JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מחקר זה מציג בעיקר את היישום של מטבולומיקה בכבד בחקירת היעילות של סירופ שי-ליו-בו-שו בטיפול באנמיה.

Abstract

כתרופה אויגורית ידועה, סירופ שי-ליו-בו-שו (SLBXS) נמצא בשימוש נרחב לטיפול באנמיה בסין כבר למעלה מ-20 שנה. עם זאת, המנגנונים הבסיסיים של יעילותו בטיפול באנמיה נותרו לא ברורים. במחקר זה, מטבולומיקה בכבד שימשה בעיקר לקביעת מנגנוני הבקרה הפוטנציאליים של SLBXS בטיפול באנמיה. פרופיל מטבולומי כבד נערך כדי לאפיין את מנגנון הפעולה של SLBXS במודל עכברי של אנמיה המושרה על ידי אצטילפניל-הידרזין. הוכח כי SLBXS מפחית את אינדקס הכבד, ספירת תאי הדם הלבנים וספירת טסיות הדם, תוך העלאת ספירת תאי הדם האדומים, ההמוגלובין ורמות ההמטוקריט. מטרות ליבה נבחרו לאימות באמצעות Western Blotting. SLBXS הוכיח השפעה טיפולית משמעותית על אנמיה בעיקר על ידי ויסות חילוף החומרים של גלקטוז ומסלול האיתות HIF-1, כפי שמצוין על ידי הפחתת הוויסות של חלבוני HIF-1α, NOS3, VEGFA ו-GLA ברקמות הכבד של עכברים אנמיים. מחקר זה מבהיר את מנגנוני הבקרה הפוטנציאליים של חילוף החומרים בכבד על ידי מתן SLBXS בטיפול באנמיה.

Introduction

אנמיה היא בעיה בריאותית עולמית דחופה ונפוצה, המשפיעה על 25% מאוכלוסיית העולם ואנשים בכל הגילאים, במיוחד מתבגרים ונשים בהריון 1,2,3. זה קשור לסיכון מוגבר ללידה מוקדמת ותמותת אמהות ויכול להוביל להפרעות התפתחותיות גופניות ולפגיעה בביצועים קרדיווסקולריים4. מצב זה עלול גם להשפיע לרעה על מצבם הבריאותי של מתבגרים, וכתוצאה מכך לזיהומים ואי ספיקת לב5. הטיפולים הנוכחיים כוללים בעיקר עירוי דם, תוספי ברזל וטיפול באריתרופוייטין. עם זאת, לטיפולים אלו יש חסרונות ותופעות לוואי שליליות, כגון אנפילקסיס, הפרעות במערכת העיכול, עומס יתר של ברזל וכוורות1. לכן, זיהוי תרופות יעילות עם פחות תופעות לוואי לטיפול באנמיה הוא קריטי.

הרפואה הסינית המסורתית, כולל הרפואה האויגורית, מציעה מספר יתרונות, כגון ניסוחים מרובי מרכיבים, השפעות מרובות מטרות, אינטראקציות מרובות קישורים ופחות תופעות לוואי במניעה וטיפול במחלות מולטי-פקטוריאליות. סירופ שי-ליו-בו-שואה (SLBXS) הוא חומר מסורתי בולט ברפואה האויגורית, המשמש לטוניק דם וייצור דם. היא מוכרת כתרופה מווסתת דם שיכולה להפחית את חום הכבד ונכללה בהנחיות לשימוש קליני בתרופות מיעוט לטיפול באנמיה. זה גם מורשה על ידי מינהל המזון והתרופות הממלכתי הסיני (Z20026094)6,7,8. במהלך שני העשורים האחרונים, נעשה שימוש נרחב ב-SLBXS בסין לטיפול במצבים הקשורים לאנמיה. עם זאת, המנגנונים הפוטנציאליים שלו לטיפול באנמיה נותרו לא ידועים ודורשים חקירה נוספת. מטבולומיקה, הבוחנת את התגובות המטבוליות הדינמיות של מערכות ביולוגיות למחלות, התערבויות תרופתיות או תנאים סביבתיים9, משמשת יותר ויותר להבהרת מנגנוני הפעולה של הרפואה הסינית המסורתית על ידי הערכת שינויים בסמנים ביולוגיים מטבוליים בדגימות ביולוגיות בעקבות גירויים חיצוניים 9,10.

בהתאם לכך, אומצה במחקר זה גישה מטבולומית בכבד כדי לקבוע את המנגנונים הטיפוליים הבסיסיים של SLBXS בטיפול באנמיה. ראשית, הוקם מודל עכברי המושרה על ידי אצטילפניל-הידרזין (APH) של אנמיה. לאחר מכן, המסלולים המטבוליים של מטבוליטים אנדוגניים נחקרו באמצעות מטבולומיקה בכבד עם כרומטוגרפיה גזית-ספקטרומטריית מסה (GC-MS) ושיטות נתונים מרובות משתנים לאחר מתן SLBXS. לבסוף, מטרות מפתח נותחו בניסוי כדי להבהיר את ההשפעות האנטי-אנמיות והמנגנונים המולקולריים של SLBXS.

Protocol

כל הליכי הניסוי אושרו על ידי ועדת האתיקה של חיות מעבדה של אוניברסיטת חוביי לרפואה סינית (HBUCMS201912015). עכברי C57BL/6 זכרים (משקל 20-22 גרם) שוכנו בחדר ספציפי נטול פתוגנים עם לחות יחסית של 50%-60% וטמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ±-2 מעלות צלזיוס, נתונים למחזור אור של 12 שעות ו-12 שעות חושך, וקיבלו גישה חופשית למזון ומים. לפני תחילת הניסוי, לכל העכברים הותר שבוע אחד להתאקלם בסביבה. עכברים חולקו באופן אקראי לאחת מארבע הקבוצות הבאות (n = 12): ביקורת, מודל, סירופ Fu-Fang-E-Jiao (FFEJS, תרופה חיובית, הניתנת תוך קיבה ב-7.8 מ"ל/ק"ג), ו-SLBXS (ניתן תוך קיבה ב-11.7 מ"ל/ק"ג). עכברים בקבוצות הביקורת והמודל קיבלו כמויות שוות של מי מלח. עכברים בכל הקבוצות קיבלו מתן תוך-קיבה של התרופות המתאימות פעם ביום למשך שבועיים. פרטים על התרופות, הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הקמת מודל אנמיה בעכברים

  1. שקלו 2 גרם של אצטילפנילהידרזין (APH) באמצעות יתרה אלקטרונית והעבירו אותו לכוס של 150 מ"ל. מוסיפים 100 מ"ל מי מלח ומערבבים עם מוט זכוכית עד שה-APH נמס לחלוטין.
  2. ביסס את מודל העכבר של אנמיה על ידי הזרקה תת עורית של 2% APH כפי שהוכן בשלב 1.1 ביוםהראשון, הרביעי והשביעי במינונים של 200 מ"ג/ק"ג, 100 מ"ג/ק"ג ו-100 מ"ג/ק"ג, בהתאמה11.
    הערה: החל מהיום הראשון, עכברים בקבוצות FFEJS (7.8 מ"ל/ק"ג) ו-SLBXS (11.7 מ"ל/ק"ג) קיבלו מתן תוך קיבה פעם ביום למשך שבועיים. עכברים בקבוצות הביקורת והמודל קיבלו כמויות שוות של מי מלח פעם ביום במשך שבועיים.

2. קביעת מדד הכבד

  1. בסוף הניסוי, שקלו כל עכבר באמצעות משקל אלקטרוני.
  2. להרדים את העכברים על ידי שאיפת 2% איזופלורן. לחץ על גלגל העין של העכברים כדי להפוך אותו להיפרמי ובולט. הסר במהירות את גלגל העין בעזרת מלקחיים ואסוף את הדם בצינורות דגימה הפריניים.
  3. אבטח את העכברים המורדמים משלב 2.2 לצלחת מניפולציה כירורגית.
  4. בצע חתך מלא לאורך קו האמצע של הבטן בעזרת אזמל. נתח בזהירות ובודד את רקמת הכבד השלמה12, ולאחר מכן מדוד את משקלה עם איזון אלקטרוני.
    הערה: מדד הכבד של כל עכבר מחושב באמצעות הנוסחה הבאה: אינדקס כבד = משקל כבד/משקל גוף.

3. אנליזה המטולוגית

  1. נער בעדינות את הצינור המכיל את דגימת הדם הפרינית משלב 2.2 כדי למנוע קרישת דם.
  2. הנח את דגימת הדם מתחת למחט ההזרקה כדי להבטיח שהיא שקועה במלואה במחט.
  3. לחץ על כפתור זיהוי אוטומטי כדי למדוד את ספירת תאי הדם האדומים (RBC), המטוקריט (HCT), ספירת תאי דם לבנים (WBC), רמות המוגלובין (HGB) וספירת טסיות דם (PLT) באמצעות מנתח המוציטים אוטומטי לחלוטין.

4. מחקר מטבולומיקה בכבד

  1. הכנת דגימת כבד
    1. הומוגניזציה של דגימות רקמת כבד (50 מ"ג) משלב 2.4 עם 1 מ"ל של מתנול מקורר מראש. צנטריפוגה ב-18,759 x גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס כדי להסיר את המשקעים.
    2. העבירו 200 מיקרוליטר של הסופרנטנט לבקבוקון דגימה באמצעות פיפטה וייבשו בוואקום במייבש הקפאה בטמפרטורה של 35 מעלות צלזיוס למשך שעתיים.
    3. הגיבו את הדגימות המיובשות עם 40 מיקרוליטר של תמיסה של 40 מ"ג/מ"ל של מתוקסיאמין הידרוכלוריד בפירידין למשך 90 דקות ב-30 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הוסיפו 80 מיקרוליטר של N-Methyl-N-(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (MSTFA) עם 1% Trimethylchlorosilane (TMCS) ודגרו למשך 60 דקות ב-37 מעלות צלזיוס.
    4. הוסף 10 מיקרוליטר של n-הקסאן לבקבוקון כדי לסיים את תגובת הנגזרת.
  2. ניתוח מטבולי בכבד
    1. לנתח את הדגימות הנגזרות (1 מיקרוליטר) באמצעות מערכת GC-MS. הפרד את הנגזרות באמצעות עמודה נימית DB-5MS (30 מ' × 0.25 מ"מ × 0.25 מיקרומטר).
      הערה: תנאי תוכנית טמפרטורת התנור נקבעו כדלקמן: 60 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת; יש להעלות ל-325 מעלות צלזיוס בקצב של 10 מעלות צלזיוס לדקה ולשמור למשך 10 דקות. טמפרטורות המזרק, מקור היונים ו-MS נקבעו ל-250 מעלות צלזיוס, 230 מעלות צלזיוס ו-150 מעלות צלזיוס, בהתאמה. הליום (99.999%) שימש כגז נשא בקצב זרימה של 1.1 מ"ל לדקה, ויחס הפיצול נקבע ל-10:1. נעשה שימוש באנרגיית אלומת אלקטרונים של 70 eV וזמן עיכוב ממס של 5.9 דקות.
  3. עיבוד וניתוח נתונים
    1. רכוש והמר נתוני GC-MS גולמיים באמצעות תוכנת MassHunter התואמת.
    2. בצע ניתוח ספקטרלי באמצעות מערכת הזיהוי והזיהוי הספקטרלית האוטומטית של מסה (AMDIS) כלי12.
    3. זהה את כל המטבוליטים באמצעות מסדי הנתונים NIST ו-HMDB (ראה טבלת חומרים).
    4. ייבא את הנתונים לכלי MetaboAnalyst לניתוח חלקי של הריבועים הפחותים (PLS-DA), מבחני t, ניתוח מסלול וניתוח רשת12.

5. ניתוח כתמים מערביים

  1. חלץ את סך החלבונים מרקמת הכבד של העכבר
    1. הוסף 50 מ"ג של רקמת כבד משלב 2.4 ו-250 מיקרוליטר של ליזט תאים להומוגנייזר זכוכית של 1 מ"ל וטחן על קרח במשך 5 דקות.
    2. העבירו את רקמת הכבד הומוגנאט משלב 5.1.1 לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל באמצעות פיפטטור, וצנטריפוגה ב-18,759 x גרם למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן העבירו את הסופרנטנט לצינור חדש של 1.5 מ"ל באמצעות פיפטטור.
  2. קביעת ריכוזי חלבון ועיבוד מקדים של דגימות חלבון
    1. הוסף 2 מיקרוליטר של סופרנטנט משלב 5.1.2, 18 מיקרוליטר של PBS ו-180 מיקרוליטר של תמיסת עבודה BCA ללוח מיקרוטיטר של 96 בארות8.
    2. התנודד את הצלחת על מתנד למשך 30 שניות, השאר אותה למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, וקבע את הספיגה ב-562 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות.
  3. הפרד את סך החלבונים באמצעות SDS-PAGE, העבר לממברנות פלואוריד פוליווינילידן וחסום עם חלב דל שומן5% 8.
  4. דגרו את הממברנות משלב 5.3 עם נוגדנים ראשוניים נגד HIF-1α (1:1000), VEGFA (1:1000), GLA (1:1000), NOS3 (1:1000) ו-β-actin (1:5000) למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.
  5. מניחים את הממברנות משלב 5.4 בקופסת דגירה של נוגדנים, מוסיפים 10 מ"ל TBST ומנערים אופקית ב-111 x גרם בטמפרטורת החדר כדי לשטוף נוגדנים ראשוניים לא קשורים שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד.
  6. הוסף 200 מיקרוליטר של IgG נגד ארנב עיזים (H + L)-HRP (1:1000) לכל ממברנה משלב 5.5 ודגירה למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, חזור על שלב 5.5 כדי לשטוף נוגדן משני לא קשור (עז נגד ארנב IgG (H + L)-HRP).
  7. הוסף 200 מיקרוליטר של תמיסת כימילומינסנט ECL ברגישות גבוהה במיוחד לפני השטח של כל ממברנה משלב 5.6 ודמיין מיד רצועות חלבון באמצעות מערכת ניתוח הדמיה כימילומינסנציה אוטומטית.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. ניתוח הנתונים באמצעות תוכנות סטטיסטיות וגרפים עם ANOVA חד כיווני ואחריו מבחן טוקי.
  2. הצג את התוצאות כממוצע ± סטיית תקן (SD) ושקול ערך P < 0.05 כמובהק סטטיסטית.

תוצאות

כדי לאשר את ההקמה המוצלחת של מודל העכבר לאנמיה ולנתח את ההשפעה של SLBXS על אנמיה, נחקרו תחילה מדד הכבד והפרמטרים ההמטולוגיים. איור 1 ממחיש כי קבוצת המודל הראתה ירידה משמעותית (P < 0.01) בספירת תאי הדם האדומים (RBC), המוגלובין (HGB) והמטוקריט (HCT) בהשוואה לקבוצת הב...

Discussion

אנמיה היא מצב שכיח המשפיע על אנשים רבים ברחבי העולם, במיוחד במדינות מתפתחות1. בסין, חולים משתמשים לעתים קרובות ברפואה סינית מסורתית, כולל רפואה אויגורית, כדי להקל על הסימנים והתסמינים של אנמיה. SLBXS היא תרופה אויגורית המשמשת בפרקטיקה קלינית במשך שנים רבות; עם ?...

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית ההכשרה המיוחדת לכישרונות מדע וטכנולוגיה של מיעוטים, קרן מדעי הטבע של האזור האוטונומי האויגורי שינג'יאנג (2020D03021), הקרנות לתוכנית מפתח לרפואה סינית מסורתית של אוניברסיטת חוביי לרפואה סינית (2022ZZXZ004), ותוכנית צוות החדשנות של טיאנשאן (2020D14030).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AcetylphenylhydrazineShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.C13979660
Automatic chemiluminescence imaging analysis systemShanghai Tanon Life Science Co., Ltd.Tanon-5200
Bicinchoninic acid assay kitThermoFisher ScientificQPBCA-1KT
Capillary columnAgilent J&W Scientific, Agilent Technologies, Inc.DB-5MS
Cell lysis buffer for Western and IPBeyotime BiotechnologyP0013
ChlorotrimethylsilaneShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.C104814
Electronic balanceMettler-Toledo International Inc.ME203E
Electronic scaleMettler-Toledo International Inc.LE104E
Fu-Fang-E-Jiao SyrupDong E E Jiao Co., Ltd.214020031
Fully automatic hemocyte analyzerShenzhen Mindray Animal Care Technology Co., Ltd.IDEXX ProCyte Dx
GC-MS systemAgilent Technologies, Inc.7890B-5977B 
GLA primary antibodyBioworld TechnologyBS77041
Glass homogenizerShanghai Lei Gu Instruments Co., Ltd.B-013001
Glass rod Shanghai Lei Gu Instruments Co., Ltd.B-003904
GraphPad Prism software GraphPad, La JollaVersion 9.0
Heparinized sample tubesChangde BKMAM Biotechnology Co., Ltd.B-ACT1P5
HIF-1α primary antibodyBioworld TechnologyBS3514
HMDB databasehttp://www.hmdb.ca/—
IsofluraneHebei Jindafu Pharmaceutical Co., Ltd.20231202
Male C57BL/6 miceLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.No. SCXK [Liao] 2015-0001
MassHunterAgilent Technologies, Inc.B.08.00
MetaboAnalyst 5.0https://www.metaboanalyst.ca/—
Methoxyamine hydrochlorideShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.E1818113
n-hexaneShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.C14878803
NIST databasehttp://webbook.nist.gov/chemistry/—
NOS3 primary antibodyBioworld TechnologyBS3625
PyridineShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.C13026996
SalineBIOSHARP LIFE SCIENCES2308262009
Shi-Liu-Bu-Xue SyrupXinjiang Uygur Pharmaceutical Co., Ltd.211277
Surgical manipulation plateDIXSGZK-JPB-A
VEGFA primary antibodyBioworld TechnologyAP0742
β-actinABclonal (Shanghai) Trading Co., Ltd.AC026

References

  1. Munoz, M., Gomez-Ramirez, S., Bhandari, S. The safety of available treatment options for iron-deficiency anemia. Expert Opin Drug Saf. 17 (2), 149-159 (2018).
  2. Soliman, A. T., De Sanctis, V., Yassin, M., Wagdy, M., Soliman, N. Chronic anemia and thyroid function. Acta Biomed. 88 (1), 119-127 (2017).
  3. Pivina, L., Semenova, Y., Dosa, M. D., Dauletyarova, M., Bjorklund, G. Iron deficiency, cognitive functions, and neurobehavioral disorders in children. J Mol Neurosci. 68 (1), 1-10 (2019).
  4. Lumbiganon, P., et al. Indirect causes of severe adverse maternal outcomes: a secondary analysis of the WHO Multicountry Survey on Maternal and Newborn Health. BJOG. 121 (Suppl 1), 32-39 (2014).
  5. Shaddy, R. E., et al. Systematic literature review on the incidence and prevalence of heart failure in children and adolescents. Pediatr Cardiol. 39 (3), 415-436 (2018).
  6. China Medical Association of Minorities. . Guidelines for clinical use of minority drugs. , (2018).
  7. Yu, W. Q. Clinical efficiency of Pomegranate blood-enriching syrup in the treatment of iron deficiency anemia. J Med Pharm Chin Minor. 26 (11), 11-12 (2020).
  8. Zhang, D. N., et al. Mechanism of Shiliu Buxue Syrup for anemia using integrated metabolomics and network pharmacology. Anal Biochem. 653, 114774 (2022).
  9. Nielsen, J. Systems biology of metabolism. Annu Rev Biochem. 86, 245-275 (2017).
  10. Wang, M., et al. Metabolomics highlights pharmacological bioactivity and biochemical mechanism of traditional Chinese medicine. Chem Biol Interact. 273, 133-141 (2017).
  11. Ben, C. N. Establishment and experimental research of "Blood Deficiency" animal model. Lab Animal Sci. (03), 5-10 (1994).
  12. Cao, S., et al. Integrative transcriptomics and metabolomics analyses provide hepatotoxicity mechanisms of asarum. Exp Ther Med. 20 (2), 1359-1370 (2020).
  13. Yang, H. Y., Liu, M. L., Luo, P., Yao, X. S., Zhou, H. Network pharmacology and metabolomics in the study of traditional Chinese medicine for cardiovascular diseases. Phytomedicine. 104, 154268 (2022).
  14. Croci, S., Pedrazzi, G., Passeri, G., Piccolo, P., Ortalli, I. Acetylphenylhydrazine induced haemoglobin oxidation in erythrocytes studied by Mossbauer spectroscopy. Biochim Biophys Acta. 1568 (1), 99-104 (2001).
  15. Liebowitz, J., Cohen, G. Increased hydrogen peroxide levels in glucose 6-phosphate dehydrogenase deficient erythrocytes expose to acetylphenylhydrazine. Biochem Pharmacol. 17 (6), 983-988 (1968).
  16. Tarasenko, T. N., McGuire, P. J. The liver is a metabolic and immunologic organ: A reconsideration of metabolic decompensation due to infection in inborn errors of metabolism (IEM). Mol Genet Metab. 121 (4), 283-288 (2017).
  17. Topalovic, A., Knezevic, M., Gacnik, S., Mikulic-Petkovsek, M. Detailed chemical composition of juice from autochthonous pomegranate genotypes (Punica granatum L.) grown in different locations in Montenegro. Food Chem. 330, 127261 (2020).
  18. Legua, P., et al. Total phenols and antioxidant capacity in 10 Moroccan pomegranate varieties. J Food Sci. 77 (1), C115-C120 (2012).
  19. Rodrigo, R., Miranda, A., Vergara, L. Modulation of endogenous antioxidant system by wine polyphenols in human disease. Clin Chim Acta. 412 (5-6), 410-424 (2011).
  20. Hussain, T., et al. Oxidative stress and inflammation: What polyphenols can do for us. Oxid Med Cell Longev. 2016, 7432797 (2016).
  21. Sudheesh, S., Vijayalakshmi, N. R. Flavonoids from Punica granatum--potential antiperoxidative agents. Fitoterapia. 76 (2), 181-186 (2005).
  22. Riaz, A., Khan, R. A. Anticoagulant, antiplatelet and antianemic effects of Punica granatum (pomegranate) juice in rabbits. Blood Coagul Fibrinolysis. 27 (3), 287-293 (2016).
  23. Balasubramani, S. P., Varghese, R. K., Vishnuprasad, C. N., Venkatasubramanian, P. Pomegranate juice enhances iron dialysability and assimilation in in-vitro cell-free and cell-based models. Plant Foods Hum Nutr. 75 (2), 272-278 (2020).
  24. Jilani, T., Iqbal, M. P. Does vitamin E have a role in treatment and prevention of anemia. Pak J Pharm Sci. 24 (2), 237-242 (2011).
  25. Farrell, P. M., Bieri, J. G., Fratantoni, J. F., Wood, R. E., di Sant'Agnese, P. A. The occurrence and effects of human vitamin E deficiency. A study in patients with cystic fibrosis. J Clin Invest. 60 (1), 233-241 (1977).
  26. Ukab, W. A., Sato, J., Wang, Y. M., van Eys, J. Xylitol mediated amelioration of acetylphenylhydrazine-induced hemolysis in rabbits. Metabolism. 30 (11), 1053-1059 (1981).
  27. Ahuja, V., et al. Biological and pharmacological potential of xylitol: A molecular insight of unique metabolism. Foods. 9 (11), 1592 (2020).
  28. Nikas, I. P., Paschou, S. A., Ryu, H. S. The role of nicotinamide in cancer chemoprevention and therapy. Biomolecules. 10 (3), 477 (2020).
  29. Katayoshi, T., Yamaura, N., Nakajo, T., Kitajima, N., Tsuji-Naito, K. Porcine placental extract increases the cellular NAD levels in human epidermal keratinocytes. Sci Rep. 12 (1), 19040 (2022).
  30. Bartoszewski, R., et al. Primary endothelial cell-specific regulation of hypoxia-inducible factor (HIF)-1 and HIF-2 and their target gene expression profiles during hypoxia. Faseb J. 33 (7), 7929-7941 (2019).
  31. Lee, S. H., Golinska, M., Griffiths, J. R. HIF-1-independent mechanisms regulating metabolic adaptation in hypoxic cancer cells. Cells. 10 (9), 2371 (2021).
  32. Sato, T., Takeda, N. The roles of HIF-1α signaling in cardiovascular diseases. J Cardiol. 81 (2), 202-208 (2023).
  33. Ratcliffe, P. J. Oxygen sensing and hypoxia signalling pathways in animals: The implications of physiology for cancer. J Physiol. 591 (8), 2027-2042 (2013).
  34. Li, L. J., Huang, Q., Zhang, N., Wang, G. B., Liu, Y. H. miR-376b-5p regulates angiogenesis in cerebral ischemia. Mol Med Rep. 10 (1), 527-535 (2014).
  35. Tejero, J., Shiva, S., Gladwin, M. T. Sources of vascular nitric oxide and reactive oxygen species and their regulation. Physiol Rev. 99 (1), 311-379 (2019).
  36. Fujii, J., et al. Erythrocytes as a preferential target of oxidative stress in blood. Free Radic Res. 55 (5), 562-580 (2021).
  37. Huang, J. W., et al. High expression of HIF-1α alleviates benzene-induced hematopoietic toxicity and immunosuppression in mice. Environ Pollut. 311, 119928 (2022).
  38. Zhang, Z., Yao, L., Yang, J., Wang, Z., Du, G. PI3K/Akt and HIF-1 signaling pathway in hypoxia-ischemia (Review). Mol Med Rep. 18 (4), 3547-3554 (2018).
  39. Del Balzo, U., et al. Nonclinical characterization of the hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor roxadustat, a novel treatment of anemia of chronic kidney disease. J Pharmacol Exp Ther. 374 (2), 342-353 (2020).
  40. Bhatia, S., Singh, A., Batra, N., Singh, J. Microbial production and biotechnological applications of α-galactosidase. Int J Biol Macromol. 150, 1294-1313 (2020).
  41. Conte, F., van Buuringen, N., Voermans, N. C., Lefeber, D. J. Galactose in human metabolism, glycosylation and congenital metabolic diseases: Time for a closer look. Biochim Biophys Acta Gen Subj. 1865 (8), 129898 (2021).
  42. Wang, Y. Y. . Investigate the effect of galacto-oligosaccharide supplementation on intestinal absorption of iron in rats. [Master's Thesis]. , (2019).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

HIF 1

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved