이 연구는 쥐, 특히 비정상적인 체액을 가진 쥐의 심근 관류 손상에 대한 Munziq의 심장 보호 효과를 조사합니다. 우리는 Munziq 전처리가 심근 허혈-재관류 손상을 완화하고, 병리학적 변화를 유도하고, 심장 기능을 보호하고, 특히 NF-kappa B 신호 전달 경로를 통해 그 메커니즘을 탐색할 수 있는지 확인하는 것을 목표로 합니다. 우리 연구팀은 심근허혈-재관류 손상에 대한 연구에 집중해 왔습니다.
본 연구의 결과는 NF-kappa B 경로를 억제하면 심근 허혈-재관류 손상을 완화할 수 있으며, 이는 NF-kappa B 경로를 억제하여 미토콘드리아 기능과 심근 대사에 영향을 미쳐 심근 허혈-재관류 손상을 완화할 수 있음을 시사합니다. 우리의 연구는 Munziq을 잠재적인 심근 허혈-재관류 손상 치료제로 식별하여 자연 의학 접근 방식을 탐구하여 이 분야를 발전시키고 있습니다. 이 발견은 심근 허혈-재관류 손상 치료를 위한 새로운 메커니즘인 NF-kappa B 경로를 표적으로 한다는 점에서 중요합니다.
우리의 발견은 심혈관 질환 관리에서 전통 의학의 추가 임상 적용을 위한 길을 열었습니다. 우선, 비정상적인 체액 또는 ABF 그룹에 속하는 쥐를 기후 상자 내의 통제된 환경에 수용하고 일반 사료를 제공합니다. ABF 모델을 확립하기 위해 21일 동안 보리와 고수씨와 같은 건조 찬 음식과 섞인 일반 사료를 쥐에게 제공합니다.
위내 투여 기법을 사용하여 심근 허혈-재관류 손상 또는 MIRI 수술 전 21일 동안 Munziq 그룹 쥐에게 Munziq 1kg당 5g을 투여합니다. MIRI 모델을 확립하기 위해, 전처리 21일 후, 마취된 쥐를 멸균 수술대에 올려놓는다. 쥐가 인공호흡기를 사용하여 호흡할 수 있도록 기관절개술을 수행합니다.
가슴을 열기 전에 비눗물로 수술 부위를 씻고 해당 부위를 면도한 다음 요오드 용액으로 소독하십시오. 그런 다음 멸균 가위, 집게 및 견인기를 사용하여 흉벽을 열어 심장을 노출시키고 심장 표면에 있는 왼쪽 전방 하행 동맥을 확인합니다. 6-0 봉합사를 사용하여 동맥을 결찰하여 30분 동안 국소 허혈을 유도합니다.
심근의 옅은 색을 관찰하여 효과적인 폐색을 확인합니다. 30분 후 결찰을 풀고 120분 동안 재관류를 허용합니다. 심근이 밝은 붉은색으로 돌아오면 재관류를 확인합니다.
재관류 후에는 진공 채혈 튜브를 사용하여 복부 대동맥에서 1-2ml의 혈액을 채취합니다. 쥐를 안락사시킨 후 멸균 집게와 가위를 사용하여 좌심실의 경색 부위에서 심근 조직을 채취합니다. 추가 분석을 위해 수집된 조직을 멸균 용기에 넣습니다.
MIRI 확립 쥐에서 심근경색된 심장을 채취한 후 멸균 가위와 칼날을 사용하여 심장 방향에 수직인 좌심실 장축의 중간 지점을 따라 심장을 수평으로 두 반으로 교차시킵니다. 정점 부분의 절반을 두 부분으로 나눕니다. 형태 학적 검사를 위해 실온에서 2-24 시간 동안 4 % 파라 포름 알데히드의 한 부분을 보존하십시오.
다른 부분을 섭씨 4도의 글루타르알데히드에 넣고 1-4시간 동안 전자 현미경을 사용합니다. 다음으로, 허혈성 영역과 비허혈성 영역을 모두 포함하는 심장의 기저부를 두 부분으로 나눕니다. 한 부분을 cryovial에 넣고 액체 질소에 빠르게 얼립니다.
분자생물학 검사를 위해 냉동 조직을 섭씨 영하 80도의 냉동고로 옮깁니다. 하대정맥에서 채취한 혈액을 1, 000G에서 10분 동안 원심분리한다. 분리된 세럼은 영하 80도의 냉동고에 보관하십시오.
포름알데히드로 고정된 조직 절편을 섭씨 65도의 인큐베이터에 넣고 1.5-2시간 동안 굽습니다. 구운 조직 부분을 자일렌에 10분 동안 담급니다. 다음으로, 조직 절편을 무수 알코올 1 분과 2 분에 각각 5 분씩 순차적으로 침지시킨 다음 95 % 90 % 80 % 및 70 % 알코올, 마지막으로 증류수에 각각 5 분 동안 담그십시오.
조직 부분을 헤마톡실린으로 3분 동안 염색합니다. 조직 단면을 염산 알코올 용액에 1-2초 동안 잠시 담궈 산성 분화를 수행합니다. 수돗물로 5분 동안 헹구어 구별을 종료합니다.
다음으로, 조직 절편을 증류수에 담근 다음 70%80%90% 및 95%알코올에 각각 3분 동안 담그십시오. 단면을 무수 알코올 1 번과 2 번으로 담근 후 1 분 동안 에탄올에 0.5 % 에신으로 단면을 염색합니다. 이제 95% 에탄올로 섹션을 헹구어 과도한 붉은 색을 제거합니다.
그런 다음 섹션을 무수 에탄올에 5분 동안 담근 다음 크실렌 1과 2에 각각 5분씩 담그십시오. 얼룩진 부분을 중성 발삼으로 장착하십시오. 현미경으로 조직의 병리학적 변화를 관찰합니다.
가짜 그룹의 심근 조직은 과립 및 액포 변성, 제한된 적혈구 및 림프구 침윤, 그리고 때때로 혈관 확장 및 울혈을 보였습니다. MIRI 그룹에서는 광범위한 과립 및 액포 변성을 동반한 심각한 심근 조직 손상이 있었습니다. 심근 손상은 대조군 MIRI 그룹에 비해 ABF MIRI 그룹에서 현저히 심각했으며, 조직 퇴행 및 침투의 증폭된 징후를 보였습니다.
대조군과 ABF MIRI 그룹 모두에서 Munziq로 처리된 심근 세포는 적혈구, 림프구 침투 및 울혈이 감소하여 과립 및 액포 변성이 감소한 것으로 나타났습니다. 가짜 그룹의 심근 세포는 온전한 근섬유질 구조, 균일한 육종 길이 및 수많은 미토콘드리아를 유지했습니다. MIRI 그룹에서 심근 세포는 팽창, 다양한 육종 길이, 심근 필라멘트 파괴를 보였으며 광범위한 미토콘드리아 손상이 있었습니다.
Munziq 치료는 심근 세포 부종을 감소시키고 가짜 상태와 유사한 근섬유, 사르코메르 및 미토콘드리아 구조를 보존했습니다. 혈청 cTn-T, CK-MB 및 ICAM-1 수치는 ABF MIRI 투여군이 대조군 MIRI 투여군보다 유의하게 높았다. Munziq 전처리는 ABF 및 대조군 MIRI 그룹 모두에서 cTn-T, CK-MB 및 ICAM-1 수치를 현저히 감소시켰습니다.
ABF MIRI 그룹은 대조군 MIRI 그룹에 비해 심근 조직에서 말론디알데히드 수치가 증가하고 산화질소 수치가 감소한 것으로 나타났습니다. Munziq 전처리는 허혈성 심근의 산화질소 수치를 증가시키는 동시에 젖산 탈수소효소 및 말론디알데히드 함량을 크게 낮췄습니다. ABF MIRI 그룹은 특히 단백질 수준에서 인터류킨 1 베타, 인터루킨 6 및 TNF 알파 수치가 상승했습니다.
Munziq 전처리는 특히 심근의 단백질 수준에서 인터루킨 1 베타, 인터루킨 6 및 TNF 알파의 혈청 및 mRNA 수치를 감소시켰습니다. NF-kappa B 경로 마커는 MIRI 조직에서 상향 조절되어 염증을 나타냅니다. Munziq 치료는 경로 마커의 발현을 감소시켜 NF-kappa B 경로 활성화가 감소했음을 나타냅니다.
