Çalışma, Munziq'in sıçanlarda, özellikle anormal vücut sıvısına sahip olanlarda miyokard perfüzyon hasarı üzerindeki kardiyoprotektif etkilerini araştırıyor. Munziq ön tedavisinin miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını hafifletip hafifletemeyeceğini, patolojik değişikliklere neden olup olamayacağını, kardiyak fonksiyonu koruyup koruyamayacağını ve özellikle NF-kappa B sinyal yolu yoluyla mekanizmalarını araştırıp araştıramayacağını belirlemeyi amaçlıyoruz. Araştırma grubumuz miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını incelemeye odaklanmaktadır.
Bulgularımız, NF-kappa B yolağının inhibe edilmesinin, miyokondriyal fonksiyonu ve miyokard metabolizmasını etkileyen NF-kappa B yolunu inhibe ederek miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını hafifletebileceğini düşündürmektedir. Araştırmamız, Munziq'i potansiyel bir miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarı terapötik olarak tanımlamakta ve doğal bir tıp yaklaşımını keşfederek alanı ilerletmektedir. Bu keşif, miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarı tedavisi için yeni bir mekanizma olan NF-kappa B yolunu hedef aldığı için önemlidir.
Bulgularımız, kardiyovasküler hastalık yönetiminde geleneksel tıbbın daha fazla klinik uygulamasının önünü açmaktadır. Başlamak için, fareleri anormal vücut sıvısında veya ABF grubunda, iklim kutuları içinde kontrollü bir ortamda barındırın ve normal yem sağlayın. ABF modelini oluşturmak için sıçanlara 21 gün boyunca kuru soğuk yiyecekler, yani arpa ve kişniş tohumları ile karıştırılmış normal yem sağlayın.
İntragastrik uygulama tekniği kullanarak, miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarı veya MIRI ameliyatından 21 gün önce Munziq grubu sıçanlara kilogram başına beş gram Munziq uygulayın. MIRI modelini oluşturmak için, 21 günlük ön işlemden sonra, anestezi uygulanmış fareyi steril bir ameliyat masasına yerleştirin. Sıçanlarda ventilatör destekli solunumu sağlamak için bir trakeostomi yapın.
Göğsü açmadan önce ameliyat bölgesini sabunlu suyla yıkayın, bölgeyi tıraş edin ve iyot solüsyonu ile dezenfekte edin. Daha sonra, steril makas, forseps ve ekartörler kullanarak, kalbi açığa çıkarmak ve kalbin yüzeyinde bulunan sol ön inen arteri tanımlamak için göğüs duvarını açın. 6-0'lık bir sütür kullanarak, 30 dakika boyunca bölgesel iskemiyi indüklemek için arteri bağlayın.
Miyokardda soluk bir renk gözlemleyerek etkili oklüzyonu onaylayın. 30 dakika sonra bağı serbest bırakın ve 120 dakika boyunca reperfüzyona izin verin. Parlak kırmızı bir renge döndüğünde miyokardın reperfüzyonunu onaylayın.
Reperfüzyonu takiben, abdominal aorttan bir ila iki mililitre kan toplamak için vakumlu kan alma tüpü kullanın. Sıçanı ötenazi yaptıktan sonra, sol ventriküldeki enfarktüs bölgesinden miyokard dokusunu toplamak için steril forseps ve makas kullanın. Toplanan dokuyu daha fazla analiz için steril bir kaba koyun.
MIRI'nin kurduğu sıçandan miyokard enfarktüslü kalbi topladıktan sonra, kalbi kalbin yönüne dik olan sol ventrikül uzun ekseninin orta noktası boyunca yatay olarak iki yarıya kesmek için steril makas ve bıçak kullanın. Apikal kısmın yarısını iki parçaya bölün. Morfolojik inceleme için oda sıcaklığında% 4 paraformaldehitin bir kısmını iki ila 24 saat koruyun.
Diğer kısmı elektron mikroskobu için bir ila dört saat boyunca dört santigrat derecede glutaraldehit içine yerleştirin. Daha sonra, hem iskemik hem de iskemik olmayan alanlar dahil olmak üzere kalbin taban kısmını iki kısma bölün. Bir kısmını bir kriyoviyal içine yerleştirin ve sıvı nitrojen içinde hızla dondurun.
Dondurulmuş dokuyu moleküler biyoloji testi için eksi 80 santigrat derece dondurucuya aktarın. İnferior vena kavadan toplanan kanı 1.000 G'de 10 dakika santrifüj edin. Ayrılan serumu eksi 80 santigrat derece dondurucuda saklayın.
Formaldehitle sabitlenmiş doku bölümlerini 1,5 ila iki saat pişirmek için 65 derecelik bir inkübatöre yerleştirin. Pişmiş doku bölümlerini 10 dakika boyunca ksilene batırın. Daha sonra, doku bölümlerini sırayla susuz alkole bir ve iki kez beşer dakika, ardından %95, %80 ve %70 alkole ve son olarak her biri beş dakika damıtılmış suya batırın.
Doku bölümlerini üç dakika boyunca hematoksilen ile boyayın. Doku bölümlerini bir ila iki saniye boyunca bir hidroklorik asit alkol çözeltisine kısa bir süre batırarak asidik farklılaşma gerçekleştirin. Musluk suyunda beş dakika durulayarak farklılaşmayı sonlandırın.
Daha sonra, doku bölümlerini damıtılmış suya, ardından her biri üç dakika boyunca %70, %80, %90 ve %95 alkole batırın. Bölümü susuz alkol bir ve iki içine batırdıktan sonra, bölümleri bir dakika boyunca etanol içinde% 0.5 eozin ile boyayın. Şimdi, fazla kırmızı rengi gidermek için bölümleri %95 etanol ile durulayın.
Ardından, bölümleri beş dakika susuz etanole batırın, ardından her biri beş dakika boyunca ksilen bir ve iki içine daldırın. Lekeli bölümleri nötr balsam ile monte edin. Mikroskop altında dokudaki patolojik değişiklikleri gözlemleyin.
Sham grubundaki miyokard dokusunda granüler ve vakuolar dejenerasyon, sınırlı kırmızı kan hücresi ve lenfosit infiltrasyonu ve ara sıra vasküler dilatasyon ve tıkanıklık görüldü. MIRI grubunda, geniş granüler ve vakuolar dejenerasyon ile birlikte ciddi miyokard dokusu hasarı vardı. Miyokard hasarı, ABF MIRI grubunda, kontrol MIRI grubuna kıyasla belirgin derecede şiddetliydi ve doku dejenerasyonu ve infiltrasyonunun güçlendirilmiş belirtileri gösteriyordu.
Hem kontrol hem de ABF MIRI gruplarında Munziq ile tedavi edilen miyokard hücreleri, daha az kırmızı kan hücresi, lenfosit infiltrasyonu ve tıkanıklık ile azalmış granüler ve vakuolar dejenerasyon gösterdi. Sham grubundaki miyokardiyal hücreler, bozulmamış miyofibril yapısını, tek tip sarkomer uzunluğunu ve çok sayıda mitokondriyi korudu. MIRI grubunda, miyokard hücreleri, geniş mitokondriyal hasarla birlikte şişlik, değişen sarkomer uzunluğu ve bozulmuş miyofilamentler sergiledi.
Munziq tedavisi, miyokard hücre şişmesini azalttı ve sahte koşullara benzer şekilde miyofibril, sarkomer ve mitokondriyal yapıyı korudu. Serum cTn-T, CK-MB ve ICAM-1 düzeyleri ABF MIRI grubunda kontrol MIRI grubuna göre anlamlı olarak daha yüksekti. Munziq ön tedavisi, hem ABF hem de kontrol MIRI gruplarında cTn-T, CK-MB ve ICAM-1 düzeylerini önemli ölçüde azalttı.
ABF MIRI grubu, kontrol MIRI grubuna kıyasla miyokard dokusunda artmış malondialdehit seviyeleri ve azalmış nitrik oksit seviyeleri gösterdi. Munziq ön işlemi, iskemik miyokardda nitrik oksit seviyelerini arttırırken laktat dehidrojenaz ve malondialdehit içeriğini önemli ölçüde azalttı. ABF MIRI grubu, özellikle protein seviyelerinde yüksek interlökin bir beta, interlökin altı ve TNF alfa seviyeleri sergiledi.
Munziq ön tedavisi, özellikle miyokarddaki protein seviyelerinde interlökin bir beta, interlökin altı ve TNF alfa'nın serum ve mRNA seviyelerini düşürdü. NF-kappa B yolağı belirteçleri MIRI dokusunda yukarı regüle edildi ve bu da inflamasyonu gösterdi. Munziq tedavisi, NF-kappa B yolağı aktivasyonunun azaldığını gösteren yol belirteçlerinin ekspresyonunu azalttı.
