Probiyotik çalışmalar, neonatal farelerde gavaj kullanarak. Giriş, bu video protokolü bir neonatal fare için probiyotikler gavaging için kurulum ve prosedür ayrıntılı olacak, o gün yaşam iki. Bağırsakların steril toplanması, bağırsak mikrobiyom analizi için, ayrıca bu protokolde ayrıntılı olarak açıklanır.
Bazı temsili sonuçlar da bu protokole dahil edilmiştir, bu yordamı izleyerek elde edilebilir veri türlerinin bazılarını tanıtmak için. Neonatal farenin intra-özofagus gavajı, ikinci yaşam günü. Baraj ın kafesini aynı kaputa yerleştirin, deneysel kafesler ısıtma yastığıüzerine yerleştirilir, ısıtma yastığı yaklaşık 38 santigrat derece olan orta seviyeye ayarlanır.
Ev kafesinden bazı toprak yuvalama çıkarın, kokuları aktarmak için eldiven elleriyle yuvalama ovmak, eldiven üzerine yuvalama malzeme. Bu, işlendiğinde yavru üzerine, yabancı kokuların transferini azaltır. Bu da yabancı kokular nedeniyle baraj tarafından terk etme veya yamyamlaştırma riskini azaltır.
Yavrular ameliyattan sonra ev kafesine geri döndüklerinde. Konik şekilli bir tutma yuvası oluşturun ve önceden ısıtılmış olan yeni ve steril deneysel kafese yerleştirin. Tüm yavruları ev kafesinden deneysel kafese aktarın.
Yavruları deneysel kafesteki konik yuvaya taşıyın. Barajın kafesini çıkarın ve gavaging alanından uzağa yerleştirin. Bu da barajın stresli koşullarını azaltarak, barajın yavruyu duymasını engelleyerek, prosedürü uygular.
Kolay erişim için şırınga paketini açın. Steril bir şekilde otomatik clave gavage besleme iğnesi çıkarın ve şırınga kafasına takın. İğne otoklavlamadan önce %70 etanol ve su ile yıkanır.
Çapraz kontaminasyonu önlemek için tedavi ve kontrol grupları arasında farklı besleme iğneleri kullanılır. Şırınga içine probiyotik boya çözeltisi çizin, ters ve kabarcıklar kaldırmak için parmak ile flick, ve şırınga içinde hacim boş alan. Sıvı temizlemek için piston geri çekin, iğneler ölü boşluk, ve sonra piston depress, hava ve hava kabarcıkları kovmak için, bu sağlamak için önemlidir, hiçbir hava kabarcıkları gavaged olduğunu, hayvan içine.
Şırıngada istenilen hacmi ayarlayın, yaşam iki fare bir gün için, en fazla 30 mikrolitre gavaged olmalıdır. İğneüzerinde gördüğünüz siyah işaret, iğnenin fareye takılabilir maksimum uzunluğu gösterir. Bu uzunluk dışarıdan ölçülerek elde edilir, burun ve ksifoid süreci arasındaki uzunluk.
Şırıngayı steril bir yüzeye yerleştirin, deney kafesinden saklanacak yavruyu çıkarın ve sağlık belirtilerine dikkat edin. Bu sağlık işaretleri, düzenli nefes alma ve cildin pembe renklendirme içerir. Yavruyu steril gözlem kağıdına, ısıtma yastığına yerleştirin.
Probiyotik çözmek için kullanılan çözücü kullanarak, besleme iğnesinin dış yüzeyini yağlamak. Burada dekstroz suyu, bu tesis iğnenin düzgün girişini, hayvanın yemek borusuna. Başparmağınızı ve işaret parmağınızı kullanarak, boyundaki deritarafından yavruyu scruff.
İğneyi takmanızı sağlayan bir pozisyonda baskın elinizdeki şırıngayı tutun ve parmaklarınızı ayarlamadan pistonu bastırın. Besleme iğnesinin ampulü 45 derecelik bir açıyla, ağzın arkasına ulaşana kadar takın. İğne ile elinizi sizden uzağa döndürün, iğnenin ampulü yerinde tutarken, iğne gövdeyle düz bir şekilde düz olduğunda kaymaya başlayacaktır.
Hareketi uyarmak için şırıngaya ekstra basınç uygulanmadığından emin olun. Yutma işlemi yavaş olacak ve sabır anahtardır. Yavru yaşlandıkça iğnenin yutulması daha hızlı ve kolay hale gelecektir.
Beslenme iğnesi, ampulün mideye girmesini önlemek için önceden işaretlenmiştir. Bir kez işaretleme burun yaklaşır, iğne hareketini tutuklamak, ve yavaş yavaş probiyotik çözüm teslim. Doğum tamamlandıktan sonra, iğneyi yavaşça çıkarın.
Isıtma pedi üzerine fare yerleştirin ve kurtarma için gözlemlemek. Bir gasping refleks giderir ve kalp hızı yükselir, sağlıklı bir pembe renklenme yeniden ortaya çıkar, ve çözülmemiş gasping refleks 45 saniye sonra, başarısız bir gavage gösterir ve fare ötenazi gerekir. Gavaj boyası soluk deriden görülmelidir, boya sadece süt noktasının bulunduğu bölgede görülmelidir.
Mideye boya hapsedilmesi, başarılı bir gavaj gösterir. Boya torasik kavite veya mide dışında başka bir boşluk bulunursa, fare ötanazi edilmelidir, başarısız bir gavage gösterir gibi. Minimal basınç gereklidir, yaşam iki fare bir gün scruff için.
Sert scruffing belirtileri içerebilir, nefes yetersizliği, önemli nefes nefes, ve uzun bir süre için dil dışarı yapışmasını. Gaving prosedürü için birkaç öneri, şırınga tutan el avuç üzerinde, scruffing el parmak arka dinlenme, bu yavru pozisyonu istikrarlı olmasını sağlar, işlem ve iğne sırasında, hayvan içinde etrafında hareket etmez. Gavaj sırasında, iğne ağırlığı, kayma kolaylaştıracak, iğne yavru tarafından yutulması için izin, herhangi bir dış basınç uygulamadan.
Yavruları barajın kafesine geri getirin ve programınıza göre izleme ile takip edin. Kolonizasyon analizi için bağırsak örneklerinin toplanması. Hayvan Bakım ve Kullanım Protokolü'nde onaylanan yöntemlerle hayvan insancıl bir şekilde ötenaziye alındı.
Cerrahi masa steril emici paspas ile kaplıdır. Araçlar yüzde 70 etanol kullanılarak sterilize edilmiş ve 250 santigrat derecede sıcak bir beat sterilizasyonu. Hayvanın dış servisi, yüzde 70 etanol ile dezenfekte edilir.
Periton yırtmak için, ekstra dikkatli çekerken, dört quadans içine, perseps ve makas kullanarak dış deri kesin. Kenara deri tuck öyle, periton iyi maruz kalmaktadır. Farklı kullanın, yeni steril araçlar, periton açık kesmek için, ve yırtmak için ekstra dikkatli değil, bu süreçte iç organları.
Yavrunun midesini bulun ve duodenuma kenetle. İki steril forceps kullanarak, mide bulmak ve mide duodenal ucunu bulmak. Kavşakta, mide ve duodenumun kelepçesi.
Bağırsakları çalıştırmak için iki yeni steril forseps kullanın, duodenum tutmak için bir forcep kullanın, diğer inip herhangi bir bağ dokusu koparmak için kullanırken, bağırsakları sağlam tutarak. Çözülürken, bağırsakları hayvanı kaplayan steril emici pedin üzerine yerleştirin. Eğer bağırsakları yırtıyorsanız, çözülme işlemi sırasında, yırtıldığı bölgeyi işaretleyin, böylece bağırsağın yönü bozulmaz.
Rektal ucunda kelepçe ve her iki kelepçe de kesikler yapmak. Doğru yönde steril işaretli alüminyum folyo üzerine, bozulmamış bağırsak yerleştirin. Sonraki analizleriniz için gerekli olan bağırsağın herhangi bir bölümünü işaretleyin.
DNA bu bağırsaklardan ayıklanır, optimize edilmiş bir ekstraksiyon prosedürü kullanılarak, ve QPCR analizi probiyotik ölçmek için yapılır. DNA taze bağırsaklardan elde edilir, ya da bağırsaklar saklanabilir, negatif 80 santigrat derece bir dondurucu kutusu kullanılarak. Temsili sonuçlar, lactobacillus plantarium, gavage ile kolonizasyon her gün ve her gün.
Farelerin bağırsaklarında her gün gavaged daha yüksek bir LP sinyali gözlendi, her gün gavaged, fareler ile karşılaştırıldığında günlük gavaged. Böylece, sonraki deneyler, her gün gavajlar kullanılarak inşa edilmiştir. Lactobacillus plantarum gavaged fareler, gavaged fareler ile co-housed.
LP gavaged fareler ile birlikte bulunan tedavi edilmemiş farelerde LP değişken sinyalleri gözlendi. LP kolonizasyon yayılması, çöp arkadaşları ile mümkündür, ve böylece tedavi koşulları, sonraki deneyler için kafesler ile ayrılmıştır. Sonuç olarak, bu prosedür, yeni doğan farelere herhangi bir sıvının kesin miktarda teslim edilmesi için kullanılabilir.
Bağırsak örnekleme silik tahmin edilebilir, mikrobiyom değişiklikleri keşfetmek için, analiz diğer yöntemlerle. Bu videonun kapsamı bir platform sağlamaktır, araştırmacılar için neonatal fare gavaj modelleri kullanmak için, gözlenen etkileri arkasındaki mekanizmaları anlamak için, probiyotiklerin erken uygulanması ile. Bu çalışmayı mümkün kılmak için Kollmann Lab Ekibi, Hayvan Bakım Hizmetleri, İngiliz Kolombiya Üniversitesi için özel bir teşekkür.
