המחקר בוחן את ההשפעות המגנות על הלב של Munziq על פגיעה בזלוף שריר הלב בחולדות, במיוחד אלה עם נוזלי גוף חריגים. אנו שואפים לקבוע אם טיפול מקדים ב-Munziq יכול להפחית את הפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה בשריר הלב, לגרום לשינויים פתולוגיים, להגן על תפקוד הלב ולחקור את המנגנונים שלו, במיוחד באמצעות מסלול האיתות NF-kappa B. קבוצת המחקר שלנו התמקדה בחקר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה של שריר הלב.
הממצאים שלנו מצביעים על כך שעיכוב מסלול NF-kappa B יכול להקל על פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה בשריר הלב, מה שעשוי להפחית את הפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה של שריר הלב על ידי עיכוב מסלול NF-kappa B, המשפיע על תפקוד המיטוכונדריה וחילוף החומרים של שריר הלב. המחקר שלנו מזהה את Munziq כטיפול פוטנציאלי בפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה בשריר הלב, המקדם את התחום על ידי חקר גישת הרפואה הטבעית. תגלית זו משמעותית מכיוון שהיא מכוונת למסלול NF-kappa B, מנגנון חדשני לטיפול בפגיעות איסכמיה-רפרפוזיה בשריר הלב.
הממצאים שלנו סוללים את הדרך ליישום קליני נוסף של הרפואה המסורתית בניהול מחלות לב וכלי דם. בתור התחלה, יש לשכן את החולדות בנוזל הגוף החריג, או קבוצת ABF, בסביבה מבוקרת בתוך קופסאות אקלים ולספק מזון רגיל. ספק לחולדות מזון רגיל מעורבב עם מזון קר יבש, כלומר זרעי שעורה וכוסברה, למשך 21 יום כדי לבסס את מודל ה- ABF.
באמצעות טכניקת מתן תוך קיבה, יש לתת חמישה גרם לק"ג של Munziq לחולדות מקבוצת Munziq למשך 21 יום לפני פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה של שריר הלב, או ניתוח MIRI. כדי לבסס את מודל MIRI, לאחר 21 יום של טיפול מקדים, הניחו את החולדה המורדמת על שולחן ניתוח סטרילי. בצע טרכאוסטומיה כדי לאפשר נשימה בעזרת מכונת הנשמה בחולדה.
לפני פתיחת בית החזה יש לשטוף את מקום הניתוח במי סבון, לגלח את האזור ולחטא אותו בתמיסת יוד. לאחר מכן, בעזרת מספריים סטריליים, מלקחיים ומחזירים, פתחו את דופן בית החזה כדי לחשוף את הלב ולזהות את העורק היורד הקדמי השמאלי, שנמצא על פני הלב. בעזרת תפר 6-0, קשרו את העורק כדי לגרום לאיסכמיה אזורית למשך 30 דקות.
אשר חסימה יעילה על ידי התבוננות בצבע חיוור בשריר הלב. לאחר 30 דקות, שחרר את הקשירה ואפשר זלוף למשך 120 דקות. אשר זלוף מחדש של שריר הלב כאשר הוא חוזר לצבע אדום בוהק.
לאחר רפרפוזיה, השתמש בצינור איסוף דם ואקום כדי לאסוף מיליליטר עד שניים של דם מאבי העורקים הבטני. לאחר המתת חסד של החולדה, השתמש במלקחיים סטריליים ובמספריים כדי לאסוף רקמת שריר הלב מאזור האוטם בחדר השמאלי. הניחו את הרקמה שנאספה בכלי סטרילי להמשך ניתוח.
לאחר איסוף לב אוטם שריר הלב מהחולדה המבוססת MIRI, השתמש במספריים ולהב סטריליים כדי לחצות את הלב אופקית לשני חצאים לאורך נקודת האמצע של הציר הארוך של החדר השמאלי בניצב לכיוון הלב. מחלקים מחצית מהחלק האפיקלי לשתי מנות. שמור מנה אחת ב-4% פרפורמלדהיד בטמפרטורת החדר למשך שעתיים עד 24 שעות לבדיקה מורפולוגית.
מניחים את החלק השני בגלוטרלדהיד בארבע מעלות צלזיוס למשך שעה עד ארבע שעות למיקרוסקופ אלקטרונים. לאחר מכן, חלקו את החלק הבסיסי של הלב, כולל אזורים איסכמיים ולא איסכמיים, לשני חלקים. מניחים חלק אחד לתוך קריוביאל ומקפיאים אותו במהירות בחנקן נוזלי.
מעבירים את הרקמה הקפואה למקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס לבדיקה בביולוגיה מולקולרית. צנטריפוגה הדם שנאסף מהווריד הנבוב התחתון ב -1, 000 גרם למשך 10 דקות. יש לאחסן את הסרום המופרד במקפיא במינוס 80 מעלות.
מניחים את חלקי הרקמה הקבועים בפורמלדהיד באינקובטור של 65 מעלות צלזיוס לאפייה של 1.5 עד שעתיים. טבלו את חלקי הרקמות האפויות בקסילן למשך 10 דקות. לאחר מכן, טבלו ברצף את חלקי הרקמה באלכוהול נטול מים אחד ושניים למשך חמש דקות כל אחד, ולאחר מכן 95%90%80% ו-70% אלכוהול, ולבסוף במים מזוקקים למשך חמש דקות כל אחד.
מכתים את חלקי הרקמה בהמטוקסילין למשך שלוש דקות. בצע התמיינות חומצית על ידי טבילה קצרה של חלקי הרקמה בתמיסת אלכוהול של חומצה הידרוכלורית למשך שנייה עד שתיים. סיים את ההתמיינות על ידי שטיפה במי ברז למשך חמש דקות.
לאחר מכן, טבלו את חלקי הרקמה במים מזוקקים, ולאחר מכן ב-70%80%90% ו-95% אלכוהול למשך שלוש דקות כל אחד. לאחר טבילת הקטע באלכוהול נטול מים אחד ושני, יש להכתים את החלקים ב-0.5% אאוזין באתנול למשך דקה אחת. כעת, שטפו את החלקים באתנול 95% כדי להסיר עודף צבע אדום.
לאחר מכן, טבלו את החלקים באתנול נטול מים למשך חמש דקות, ולאחר מכן טבלו בקסילן אחד ושניים למשך חמש דקות כל אחד. הרכיבו את החלקים המוכתמים בבלסם ניטרלי. התבונן בשינויים פתולוגיים ברקמה תחת מיקרוסקופ.
רקמת שריר הלב בקבוצת הדמה הראתה ניוון גרגירי ואקואולרי, חדירת כדוריות דם אדומות ולימפוציטים מוגבלת, ומדי פעם התרחבות וגודש בכלי הדם. בקבוצת MIRI, היה נזק חמור לרקמת שריר הלב עם ניוון גרגירי ואקואולרי נרחב. נזק לשריר הלב היה חמור במיוחד בקבוצת ABF MIRI בהשוואה לקבוצת הביקורת MIRI, והראה סימנים מוגברים של ניוון רקמות וחדירה.
תאי שריר הלב שטופלו ב-Munziq הן בקבוצת הביקורת והן ב-ABF MIRI הראו ניוון גרגירי ואקואולרי מופחת עם פחות כדוריות דם אדומות, חדירת לימפוציטים וגודש. תאי שריר הלב בקבוצת הדמה שמרו על מבנה שריר הלב שלם, אורך סרקומר אחיד ומיטוכונדריה רבים. בקבוצת MIRI, תאי שריר הלב הראו נפיחות, אורך סרקומר משתנה ושיבוש בשריר הלב, עם נזק מיטוכונדריאלי נרחב.
הטיפול ב-Munziq הפחית את נפיחות תאי שריר הלב ושימר את מבנה המיופיבריל, הסרקומר והמיטוכונדריה, בדומה למצבי דמה. רמות cTn-T, CK-MB ו-ICAM-1 בסרום היו גבוהות משמעותית בקבוצת ABF MIRI מאשר בקבוצת הביקורת MIRI. הטיפול המקדים של Munziq הפחית באופן משמעותי את רמות ה-cTn-T, CK-MB ו-ICAM-1 הן בקבוצות ABF והן בקבוצת הביקורת.
קבוצת ABF MIRI הראתה רמות מוגברות של מלונדיאלדהיד וירידה ברמות תחמוצת החנקן ברקמת שריר הלב בהשוואה לקבוצת הביקורת MIRI. טיפול מקדים ב-Munziq הפחית משמעותית את תכולת הלקטט דהידרוגנאז והמלונדיאלדהיד תוך העלאת רמות תחמוצת החנקן בשריר הלב האיסכמי. קבוצת ABF MIRI הדגימה רמות גבוהות של אינטרלוקין בטא אחד, אינטרלוקין שש ואלפא TNF, במיוחד ברמות חלבון.
טיפול מקדים של Munziq הפחית את רמות הסרום וה-mRNA של אינטרלוקין בטא אחד, אינטרלוקין שש ו-TNF אלפא, במיוחד ברמות החלבון בשריר הלב. סמני מסלול NF-kappa B היו מווסתים ברקמת MIRI, מה שמעיד על דלקת. הטיפול ב-Munziq הפחית את הביטוי של סמני מסלול, מה שמצביע על ירידה בהפעלת מסלול NF-kappa B.
