
가열 패드에 마우스를 놓고 복구를 관찰하십시오. 헐떡거리는 반사가 해결되고 심박수가 상승하고, 건강한 분홍색 착색이 다시 나타나고, 45초 후에 해결되지 않은 헐핑 반사가 실패했음을 나타내며 마우스는 안락사되어야 합니다. gavage 염료는 창백한 피부를 통해 볼 수 있어야 하며, 염료는 우유 반점이 일반적으로 발견되는 영역에서만 볼 수 있어야 합니다.
위장염에 감금, 성공적인 gavage를 나타냅니다. 염료가 흉부 구멍에서 발견되는 경우, 또는 위보다 다른 구멍, 마우스는 실패 한 gavage를 나타내기 때문에, 안락사해야합니다. 최소한의 압력이 필요하며, 하루에 두 개의 마우스를 스크러프에 넣으려면.
딱딱하게 찌르는 징후는 호흡할 수 없음, 상당한 헐떡거리는 것, 그리고 오랫동안 혀를 내밀는 것을 포함할 수 있습니다. 게이징 절차에 대한 몇 가지 제안, 주사기를 들고 손의 손바닥에, 당신의 scruffing 손 손가락의 뒷면을 휴식, 이것은 새끼 위치가 안정되어 있는지 확인, 절차 및 바늘 동안, 동물 내부 주위에 이동되지 않습니다. 개간 중에, 바늘의 무게는, 슬라이딩을 용이하게하고, 바늘이 외부 압력을 가하지 않고, 강아지에 의해 삼킬 수 있도록 합니다.
새끼를 댐의 케이지로 되돌리고 일정에 따라 모니터링을 수행하십시오. 식민지 분석을 위한 장 샘플 의 수집. 동물 보호 및 사용 프로토콜에서 승인 된 방법에 의해 동물이 인간적으로 안락사되었습니다.
수술 용 테이블에는 멸균 흡수성 매트가 줄지어 있습니다. 이 공구는 70%의 에탄올을 사용하여 살균되었으며, 섭씨 250도에서 뜨거운 비트 살균이 있었습니다. 동물의 외부 서비스는 70 % 에탄올에 소독됩니다.
집게와 가위를 사용하여 외부 피부를 4개의 사분면으로 자르고 각막을 레이스하지 않도록 각질을 강화합니다. 피부를 옆으로 감싸면 회막이 잘 노출됩니다. 복막을 열고 절단하고,이 과정에서 내부 장기를 레이스하지 않도록 각별한주의를 기울이기 위해 다른 새로운 멸균 도구를 사용합니다.
강아지의 위를 찾아 십이지장에서 클램프. 두 개의 멸균 집게를 사용하여 위를 찾고 위장의 십이지장 끝을 찾습니다. 위와 십이지장의 교차로에서 오른쪽으로 고정하십시오.
내장을 실행하려면 두 개의 새로운 멸균 집게를 사용하고, 한 번의 포스프를 사용하여 십이지장 에서 고정하고, 다른 하나는 결합 조직을 찢어 내고 내장을 그대로 유지합니다. 해명할 때, 동물을 덮는 멸균 흡수 패드에 내장을 놓습니다. 당신이 내장을 찢어 발생하는 경우, 해명 절차 동안, 창자의 방향이 그대로 되도록, 찢어진 영역아래로 표시.
직장 끝에 고정하고 두 클램프모두에서 잘라내십시오. 그대로 내장을 올바른 방향으로 멸균 표시 알루미늄 호일에 놓습니다. 후속 분석에 필요한 장의 모든 부분을 표시합니다.
DNA는 최적화된 추출 절차를 사용하여 이러한 장에서 추출되며, QPCR 분석은 프로바이오틱을 정량화하기 위해 수행됩니다. DNA는 신선한 창자에서 추출되거나, 내장은 냉동고 상자를 사용하여 음의 80섭씨에서 저장될 수 있습니다. 대표적인 결과, 유산균 질경이, 매일 매일 매일 격일로 식민지화.
더 높은 LP 신호는 매일 게각된 마우스에 비해, 격일로, 쥐의 장에서 관찰되었다. 따라서, 후속 실험은 격일로 개비를 사용하여 제작되었다. 유산균 질경이 가루 마우스, 웅덩이 마우스와 공동 보관.
LP의 가변 신호는 LP 가생 마우스와 공동 으로 수용된 처리되지 않은 마우스에서 관찰되었다. LP의 식민지 화 확산은 쓰레기 메이트와 함께 가능하고, 따라서 치료 조건은, 우리의 후속 실험을 위한 케이지에 의해 분리되었습니다. 결론, 이 절차는 신생아 마우스에 어떤 액체의 정확한 양을 전달하기 위하여 이용될 수 있습니다.
장의 샘플링은 다른 분석 방법을 통해 미생물군유전체의 변화를 탐구하기 위해 추정될 수 있습니다. 이 비디오의 범위는 플랫폼을 제공하는 것입니다, 신생아 마우스 gavage 모델을 사용하는 연구원을위한, 관찰 효과 뒤에 메커니즘을 이해하기 위해, probiotics의 초기 관리와. 콜만 연구소 팀, 영국 콜롬비아 대학의 동물 관리 서비스 팀에 특별한 감사, 이 연구를 가능하게하기위한.
