11.19 : Wysokosprawna chromatografia cieczowa: aparatura

Wysokosprawna chromatografia cieczowa, czyli HPLC, to technika analityczna, która rozdziela próbki cieczy pod wysokim ciśnieniem. Aparatura HPLC składa się ze szklanych butelek do przechowywania rozpuszczalników zwanych zbiornikami fazy ruchomej. Rozpuszczalniki klasy HPLC są używane do utrzymania wysokiej czystości, a rozpuszczone gazy są usuwane za pomocą odgazowywacza, takiego jak system pompowania próżniowego lub przepłukiwania helem. Następnie rozpuszczalniki są pompowane do kolumny analitycznej za pomocą strzykawki napędzanej śrubą lub pomp tłokowych. Większość nowoczesnych aparatów HPLC wykorzystuje tłokowe pompy tłokowe, które tworzą pulsacyjny przepływ fazy ruchomej, który jest wygładzany przez podłączenie ich do tłumika pulsacji. W niektórych analizach stosuje się elucję gradientową. Ta technika polega na stopniowej zmianie składu fazy ruchomej, co może poprawić rozdział złożonych mieszanin w oparciu o ich biegunowość. Kontrolery gradientu są używane do utrzymania szybkości przepływu rozpuszczalników podczas tego procesu.

Zanim faza ruchoma dotrze do kolumny, próbka jest wprowadzana do pętlowego wtryskiwacza lub autowtryskiwacza. Faza ruchoma wraz z próbką wchodzi do kolumny, która jest wypełniona fazą stacjonarną. Kolumna analityczna jest umieszczana w piecu kolumnowym w celu utrzymania stałej temperatury. Czasami, aby chronić trwałość kolumny, stosuje się kolumny wstępne, takie jak kolumny zbierające i ochronne. Po oddzieleniu składników analitu, trafiają one do detektora, który je identyfikuje i przekształca wyniki w chromatogram wyświetlany przez komputer. Na koniec eluent — rozpuszczalnik niosący oddzielone składniki — trafia do odpadów lub jest zbierany w kolektorze frakcyjnym.