علم الأدوية الشبكي والتحقق من صحة آليات مضادات الاكتئاب في Qiangzhifang في نموذج فئران الاكتئاب الناجم عن الإجهاد المزمن

قيمت هذه الدراسة الفعالية المضادة للاكتئاب ل Qiangzhifang في نموذج الفئران للاكتئاب الناجم عن الإجهاد المزمن وأوضحت تأثيره التنظيمي على مسارات HIF-1 و JAK-STAT عن طريق علم الأدوية الشبكي وتحليل الإرساء الجزيئي.

الاكتئاب هو اضطراب معقد يشكل تحديات علاجية كبيرة. يوضح Qiangzhifang (QZF) ، وهو مركب يستخدم في الطب الصيني التقليدي ، الفعالية السريرية المحتملة في علاج الاكتئاب. ومع ذلك ، لم يتم توضيح آليات العمل والمكونات النشطة ل QZF بشكل كامل. كان الهدف الأساسي من هذه الدراسة هو توضيح المكونات النشطة الفعالة والآليات الجزيئية المحتملة ل QZF للتخفيف من الاكتئاب من خلال دمج تنبؤات علم الأدوية الشبكي مع عمليات التحقق التجريبية.

اعتمدنا نموذج الفئران لإجهاد ضبط النفس المزمن (CRS) وأجرينا اختبارات سلوكية مثل اختبار المجال المفتوح (OFT) ، واختبار تفضيل السكروز (SPT) ، واختبار السباحة القسري (FST) لتقييم الآثار العلاجية ل QZF على الاكتئاب. فيما يتعلق بالمعلمات السلوكية ، أظهرت مجموعة QZF كتلة جسم أعلى بكثير ، ونسبة تفضيل السكروز ، ووقت الإقامة في المنطقة المركزية مقارنة بالمجموعة النموذجية (P < 0.01 ، P < 0.01 ، P < 0.01) ، وانخفاض كبير في وقت الشلل في اختبار السباحة القسري (P < 0.001). تشير دراسات علم الأدوية الشبكي والالتحام الجزيئي إلى أن QZF قد يكون له تأثيرات مضادة للاكتئاب عن طريق تعديل مسارات HIF-1 و JAK-STAT ، مع الجينات المستهدفة الرئيسية بما في ذلك AKT1 و IL-6 و MTOR و TP53 ، المتورطة في الالتهاب والحماية العصبية وموت الخلايا المبرمج. في الختام ، تقدم هذه الدراسة رؤى جديدة حول تحديث وتطوير مركبات الطب الصيني للعلاج الشامل للاكتئاب.

يتميز الاكتئاب ، وهو تحد صحي عالمي منتشر ، بمزاج منخفض مستمر ، وانخفاض الاهتمام والمتعة ، وإعاقات إدراكية وعصبية¹. كما ذكرت منظمة الصحة العالمية ، يؤثر الاكتئاب على ما يقرب من 380 مليون شخص في جميع أنحاء العالم ، ومن المتوقع أن يزيد هذا^{الرقم 2}. باعتباره اضطرابا عقليا معقدا ومتعدد العوامل ، يؤثر الاكتئاب على نوعية حياة المرضى ويشكل عبئا اقتصاديا وطبيا كبيرا على المجتمع ، يتميز بارتفاع معدلات الإصابة والتكرار ومعدلات الإعاقة³.

مسببات الاكتئاب معقدة ، مع الآليات الدقيقة غير المفهومة تماما بعد. مع تقدم البحث في هذا المجال ، حظيت عوامل مثل الالتهاب العصبي والإجهاد التأكسدي وموت الخلايا المبرمج باهتمام كبير. تشير الدراسات إلى أن المرضى الذين يعانون من الاكتئاب يظهرون مستويات مرتفعة من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات مثل عامل نخر الورم والإنترلوكين -1β مقارنة بالأفراد الأصحاء ، ويلاحظ انتشار أعلى للاكتئاب لدى أولئك الذين يعانون من حالات^{التهابية 4}. في حالة الإجهاد التأكسدي ، يتم الإفراط في إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) استجابة للمنبهات الضارة ، مما يطغى على دفاعات الجسم المضادة للأكسدة ويؤدي إلى اختلال التوازن بين أنظمة الأكسدة ومضادات الأكسدة ، مما يتسبب في تلف الأنسجة. يمكن أن يؤدي الإجهاد التأكسدي المرتفع في الاكتئاب إلى تعزيز بيروكسيد الدهون وتفاقم تلف الجينات والبروتينات الخلوية ، مما يؤثر على وظيفة الخلايا العصبية ويساهم في تنكس الخلايا العصبية ، وموت الخلايا المبرمج ، وضعف اللدونة⁵. بالإضافة إلى ذلك ، ترتبط التعديلات التي لوحظت في العروض السريرية والعلامات الكيميائية الحيوية وهياكل الدماغ لدى مرضى الاكتئاب بموت الخلايا المبرمج. تكشف دراسات التصوير عن انخفاض حجم الحصين وضمور لدى مرضى الاكتئاب ، حيث يحتمل أن يلعب موت الخلايا المبرمج العصبي دورا محوريا في هذه^{التغييرات 6}.

حاليا ، العلاج بالعقاقير هو النهج الأساسي لإدارة الاكتئاب ، مع مثبطات امتصاص السيروتونين الانتقائية (SSRIs) ومثبطات امتصاص النورادرينالين (NRIs) التي يتم استخدامها بشكل متكرر في الممارسة السريرية⁷. ومع ذلك ، فإن هذه الأدوية مصحوبة بآثار ضارة كبيرة. بالإضافة إلى أعراض الجهاز العصبي المركزي مثل الصداع والأرق, معظم مضادات الاكتئاب أيضا عادة ما يحمل الآثار الجانبية المعدية المعوية, بما في ذلك الغثيان والإسهال ^8,9. يمكن أن تسبب بعض مضادات الاكتئاب أيضا العجز الجنسي¹⁰ ، مما يؤثر بشدة على نتائج العلاج ويقلل من الالتزام بالأدوية بين مرضى الاكتئاب¹¹. علاوة على ذلك ، فإن فعالية هذه الأدوية محدودة بالنسبة لبعض المرضى. أشارت دراسات التمثيل الغذائي الحديثة إلى أن الاختلافات الفردية في ميكروبات الأمعاء قد تؤثر على فعالية الدواء¹². لذلك ، يظل تطوير علاجات أكثر أمانا وفعالية محورا حاسما في أبحاث الاكتئاب.

أظهرت تركيبات الطب الصيني التقليدي إمكانات كبيرة في علاج الاكتئاب ، تعزى إلى آثارها التآزرية التي تنطوي على مكونات وأهداف ومسارات متعددة¹³. يفترض الطب الصيني التقليدي أن يانغ تشي القوي ضروري للحفاظ على حيوية الجسم. لذلك ، اقترح البروفيسور يوان تشينغ دينغ ، مستفيدا من المبادئ الفريدة لتشخيص وعلاج الطب الصيني التقليدي والخبرة السريرية الواسعة ، أن "يانغ يو شين توي" هو التسبب الأساسي للاكتئاب. بناء على هذا المفهوم ، طور Qiangzhifang (QZF) لمعالجة هذا التسبب في^{المرض على وجه التحديد 14}. أظهر التطبيق السريري ل QZF في علاج الاكتئاب فعالية كبيرة ، حيث بلغ إجمالي معدل الفعالية 71.43٪ ¹⁵. يتكون QZF من العديد من المواد الطبية الصينية التقليدية ، بما في ذلك Ramulus cinnamomi (gui zhi ، GZ) ، Polygala tenuifolia (يوان zhi ، YZ) ، Alpinia oxyphylla miq (يي zhi ren ، YZR) ، Paeonia lactiflora (باي شاو ، BS) ، Fritillariae cirrhosae bulbus (chuan bei mu ، CBM) ، Panax ginseng (رن شين ، RS) ، رهوديولا الوردية L (هونغ جينغ تيان ، HJT) ، وعرق السوس (جان كاو ، GC) (الملف التكميلي 1). وقد أظهرت الدراسات أن بوليغالا تينويفوليا غنية بالصابونين ولها تأثيرات وقائية^{للأعصاب 16}. وبالمثل ، يوضح زوج عشب Ramulus Cinnamomi-Paeonia lactiflora فعالية محتملة في تخفيف الألم والاكتئاب¹⁷. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يقلل إجمالي الصابونين في الجينسنغ من مستويات السيتوكين المسببة للالتهابات في الحصين ، ويحسن السلوك الاكتئابي ، ويخفف من تلف أعصاب الحصين في الفئران¹⁸. يحتوي عرق السوس بشكل أساسي على triterpenoids و flavonoids. يمكن أن تلعب مركبات الفلافونويد الكلية لعرق السوس (LF) دورا مضادا للاكتئاب عن طريق تحسين السلوك الاكتئابي ، وتعديل مسار إشارات BDNF / TrkB ، وتعزيز اللدونة المشبكية¹⁹. ومع ذلك ، فإن الآليات المحددة الكامنة وراء التأثيرات المضادة للاكتئاب ل QZF لا تزال غير واضحة ، مما يحد من تطبيقه على نطاق واسع.

لذلك ، تهدف دراستنا إلى إنشاء نموذج فئران الاكتئاب CRS ، وإظهار التأثير العلاجي ل QZF على الاكتئاب في الفئران من خلال التجارب السلوكية ، والتقييم المنهجي لآلية مضاد الاكتئاب ل QZF باستخدام علم الأدوية الشبكي وتقنية الإرساء الجزيئي²⁰. من خلال توضيح المكونات النشطة والأهداف المحتملة ل QZF ، يمكن تحديد الأهداف الأساسية للاكتئاب بدقة. نعتقد أنه من خلال الاستكشاف العميق لآلية عمل QZF ، لا يمكننا فقط توفير خيارات علاجية أكثر أمانا وفعالية لمرضى الاكتئاب ولكن أيضا توفير أساس علمي لتطبيق الطب الصيني التقليدي في علاج الاكتئاب.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات تجارب بجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة: YYLW2023000327) وامتثلت لدليل رعاية واستخدام المختبر الصادر عن المعاهد الوطنية للصحة. في هذه التجربة ، استخدمنا 40 من ذكور الوستار الأصحاء ، درجة SPF ، بمتوسط وزن الجسم (140 ± 10) جم (الشكل 1). راجع جدول المواد للحصول على قائمة بجميع المواد والمعدات والبرامج المستخدمة في هذا البروتوكول.

1. نموذج اكتئاب الفئران

1. إسكان وتجميعها
   1. ادخل إلى غرفة التكاثر مع وقم بترقيمها باستخدام أداة تعليم الذيل.
   2. ضع الفئران بشكل فردي في أقفاص ، مع الحفاظ على درجة حرارة 21 ± 2 درجة مئوية ودورة ضوء / ظلام 12 ساعة / 12 ساعة.
   3. تأقلم الفئران في المختبر لمدة 7 أيام ، مما يوفر الوصول المخصص إلى الغذاء والماء أثناء التعامل معها يوميا للتكيف.
   4. بعد فترة التأقلم ، قم بقياس وزن الجسم ، وإجراء اختبارات تفضيل السكروز (SPT) واختبارات المجال المفتوح (OFT).
   5. بناء على البيانات التجريبية ، قسم الفئران إلى أربع مجموعات ، مع التأكد من أن كل مجموعة تتكون من 10 فئران: مجموعة التحكم (CON) ، ومجموعة النموذج (CRS) ، ومجموعة QZF ، ومجموعة فلوكستين (F).
2. إنشاء نموذج الفئران لإجهاد ضبط النفس المزمن (CRS)
   1. بناء جهاز تقييد الفئران. حدد أنبوبا بلاستيكيا شفافا بقطر وطول مناسبين لحجم الفئران²¹ ، مما يسمح للفأر بالوقوف والانعطاف إلى الداخل مع منع الهروب. استخدم مثقاب ثقب لحام كهربائي لإنشاء ثقوب على جانبي الأنبوب البلاستيكي وعلى الغطاء لضمان دوران الهواء المناسب.
   2. ضع الفئران برفق في أجهزة التقييد (باستثناء تلك الموجودة في المجموعة C) بعد ساعة واحدة من تناول الدواء يوميا داخل المعدة ، مع التأكد من أنها في وضع مريح.
   3. حرمان جميع مجموعات الفئران من الطعام والماء خلال فترة التقييد. بعد انتهاء فترة ضبط النفس ، زودهم بالطعام والماء بشكل موحد. قم بإصلاح مدة التقييد اليومية في 6 ساعات (من 9:30 ساعة إلى 15:30 ساعة) وحافظ عليها لمدة 28 يوما متتاليا.

2. التدخل الدوائي

1. يتم تطبيق الدواء عن طريق التزقيم: 1 مل من المحلول/100 غرام من وزن الجسم، فلوكستين (2.7 ملغ-1·كغ-1·^يوم-1) وQZF (2 غ·^كغ-1·^يوم-1)²². تزويد المجموعتين C و CRS بمحلول ملحي عادي مكافئ للتحكم أحادي المتغير.
   ملاحظة: تم إجراء الإعطاء اليومي للأدوية في الساعة 08:00 ، وبدأ بشكل متزامن مع إنشاء النموذج واستمر طوال فترة النمذجة التي استمرت 28 يوما.

3. اختبار تفضيل السكروز (SPT)

1. حرمان الفئران من الطعام والماء لمدة 24 ساعة قبل بدء التجربة.
2. قم بإعداد محلول سكروز مائي بنسبة 1٪ واملأ المحلول والماء النقي في زجاجات الشرب الخاصة بحيوانات التجارب للوزن. قم بقياس استهلاك الماء النقي وماء السكروز عن طريق وزن الزجاجات قبل التجربة وبعدها.
3. ضع زجاجة واحدة من محلول السكروز وزجاجة واحدة من الماء النقي عند كمية المياه لكل غطاء قفص للفئران ، واحدة على اليسار والأخرى على اليمين ، للوصول المجاني إلى الشرب. لمنع الفئران من تفضيل جانب واحد لتناول الماء ، قم بتبديل مواضع زجاجات المياه على اليسار واليمين بعد 30 دقيقة من التجربة.
4. بعد 1 ساعة من التجربة ، قم بإزالة جميع زجاجات المياه ، ووزنها على الفور ، وسجل استهلاك محلول السكروز والماء النقي. احسب نسبة تفضيل السكروز الأسبوعية باستخدام الصيغة:
   قيمة تفضيل السكروز = × 100٪

4. قياس وزن الجسم

1. قم بوزن الفئران أسبوعيا عند دخولها المختبر وحدد الوقت المحدد للوزن في 7:00 صباحا. ضع هذا الجدول الزمني لتسهيل مراقبة تغيرات وزن الجسم.

5. اختبار المجال المفتوح (OFT)

1. قبل بدء التجربة ، تأقلم الفئران مع الغرفة السلوكية لمدة ساعة واحدة واضبط الإضاءة في صندوق الحقل المفتوح لضمان التوزيع المتساوي. تأكد من أن الفئران مرئية بوضوح في برنامج التتبع.
2. استخدم نظام تتبع الفيديو وتحليله لتقسيم السطح السفلي لصندوق الحقل المفتوح (50 سم × 50 سم × 50 سم) إلى تسع شبكات مربعة متساوية المساحة. قم بتعيين الشبكات الثمانية المجاورة للجدران كمنطقة طرفية والشبكة المركزية كمنطقة مركزية.
3. ضع الجرذ في المنطقة المركزية لصندوق الحقل المفتوح. سجل حركة الفئران لمدة 5 دقائق باستخدام نظام تتبع الفيديو.
4. بعد اختبار كل فأر ، قم بتنظيف الغرفة بنسبة 75٪ من الإيثانول لإزالة الرائحة المتبقية ومنع التداخل مع سلوك الجرذ التالي. أدخل المسافة الإجمالية (مم) لأنشطة المجال المفتوح وعدد الإدخالات في الشبكة المركزية في سجلات OFT.

6. اختبار السباحة القسري (FST)

ملاحظة: تشتمل تجربة السباحة القسرية للفئران على تجربة مسبقة وتجربة رسمية. قم بإجراء التجربة المسبقة قبل 24 ساعة من التجربة الرسمية ، باتباع نفس الإجراء ، مع سباحة الفئران لمدة 15 دقيقة.

1. انقل التجربة إلى الغرفة السلوكية قبل 30 دقيقة على الأقل من التجربة للسماح لها بالتأقلم مع البيئة.
2. قم بإعداد أسطوانة ماء زجاجية أسطوانية شفافة (ارتفاع 50 سم وقطر 20 سم) واملأها بالماء عند 23-25 درجة مئوية. اضبط عمق الماء بناء على وزن ، مع التأكد من بقاء ذيل على مسافة معينة من قاع الأسطوانة.
3. ضع الفئران ببطء في أسطوانة الماء وحافظ على الهدوء طوال التجربة. قم بتنشيط الكاميرا ونظام الحصول على الإشارة. مراقبة وتسجيل مدة الجمود العائم في غضون 300 ثانية. قم بإزالة الفئران على الفور من الماء وجففها في نهاية التجربة.
4. بعد كل جلسة ، استبدل الماء لمنع أي تأثير على الجرذ التالي.

7. شبكة التنبؤ الدوائي

1. مجموعة من مركبات QZF والأهداف المفترضة
   1. الوصول إلى قاعدة بيانات علم الأدوية لأنظمة الطب الصيني التقليدي (TCMSP) (https://old.tcmsp-e.com/)²³ ، وقاعدة بيانات HERB²⁴ ، وقاعدة بيانات TCMID (https://www.bidd.group/TCMID/). استخدم أسماء الطب الصيني التقليدي الثمانية في QZF ، بما في ذلك GZ و YZ و YZR و BS و CBM و RS و HJT و ZGC ، ككلمات رئيسية للبحث عن المركبات النشطة وأهداف الأعشاب. جمع الأهداف من TCMSP والتنبؤ بالهدف السويسري (http://www.swisstargetprediction.ch/). قم بتعيين قيمة الفلتر إلى الاحتمال* > 0.
      ملاحظة: عادة ، تم تضمين المكونات كمكونات نشطة بناء على خصائصها الدوائية: التوافر البيولوجي عن طريق الفم (OB) ≥ 30٪ والخصائص الشبيهة بالدواء (DL) ≥ 0.18²⁵.
2. التنبؤ بأهداف المرض
   1. ابحث عن الكلمة الرئيسية "الاكتئاب" في قاعدة بيانات GeneCards (https://www.genecards.org/) ، واحصل على أهداف جينية مرتبطة بالاكتئاب ، وقم بتنزيل جدول البيانات الإلكتروني لأهداف الأمراض ، وقم بتصفية درجات الجينات الأعلى من متوسط القيمة ، وقم بتجميع قائمة بأهداف الاكتئاب²⁶.
3. الشبكة المستهدفة بالأمراض المكونة الدوائية
   1. أنشئ جدول بيانات جديدا وقم بتعبئته بأهداف متعلقة بالاكتئاب وأهداف الأدوية في العمود نفسه. انقر فوق ابدأ في شريط القائمة | التنسيق الشرطي | قواعد تمييز الخلايا | قيم مكررة. حدد تنسيقا (على سبيل المثال، "تعبئة حمراء فاتحة") في مربع الحوار الذي يظهر²⁷، انقر فوق موافق لعرض النتائج.
   2. قم بتشغيل برنامج تحليل الشبكة واستيراد ملف جدول البيانات بالنقر فوق ملف في شريط القائمة | استيراد | الشبكة. قم بتحسين مظهر الشبكة عن طريق ضبط حجم ولون العقد في لوحة النمط الموجودة في لوحة التحكم اليسرى. قم بإجراء تحليل طوبولوجيا الشبكة بالنقر فوق الأدوات في شريط القائمة | تحليل الشبكة²⁷.
4. شبكة التفاعل بين البروتين والبروتين (PPI)
   1. قم بالوصول إلى أداة Jvenn (https://jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html) ، وقم بتحميل الأهداف المركبة وأهداف المرض بشكل منفصل ، ورسم الجينات المتداخلة (OGE) بين الأهداف المفترضة المركبة وأهداف المرض. انقر فوق الأرقام الموجودة في الصورة وانسخها في جدول بيانات وقم بتنزيل صورة مخطط Venn.
   2. قم بالوصول إلى قاعدة بيانات STRING (https://stringdb.org/)²⁸، وأدخل OGEs من جدول البيانات في قاعدة البيانات. على وجه التحديد، الصق قائمة الأهداف المتداخلة لمكافحة الاكتئاب QZF في مربع الحوار قائمة الأسماء . حدد الإنسان العاقل في قسم الكائنات الحية وانقر فوق بحث | متابعة. حدد خيار التصدير من شريط العنوان وقم بتنزيل جدول ملخص شبكة PPI في كل من تنسيقات PNG و TSV²⁹.
5. فحص البروتينات الأساسية
   1. ابدأ تشغيل برنامج تحليل الشبكة (https://cytoscape.org/). ثم ، في شريط القائمة ، انقر فوق ملف | استيراد | الشبكة | ملف لاستيراد ملف تنسيق TSV الذي تم إنشاؤه في الخطوة^{السابقة 30}.
   2. حدد تحليل الشبكة في شريط القائمة وانقر فوق الزر تحليل . بعد ذلك ، اعرض نتائج التحليل وافهم الخصائص الهيكلية الإجمالية للشبكة ، مثل عدد العقد وعدد الحواف ومتوسط الدرجة.
   3. حدد التطبيقات | مدير التطبيقات في شريط القائمة. ابحث عن MCODE، وقم بتثبيت المكون الإضافي، وقم بتشغيل المكون الإضافي للحصول على هدف المركز. بعد ذلك ، ابحث عن CytoNCA ، وقم بتثبيت المكون الإضافي ، وركز على قيم المعلمات الثلاث للدرجة ومركزية التقارب (CC) ومركزية العلاقة (BC). وفقا لقيم هذه المعلمات ، قم بفحص العقد ذات الدرجة الأعلى و CC و BC ، والتي تعتبر عموما بروتينات أساسية³¹.
6. تحليل تخصيب علم الأنطولوجيا الجيني (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG)
   1. افتح منصة المعلوماتية الحيوية (https://www.omicshare.com/). انقر فوق قائمة الأدوات ، وابحث عن أداة تحويل جين المعرف ، وانقر عليها. ثم انقر فوق الزر تحميل الملف ، وحدد الخطوة التي تم إنشاؤها في جوهر الجينات المستهدفة ، وقم بتنزيل قائمة معرف الملف المحول.
   2. في قائمة الأدوات ، انقر فوق أداة تحليل إثراء KEGG الديناميكي . قم بتحميل قائمة معرف الجينات. في خيار الأنواع ، حدد Homo sapiens وانقر فوق الزر إرسال .
   3. في قائمة الأدوات ، انقر فوق أداة تحليل إثراء GO الديناميكي | خيار الجين | خيار تحميل الملف. حدد قائمة معرف الجينات وفي خيار الأنواع ، حدد Homo sapiens. حدد نوع GO للتحليل ، بما في ذلك العملية البيولوجية والوظيفة الجزيئية والمكون الخلوي.
   4. للحصول على نتائج تحليل التخصيب KEGG و GO ، قم بتعيين عتبة الترشيح على أنها p < 0.05. رتب التهم بترتيب تنازلي.

8. التحقق من الإرساء الجزيئي

1. قم بزيارة موقع PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). أدخل المركبات المستهدفة في شريط البحث. انقر فوق هيكل 2D وقم بتنزيله.
2. افتح قاعدة بيانات PDB (https://www.Rcsb.org/). حدد الهيكل البلوري بدقة عالية ويحتوي على الترابط الأصلي. قم بتنزيل ملف PDB.
3. لتحسين بنية البروتين ، افتح برنامج التصور الجزيئي. قم بتحميل ملف PDB الذي تم تنزيله. قم بإزالة جزيئات الماء وحفظ ملف PDB المحسن.
4. افتح برنامج الإرساء الجزيئي واستورد ملف PDB المحسن. في AutoDockTools ، انقر فوق تحرير | احذف الماء لحذف جزيئات الماء. انقر فوق تحرير | أضف الهيدروجين | أضف لإضافة ذرات الهيدروجين إلى البروتين والترابط²⁹.
5. في AutoDockTools، قم بتعيين شريط المستقبل إلى receptor.pdbqt وشريط الترابط إلى ligand.pdbqt. افتح pdbqt. لعرض مواقع الربط للبروتين والترابط وتعيين حجم وموضع صندوق الإرساء للتأكد من أنه يمكن أن يحيط تماما ببروتين المستقبل ومركب الترابط. في AutoDockTools ، انقر فوق Grid | حدد مربع الشبكة لتعيين الإحداثيات المركزية وأبعاد الصندوق واستخدام القيم الافتراضية للرسو الجزيئي. سيتم فرز إطارات الإرساء تلقائيا بترتيب تنازلي لطاقات الربط.
6. افتح ملف النتائج وسجل قيمة طاقة الربط المثلى. تشير طاقات الربط المنخفضة إلى ارتباط أكثر استقرارا. استخدم برنامج التصور الجزيئي لتحميل ملف النتيجة. اضبط العرض واللون لعرض تفاعل الترابط والمستقبلات بوضوح.

9. التحليل الإحصائي

1. إجراء التحليل الإحصائي في برنامج تحليل البيانات العلمية والتصور وتمثيل جميع البيانات كمتوسط ± SEM. استخدام المقاييس المتكررة ثنائية الاتجاه ANOVA للمقارنات بين المجموعات قبل وبعد إعطاء الدواء. استخدم ANOVA أحادي الاتجاه للمقارنات بين أكثر من مجموعتين.
2. خذ قيمة P < 0.05 على أنها ذات دلالة إحصائية.

نتائج الاختبار السلوكي في نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CRS

نتائج اختبار تفضيل السكروز
في خط الأساس، لم يكن هناك فرق في معامل تفضيل السكروز بين المجموعات (P > 0.05). بعد 28 يوما من التدخل ، كان معامل تفضيل السكروز لمجموعة CRS أقل بشكل ملحوظ من مجموعة CON (P < 0.05) ، بينما أظهرت مجموعتا F و QZF معاملات أعلى بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة CRS (كلاهما P < 0.01). أشارت النتائج إلى أن الفئران المجهدة أظهرت أعراضا نموذجية لعدم التلذذ ، والتي تم تخفيفها عن طريق العلاج ب F و QZF (الشكل 2 أ).

نتائج وزن الجسم
قبل تحريض معيار الإبلاغ المشترك ، لم تلاحظ فروق ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (P > 0.05). بعد 4 أسابيع من الإجهاد ، كان معدل نمو وزن الجسم لمجموعة CRS أقل بكثير من معدل نمو المجموعة CON (P < 0.01) ، بينما أظهرت المجموعتان F و QZF معدلات نمو أعلى بكثير من المجموعة M (P < 0.001 ، P < 0.01). تشير هذه النتائج إلى أن الإجهاد عطل التمثيل الغذائي الفسيولوجي الطبيعي في الفئران ، حيث أظهرت مجموعتا F و QZF تحسينات وتصحيحات كبيرة في ملامحها الأيضية غير الطبيعية (الشكل 2 ب).

نتائج الاختبار الميداني المفتوح
بعد 28 يوما من التدخل ، لم يكن هناك فرق كبير في المسافة الإجمالية لاختبار المجال المفتوح بين المجموعات الأربع (P > 0.05) (الشكل 2 د). بالمقارنة مع مجموعة CON ، انخفض الوقت المستغرق في المنطقة المركزية لمجموعة CRS بشكل ملحوظ (P < 0.01). بالمقارنة مع مجموعة CRS ، تم زيادة الوقت المستغرق في المنطقة الوسطى من مجموعتي F و QZF بشكل ملحوظ (كلاهما P < 0.01). لم يكن هناك فرق كبير بين مجموعات العلاج (P > 0.05) (الشكل 2C,E).

نتائج اختبار السباحة القسرية
بعد 28 يوما من التدخل ، أظهرت مجموعة CRS زيادة ملحوظة في وقت الجمود مقارنة بمجموعة CON (P < 0.0001). بالمقارنة مع مجموعة CRS ، أظهرت مجموعتا F و QZF انخفاضا ملحوظا في أوقات الجمود (P < 0.05 ، P < 0.001) (الشكل 2F).

التنبؤ بصيدلة الشبكة

الشبكات المستهدفة ذات الافتراضات المركبة
لبناء شبكة الهدف الافتراضي المركبة QZF ، قمنا أولا بفحص 1,020 هدفا افتراضيا ل QZF ، والتي تم جمعها وتصورها كأهداف مركبة بواسطة برنامج تحليل الشبكة. أظهرت الشبكة 1,184 عقدة و 8,728 حافة (الشكل 3) ³².

فحص QZF والاكتئاب المستهدف
تم استرداد ما مجموعه 17,947 هدفا متعلقا بالاكتئاب من قاعدة بيانات GeneCards ، مما يدل على متوسط درجة صلة يبلغ 1.105. تم اختيار الأهداف ذات الملاءمة التي تتجاوز 1.105 (العدد = 5,048) لمزيد من تحليل البيانات. تم إنشاء مخطط Venn مع 1,020 هدفا من QZF للحصول على 612 هدفا مشتركا (OGEs) (الشكل 4 أ). تم استيراد الأهداف المشتركة البالغ عددها 612 إلى قاعدة بيانات STRING لتحليلها ، واحتوت شبكة PPI على 607 عقد و 14,375 حافة (الشكل 4 ب) ، وتم استيراد OGEs إلى برنامج تحليل الشبكة للحصول على شبكة التفاعل.

فحص الجينات المستهدفة الأساسية
حدد تحليل الوحدة باستخدام المكون الإضافي MCODE وحدة الكتلة التي حصلت على أعلى الدرجات ، والتي حصلت على درجة MCODE 54.19029³¹. حددنا 64 هدفا رئيسيا داخل وحدة محور العنقود والتي تعتبر حاسمة لتأثيرات QZF المضادة للاكتئاب (الشكل 4C). باستخدام المكون الإضافي CytoNCA ، قمنا بفحص العقد شديدة الاتصال بناء على ثلاثة مقاييس مركزية: مركزية الدرجة (DC) ، مركزية التقارب (CC) ، ومركزية الوسط (BC). على وجه التحديد ، تقيس مركزية الدرجة عدد الاتصالات المباشرة التي تمتلكها العقدة داخل الشبكة. تحدد مركزية التقارب مقلوب متوسط أقصر طول مسار بين العقدة وجميع العقد الأخرى ، مما يشير إلى مدى كفاءة العقدة في الوصول إلى الآخرين. تقوم مركزية الوسط بتقييم التردد الذي تظهر به العقدة في أقصر المسارات بين جميع أزواج العقد ، مما يعكس دورها الوسيط. بناء على هذه المقاييس ، قمنا ببناء الشبكة الأساسية وحددنا أفضل 10 عقد متصلة: BCL2 و AKT1 و IL6 و BCL2L1 و MTOR و CASP3 و TP53 و STAT3 و NFKB1 و HIF1A (الشكل 4D). بعد تصفية البيانات ، أجرينا تحليل التخصيب الوظيفي على هذه الجينات المستهدفة الرئيسية العشرة لتوضيح وظائفها البيولوجية بشكل أكبر.

تحليل تخصيب GO
أسفر تحليل تخصيب GO عن ما مجموعه 2,783 عنصرا مشروحا ، مع 2,385 منها تظهر دلالة إحصائية. أثر هذا التحليل في الغالب على فئات العملية البيولوجية (BP) والوظيفة الجزيئية (MF) والمكونات الخلوية (CC). وعلى وجه التحديد، تضمنت فئة GO-BP 450 2 بندا، منها 926 1 عنصرا اعتبرت ذات دلالة إحصائية. حددت فئة الوظيفة الجزيئية (GO-MF) 184 عنصرا ، مع 117 أظهرت دلالة إحصائية. كشفت فئة المكون الخلوي (GO-CC) عن 149 عنصرا ، ومن بينها ، كان 59 عنصرا ذا دلالة إحصائية (الشكل 5).

تحليل التخصيب KEGG
حدد تحليل تخصيب مسار KEGG ما مجموعه 156 مسارا مرتبطا بالأهداف الرئيسية العشرة ، مع 119 من هذه المسارات التي أظهرت دلالة إحصائية. توضح الأرقام أفضل 20 مسارا مع أعلى درجات التخصيب (الشكل 6). تركت إزالة بعض الأمراض المرتبطة مسارين للإشارات ، HIF-1 و JAK-STAT ، والتي كان من المتوقع أن تكون مسارات رئيسية ل QZF والاكتئاب.

شبكات المسار المستهدف الرئيسية ل QZF والاكتئاب
لتوضيح العلاقة الميكانيكية بين QZF وتأثيراتها على الاكتئاب ، قمنا بتطوير شبكة تفاعل محورية للمسار المركب للطب الصيني التقليدي (الشكل 7). باستخدام برنامج تحليل الشبكة ، قمنا بتصور مسار الإشارات بأهم قيمة p جنبا إلى جنب مع الأهداف المرتبطة بها. يتألف الرسم البياني للشبكة الناتج من 93 عقدة و 218 حافة. علاوة على ذلك ، قمنا بإنشاء مخطط Sankey لتمثيل الجينات الرئيسية والمركبات النشطة المقابلة لها ، مع التركيز بشكل خاص على مسارات الإشارات الأساسية HIF-1 و JAK-STAT (الشكل 8).

الإرساء الجزيئي
تم اعتماد تحليل الإرساء الجزيئي لإثبات الخصوصية المستهدفة للمركب. تقوم هذه التقنية بتقييم تقارب الارتباط بين الترابط وهدف البروتين الخاص به ، حيث تشير المقادير المنخفضة لطاقة الارتباط إلى تفاعل أقوى وقرب أقرب من الترابط من موقع الارتباط³³. كشفت النتائج أن طاقات الربط كانت -8.7 كيلو كالوري / مول ل HIF1A و Glycyrrhiza flavonol A ، -8.5 كيلو كالوري / مول ل STAT3 و Ginsenoside rh2 ، -7.6 كيلو كالوري / مليمول ل BCL2 و Isolicoflavonol ، -6.8 كيلو كالوري / مول ل MTOR و Licochalcone B ، -6.7 كيلو كالوري / مول ل AKT1 و Kaempferol ، و -5.2 كيلو كالوري / مول ل IL6 وحمض اللينولينيك.

بشكل عام ، أظهرت نتائج الإرساء الجزيئي أن المركبات أظهرت تقاربا قويا مرتبطا بأهدافها. يتم تصور طاقة الربط لكل بروتين على النحو التالي: يمثل النمط الكرتوني الأبيض مستقبل البروتين ، والأزرق هو ترابط الجزيء الصغير ، ويشير الخط الأصفر المنقط إلى الرابطة الهيدروجينية المتكونة بين الترابط والمستقبل ، ويمثل اللون الأخضر موقع الارتباط بالرابطة الهيدروجينية بين مستقبل البروتين وترابط الجزيء الصغير ، وتشير الأرقام إلى مسافات الترابط الهيدروجيني ، مما يعني أن الارتباط بين الترابط والمستقبل مستقر للغاية (الشكل 9) ³⁴.

الشكل 1: مخطط انسيابي للتجميع والاختبارات السلوكية للفئران التجريبية. الاختصارات: CRS = إجهاد ضبط النفس المزمن. QZF (Q) = qiangzhifang ؛ F = فلوكستين. OFT = اختبار المجال المفتوح ؛ FST = اختبار السباحة القسري ؛ SPT = اختبار تفضيل السكروز. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: تأثيرات QZF على نموذج اكتئاب الفئران الناجم عن CRS. (أ) مستوى استهلاك السكروز (٪) في اليوم 0 واليوم 28. (ب) وزن الجسم (جم) في اليوم 0 واليوم 28. (ج) مخطط مسارات الفئران في اختبار المجال المفتوح في الأسبوع 4. (د) المسافة الإجمالية للحقل المفتوح في اليومين 0 و 28. (ه) مدة الإقامة في المنطقة المركزية ل OFT في كل مجموعة في الأسبوع 4. ** يشير P < 0.01 إلى وجود فرق كبير بين فئتي F و QZF مقارنة بمجموعة CRS. (F) وقت الجمود FST (٪) في كل مجموعة في الأسبوع 4. * يشير P < 0.01 إلى وجود فرق كبير بين المجموعة F مقارنة بمجموعة CRS. يشير P < 0.001 إلى أن مجموعة QZF أظهرت اختلافات كبيرة مقارنة بمجموعة CRS. الاختصارات: CRS = إجهاد ضبط النفس المزمن. QZF = تشيانغزيفانغ. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: شبكة QZF-Compound-Target. تشير المثلثات الخضراء إلى الأدوية الصينية التقليدية في QZF. تشير الدوائر إلى مكونات الأدوية الصينية التقليدية. تشير المعينات إلى الأهداف. تشير الأسهم الوردية إلى المكونات المشتركة للعديد من الأدوية العشبية الصينية. A (MOL000211) يتعلق بباي شاو وزي غان كاو. يرتبط B (MOL000358) ب Bai Shao و Chuan bei mu و Gu zhi و Ren shen. C (MOL000359) يتصل مع Bai shao و Chuan bei mu و Gui zhi ؛ D (MOL000422) يتعلق ب Bai shao و Zhi gan cao و Ren shen. E (MOL000492) وثيق الصلة ب Bai shao و Gu zhi. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: تحديد أهداف التقاطع وفحص الأهداف الأساسية. (أ) مخطط فين للأهداف المشتركة ل QZF والاكتئاب. تمثل الدوائر الخضراء الفاتحة البروتينات المستهدفة للمكونات النشطة في QZF. تشير الدوائر الزرقاء إلى البروتينات المرتبطة بالاكتئاب. توضح المناطق المتداخلة ، حيث يتقاطع اللونان ، البروتينات المشتركة ، التي يبلغ مجموعها 612. (ب) شبكة PPI ل QZF والاكتئاب. (ج) تحليل MCODE. (د) أهم 10 أهداف أساسية. الاختصارات: QZF = qiangzhifang; PPI = تفاعل البروتين والبروتين. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5: الرسم البياني لتحليل تخصيب GO للأهداف المشتركة. تمثل الأشرطة الخضراء العمليات البيولوجية. تمثل الأشرطة الحمراء الوظائف الجزيئية. تمثل الأشرطة الزرقاء المكونات الخلوية. يعكس ارتفاع كل شريط عدد الجينات المرتبط بمصطلح GO المقابل. الاختصار: GO = علم الوجود الجيني. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 6: مسارات إثراء KEGG للأهداف العلاجية ل QZF في الاكتئاب. (أ) مخطط شريطي لأفضل 20 مسارا ، مرتبة حسب قيمة P. (ب) مخطط فقاعي لأفضل 20 مسارا: يشير حجم النقطة إلى رقم الجين ؛ تعكس كثافة اللون أهمية قيمة P. (ج) التعليق التوضيحي الوظيفي لمسارات KEGG. اختصار: KEGG = موسوعة كيوتو للجينات والجينومات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 7: شبكة تفاعل المسار المستهدف المركب للطب الصيني التقليدي. يشير اللون الأحمر إلى QZF والاكتئاب ، ويشير اللون الأرجواني إلى مسارات الإشارات ، والأخضر يسلط الضوء على بروتينات المسار الأساسي ، ويحدد اللون الأصفر الأدوية الصينية التقليدية داخل QZF ، والأزرق يحدد المركبات العشبية المكونة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 8: مخطط Sankey للمسار المستهدف المركب للطب الصيني التقليدي للتأثير المضاد للاكتئاب ل QZF بناء على مسارات إشارات HIF-1 و JAK-STAT. الاختصارات: QZF = qiangzhifang; الطب الصيني التقليدي = الطب الصيني التقليدي ؛ HIF-1 = عامل محفز لنقص الأكسجة -1 ؛ JAK-STAT = منشطو إشارة كيناز منشطين ومنشطات النسخ. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 9: نتائج التحقق من صحة الإرساء الجزيئي. (أ) خريطة الحرارة لطاقة الربط (كيلو كالوري / مول) بين المكونات التمثيلية ل QZF وجزيئات البروتين المستهدفة (ب) تصور حالة الإرساء. الاختصار: QZF = qiangzhifang. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الملف التكميلي 1: تحضير حبيبات الطب الصيني التقليدي QZF. الاختصار: QZF = qiangzhifang. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

CRS هي طريقة مستخدمة على نطاق واسع لإنشاء نماذج حيوانية للاكتئاب. يحاكي هذا النموذج الإجهاد النفسي المزمن الذي يواجهه في حياة الإنسان ويحفز سلوكيات شبيهة بالاكتئاب في الفئران³⁵. في هذه الدراسة ، تم بناء أنبوب تقييد الفئران من البلاستيك الشفاف ، مما يضمن سلامة مع تمكين المراقبة الواضحة أثناء التجربة. يبلغ طول الأنبوب الشفاف حوالي 18 سم وقطره 6 سم ويتميز بفتحات تهوية متعددة ، يبلغ قطر كل منها 1 سم ، موزعة بشكل موحد على طول الجانبين والغطاء لتوفير تدفق هواء كاف للفئران. أظهرت الفئران المجهدة أعراض اكتئاب مثل الخمول والعيون الزجاجية ، إلى جانب التغيرات السلوكية المميزة للاكتئاب. على وجه التحديد ، تضمنت هذه التغييرات انخفاض النشاط الحركي في OFT ، ووقت الجمود المطول في FST ، وانخفاض استهلاك السكروز في SPT. تشبه هذه المظاهر السلوكية إلى حد كبير بطء الحركة وانعدام التلذذ وفقدان الاهتمام الذي لوحظ في المرضى الذين يعانون من الاكتئاب السريري.

في سياق دراسة الآليات المرضية المعقدة للاكتئاب ، يوفر الجمع بين علم الأدوية الشبكي وتقنية الإرساء الجزيئي استراتيجية مبتكرة لتحليل الآليات الجزيئية لمركبات الطب الصيني التقليدي في علاج الاكتئاب. حددت هذه الدراسة HIF1A و STAT3 و BCL2 و MTOR و AKT1 و IL6 كأهداف أساسية ل QZF في علاج الاكتئاب. تم إثراء هذه الأهداف بشكل أساسي في مسارات إشارات HIF-1 و JAK-STAT. يلعب هذان المساران للإشارات دورا مركزيا في العمليات المرضية الرئيسية للاكتئاب ، مثل الالتهاب العصبي والإجهاد التأكسدي وموت الخلايا المبرمج.

يلعب مسار إشارات HIF-1 ، الذي يعمل كآلية تنظيمية مركزية لعملية التمثيل الغذائي للأكسجين الخلوي ، دورا مهما في العمليات الفسيولوجية المختلفة ، بما في ذلك الحماية العصبية ، واستجابات الإجهاد المضاد للأكسدة ، وتكوين الأوعية^{الدموية 36}. تشير الأبحاث إلى أن أنسجة المخ للأفراد المصابين بالاكتئاب تظهر بيئة مكروية واضحة لنقص الأكسجين وإصابة الإجهاد التأكسدي ، والتي ترتبط ارتباطا وثيقا بتنشيط الاستجابات الالتهابية العصبية وعدم توازن الناقلات العصبية³⁷. يوضح بحث سيمينزا أنه في ظل ظروف نقص الأكسجين ، ينظم HIF-1α الجينات المرتبطة باستقلاب الأكسجين وآليات الدفاع المضادة للأكسدة ، بما في ذلك عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) والإريثروبويتين (EPO) وجينات الميتوكوندريا. وبالتالي ، فإن هذا يعزز وظيفة الميتوكوندريا ، ويعزز تكوين الأوعية الدقيقة في الدماغ ، ويزيد من توصيل الأكسجين إلى أنسجة المخ ، ويقلل من تراكم أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS^{) 38}.

تظهر المزيد من الدراسات التجريبية أن نقص HIF-1α يعزز بشكل ملحوظ قابلية الخلايا العصبية للإجهاد التأكسدي ، مما يؤدي إلى تنشيط غير طبيعي لمسار إشارات موت الخلايا المبرمج³⁹. هذا يؤدي إلى زيادة كبيرة في موت الخلايا المبرمج العصبي والتدهور المعرفي التدريجي. في المقابل ، فإن الإفراط في التعبير عن HIF-1α الخاص بالخلايا العصبية في نماذج الفئران المعدلة وراثيا يعزز بشكل كبير كلا من بقاء الخلايا العصبية والكثافة المشبكية⁴⁰. لا تثبت هذه النتائج الدور الحاسم ل HIF-1α في آلية الدفاع المضادة للأكسدة فحسب ، بل تسلط الضوء أيضا على أهميته العلاجية المحتملة في تعزيز وظائف المخ من خلال تعزيز اللدونة العصبية وإعادة تشكيل الهندسة المشبكية. علاوة على ذلك ، فإن مسار إشارات HIF-1 يعارض مسار نقل إشارة NF-κB ، مما يؤدي إلى انخفاض إنتاج السيتوكينات الالتهابية IL-6 و TNF-α ، وقمع الالتهاب العصبي ، وإظهار التأثيرات المحتملة المضادة للضغط العصبي⁴¹.

والجدير بالذكر أن فلافونول Glycyrrhiza A, أحد المكونات النشطة ل QZF, وقد أكدت أن يحمل خصائص مضادة للأكسدة ومضادة للالتهابات. في هذه الدراسة ، كشفت بيانات الإرساء الجزيئي أن liquiritigenin A يظهر تقاربا عاليا مع بروتين HIF-1α ، حيث يصل إلى -8.7 كيلو كالوري / مول. تشير هذه النتيجة بقوة إلى أن Glycyrrhiza flavonol A ، قد يستهدف HIF-1α مباشرة ، مما يعدل استقرار البروتين أو نشاط النسخ. وبالتالي ، فإنه ينظم التعبير عن الجينات المشاركة في استقلاب الأكسجين والدفاع المضاد للأكسدة داخل مسار إشارات HIF-1 ، وبالتالي تعزيز بقاء الخلايا العصبية في ظل ظروف نقص الأكسجين وتخفيف الضرر العصبي المرتبط بالاكتئاب.

يعمل مسار إشارات JAK-STAT كمحور مركزي لنقل إشارة السيتوكين ويلعب دورا محوريا في العمليات البيولوجية المختلفة ، بما في ذلك تنظيم الالتهاب ، وتعديل الاستجابة المناعية ، وبقاء الخلايا العصبية^42،43. أظهرت الأبحاث المكثفة أن التسبب في الاكتئاب يرتبط ارتباطا وثيقا بخلل تنظيم مسار إشارات^{JAK-STAT 44}. كشف التحليل التلوي الذي أجراه Dowlati et al. أنه بالمقارنة مع الضوابط الصحية ، زادت مستويات السيتوكينات المؤيدة للالتهابات في الدم مثل IL-6 و TNF-α بشكل كبير في المرضى الذين يعانون من الاكتئاب وارتبطت ارتباطا إيجابيا مع شدة أعراض الاكتئاب⁴⁵. على وجه التحديد ، هذه العوامل المؤيدة للالتهابات قادرة على تنشيط مسار JAK-STAT ، وبالتالي إثارة استجابة التهابية. لا تؤدي هذه العملية إلى إلحاق ضرر مباشر بالخلايا العصبية والخلايا الدبقية فحسب ، بل تضر أيضا بالبنية والوظيفة المشبكية ، مما يؤدي في النهاية إلى تفاقم الضعف المعرفي والعاطفي لدى المرضى⁴⁶.

علاوة على ذلك ، يرتبط التنشيط المفرط لمسار JAK-STAT ارتباطا وثيقا بموت الخلايا المبرمج العصبي. تعمل فسفرة STAT3 المستمرة على تنظيم التعبير عن الجينات المؤيدة لموت الخلايا المبرمج ، بما في ذلك أفراد عائلة Caspase ، مما يؤدي في النهاية إلى فقدان الخلايا العصبية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التنشيط الشاذ لهذا المسار يضعف تكوين الخلايا العصبية في منطقة الحصين ويقلل من اللدونة المشبكية ، وبالتالي يؤدي إلى تفاقم العجز الوظيفي العصبي⁴⁷. في هذه الدراسة ، أظهر جينسينوسيد Rh2 ، وهو مكون نشط مهم في QZF ، تقاربا كبيرا مع بروتين STAT3 في تحليل الإرساء الجزيئي. بناء على هذه النتائج ، قد يخفف الجينسينوسيد Rh2 بشكل فعال من الاستجابات الالتهابية العصبية عن طريق تثبيط تنشيط STAT3 على وجه التحديد وبالتالي تقليل إنتاج وإطلاق السيتوكينات المؤيدة^{للالتهابات 48}.

بالإضافة إلى مساري الإشارات الأساسيين ، HIF-1 و JAK-STAT ، حددت هذه الدراسة التفاعلات التآزرية بين المكونات والأهداف النشطة الأخرى أثناء العمل المضاد للاكتئاب ل QZF. يلعب BCL2 ، وهو بروتين متعارف مضاد لموت الخلايا المبرمج ، دورا أساسيا في الحفاظ على بقاء الخلية وقمع مسارات إشارات موت الخلايا^{المبرمج 49}. في QZF ، يظهر الأيزوليكوفلافونول خصائص مضادة للأكسدة ومضادة لموت الخلايا المبرمج من خلال استهداف وتنشيط بروتين BCL2 على وجه التحديد ، وبالتالي تثبيط موت الخلايا المبرمج العصبي بشكل فعال ، وحماية الخلايا العصبية ، وتحسين التغيرات العصبية المرضية المرتبطة بالاكتئاب. علاوة على ذلك ، يرتبط مسار إشارات MTOR الشاذ لدى مرضى الاكتئاب ارتباطا وثيقا بالخلل الوظيفي العصبي⁵⁰. أظهرت الدراسات أن Licochalcone B يعزز نمو الخلايا العصبية والبقاء على قيد الحياة ، ويعزز اللدونة المشبكية والاتصال الوظيفي عن طريق تعديل مسار إشارات MTOR⁵¹ ، وبالتالي ممارسة تأثير مضاد للاكتئاب. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الفلافونويد الطبيعي كامبفيرول ، الذي يتميز بأنشطته القوية المضادة للأكسدة والمضادة للالتهابات ، ينشط على وجه التحديد مسار إشارات AKT1. من خلال تنظيم جزيئات رئيسية متعددة في اتجاه مجرى النهر ، فإنه لا يعزز بقاء الخلايا العصبية فحسب ، بل يسرع أيضا من التعافي الوظيفي ، وبالتالي توفير دعم هدف جزيئي إضافي للتأثيرات المضادة للاكتئاب ل QZF.

باختصار ، استخدمت هذه الدراسة علم الأدوية الشبكي والالتحام الجزيئي للتنبؤ بالمسارات العلاجية والأهداف الأساسية والمكونات النشطة الفعالة ل QZF في علاج الاكتئاب. تم التحقق من صحة التأثير المضاد للاكتئاب ل QZF في نموذج الفئران للاكتئاب ، مما يشير إلى أنه قد يمارس آثاره المضادة للاكتئاب عن طريق تعديل مسارات إشارات متعددة ، بما في ذلك HIF-1 و JAK-STAT ، واستهداف العمليات المرضية الرئيسية مثل الالتهاب العصبي والإجهاد التأكسدي وموت الخلايا المبرمج. لا تعمل هذه النتيجة على تعميق فهمنا للآليات المرضية الكامنة وراء الاكتئاب فحسب ، بل توفر أيضا أساسا نظريا وأهدافا علاجية جديدة لتطبيق صيغ الطب الصيني التقليدي في علاج الاكتئاب. ومع ذلك ، فإن هذه الدراسة لها قيود معينة. لا تزال الآليات التآزرية للمكونات المتعددة في QZF بحاجة إلى توضيح كامل ، وتتطلب عمليات التمثيل الغذائي والتفاعلات بين هذه المكونات في الجسم الحي مزيدا من التحقيق. يمكن أن تدمج الأبحاث المستقبلية في المختبر وفي الجسم الحي التجارب مع التقنيات المتقدمة مثل الكروماتوغرافيا السائلة ، والتسلسل عالي الإنتاجية ، والتكامل متعدد الأومكس لتحديد الأهداف والمسارات الرئيسية المرتبطة بالتأثيرات المضادة للاكتئاب ل QZF بشكل شامل ودقيق ، وبالتالي التحقق من التنبؤات التي تم إجراؤها من خلال علم الأدوية الشبكي وتوسيعها.

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

تم دعم البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82374311) ، وإدارة الدولة للطب الصيني التقليدي رفيع المستوى (TCM) ، ومشروع بناء الانضباط الرئيسي للنظرية الأساسية (zyyzdxk-2023118) ، ومشروع بناء استوديو خبراء الطب الصيني التقليدي الوطني (الرسالة الوطنية لتعليم الطب الصيني رقم 75) ومؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة شاندونغ (ZR2022LZY016). تم إعداد حبيبات QZF من قبل قسم المنتجات الصيدلانية ، المستشفى التابع لجامعة شاندونغ للطب الصيني التقليدي.