11.19 : Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi: Enstrümantasyon

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya HPLC, sıvı numuneleri yüksek basınç altında ayıran bir analitik tekniktir. Bir HPLC cihazı, mobil faz rezervuarları adı verilen çözücüleri depolamak için cam şişelerden oluşur. Yüksek saflığı korumak için HPLC sınıfı çözücüler kullanılır ve çözünmüş gazlar, vakumlu pompalama sistemi veya helyumla serpme gibi bir gaz giderici kullanılarak uzaklaştırılır. Çözücüler daha sonra vidalı bir şırınga veya alternatif pompalar kullanılarak analitik kolona pompalanır. Çoğu modern HPLC cihazı, darbeli bir mobil faz akışı oluşturan alternatif piston pompaları kullanır ve bu akış, bir darbe sönümleyicisine bağlanarak düzeltilir. Bazı analizlerde, gradyan elüsyonu kullanılır. Bu teknik, mobil fazın bileşimini kademeli olarak değiştirmeyi içerir ve bu, karmaşık karışımların polaritelerine göre ayrılmasını artırabilir. Bu işlem sırasında çözücülerin akış hızını korumak için gradyan denetleyiciler kullanılır.

Mobil faz kolona ulaşmadan önce, numune döngü enjektörüne veya otomatik enjektöre sokulur. Mobil faz, numuneyle birlikte, sabit bir faz ile paketlenmiş olan kolona girer. Analitik kolon, sabit bir sıcaklığı korumak için bir kolon fırınına yerleştirilir. Bazen, kolonun ömrünü korumak için süpürücü ve koruyucu kolonlar gibi ön kolonlar kullanılır. Analit bileşenleri ayrıldıktan sonra, bunları tanımlayan ve sonuçları bilgisayarın görüntülediği bir kromatograma dönüştüren dedektöre giderler. Son olarak, ayrılmış bileşenleri taşıyan çözücü olan eluant, ya atığa gider ya da kesirli toplayıcıda toplanır.