В исследовании изучается кардиопротекторное действие препарата Мунзик на повреждение перфузии миокарда у крыс, особенно у крыс с аномальной жидкостью в организме. Мы стремимся определить, может ли предварительное лечение Munziq смягчить ишемическое повреждение миокарда, вызвать патологические изменения, защитить сердечную функцию, а также изучить его механизмы, особенно через сигнальный путь NF-kappa B. Наша исследовательская группа сосредоточилась на изучении ишемии-реперфузионного повреждения миокарда.
Наши данные свидетельствуют о том, что ингибирование пути NF-kappa B может облегчить ишемическое повреждение миокарда, которое может смягчить ишемическое повреждение миокарда за счет ингибирования пути NF-kappa B, влияя на функцию митохондрий и метаболизм миокарда. Наше исследование определяет Munziq как потенциальное терапевтическое средство для лечения ишемии-реперфузионного повреждения миокарда, продвигая эту область за счет изучения подхода натуральной медицины. Это открытие имеет большое значение, поскольку оно нацелено на путь NF-каппа B, новый механизм лечения ишемии-реперфузионного повреждения миокарда.
Наши результаты открывают путь к дальнейшему клиническому применению традиционной медицины в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. Для начала поместите крыс в аномальную биологическую жидкость, или группу ABF, в контролируемую среду в климатических боксах и обеспечьте их обычным кормом. Обеспечьте крыс обычным комбикормом, смешанным с сухим холодным кормом, а именно семенами ячменя и кориандра, в течение 21 дня для установления модели АБФ.
Используя технику внутрижелудочного введения, введите пять граммов на килограмм Мунзика крысам группы Мунзика в течение 21 дня до ишемии-реперфузионного повреждения миокарда или операции MIRI. Чтобы установить модель MIRI, после 21 дня предварительной обработки поместите крысу под наркозом на стерильный операционный стол. Выполните трахеостомию, чтобы обеспечить дыхание с помощью аппарата искусственной вентиляции легких у крысы.
Перед вскрытием грудной клетки промойте место операции мыльным раствором, побрейте эту область и продезинфицируйте ее раствором йода. Затем с помощью стерильных ножниц, щипцов и ретракторов откройте грудную стенку, чтобы обнажить сердце и определить левую переднюю нисходящую артерию, которая лежит на поверхности сердца. С помощью шва 6-0 перевязать артерию, чтобы вызвать регионарную ишемию в течение 30 минут.
Подтвердите эффективную окклюзию, наблюдая за бледным цветом миокарда. Через 30 минут освободите лигатуру и дайте возможность реперфузии в течение 120 минут. Подтвердите реперфузию миокарда, когда он вернется к ярко-красному цвету.
После реперфузии используйте вакуумную пробирку для сбора крови для сбора одного-двух миллилитров крови из брюшной аорты. После усыпления крысы с помощью стерильных щипцов и ножниц необходимо собрать ткань миокарда из области инфаркта в левом желудочке. Поместите собранную ткань в стерильный контейнер для дальнейшего анализа.
После забора инфаркта миокарда сердца у установленной крысы МИРИ с помощью стерильных ножниц и лезвия разрежьте сердце горизонтально на две половины вдоль средней точки длинной оси левого желудочка перпендикулярно направлению сердца. Разделите одну половину верхушечной части на две части. Храните одну порцию в 4% параформальдегиде при комнатной температуре от двух до 24 часов для морфологического исследования.
Поместите другую часть в глутаральдегид при температуре четыре градуса Цельсия на один-четыре часа для электронной микроскопии. Далее разделите базовую часть сердца, включающую как ишемизированную, так и неишемическую области, на две части. Поместите одну порцию в криоциал и быстро заморозьте ее в жидком азоте.
Перенесите замороженную ткань в морозильную камеру при температуре минус 80 градусов Цельсия для молекулярно-биологического тестирования. Центрифугируйте кровь, собранную из нижней полой вены, в дозе 1000 г в течение 10 минут. Храните отделенную сыворотку в морозильной камере при температуре минус 80 градусов Цельсия.
Поместите фиксированные формальдегидом срезы ткани в инкубатор при температуре 65 градусов Цельсия для запекания в течение 1,5-двух часов. Погрузите запеченные участки салфетки в ксилол на 10 минут. Затем последовательно погрузите участки ткани в безводный спирт один и два на пять минут каждый, затем 95%, 90%, 80% и 70% спирта, и, наконец, в дистиллированную воду на пять минут каждый.
Окрашивайте участки ткани гематоксилином в течение трех минут. Выполните кислотную дифференцировку, кратковременно погрузив участки ткани в раствор спирта соляной кислоты на одну-две секунды. Прекратите дифференцировку, промыв в водопроводной воде в течение пяти минут.
Далее погрузите срезы ткани в дистиллированную воду, затем в 70%80%90% и 95%спирт на три минуты каждая. После погружения среза в безводный спирт один и два срезы окрасьте 0,5% эозина в этаноле на одну минуту. Теперь промойте пряди в 95% этаноле, чтобы удалить излишки красного цвета.
Затем погрузите секции в безводный этанол на пять минут, а затем погрузите в ксилол один и два на пять минут каждый. Закрепите окрашенные участки нейтральным бальзамом. Наблюдайте за патологическими изменениями в тканях под микроскопом.
В ткани миокарда в фиктивной группе наблюдалась зернистая и вакуолярная дегенерация, ограниченная инфильтрация эритроцитов и лимфоцитов, а также периодическое расширение и застой сосудов. В группе MIRI наблюдалось тяжелое поражение ткани миокарда с обширной гранулярной и вакуолярной дегенерацией. Повреждение миокарда было особенно тяжелым в группе ABF MIRI по сравнению с контрольной группой MIRI, демонстрируя усиленные признаки дегенерации и инфильтрации тканей.
Клетки миокарда, обработанные Munziq в контрольной группе, и в группе ABF MIRI, показали снижение зернистой и вакуолярной дегенерации с меньшим количеством эритроцитов, инфильтрацией лимфоцитов и застойными явлениями. Клетки миокарда в фиктивной группе сохраняли неповрежденную структуру миофибриллы, равномерную длину саркомеров и многочисленные митохондрии. В группе MIRI клетки миокарда демонстрировали набухание, различную длину саркомеров и нарушение миофиламентов с обширным повреждением митохондрий.
Лечение Мунзиком уменьшило отек клеток миокарда и сохранило миофибриллу, саркомер и структуру митохондрий, как и при симуляции. Уровни cTn-T, CK-MB и ICAM-1 в сыворотке крови были значительно выше в группе ABF MIRI, чем в контрольной группе MIRI. Предварительная обработка Munziq заметно снижала уровни cTn-T, CK-MB и ICAM-1 как в группе ABF, так и в контрольной группе MIRI.
В группе ABF MIRI наблюдалось повышение уровня малонового диальдегида и снижение уровня оксида азота в ткани миокарда по сравнению с контрольной группой MIRI. Предварительная обработка Munziq значительно снижала содержание лактатдегидрогеназы и малонового диальдегида при одновременном повышении уровня оксида азота в ишемизированном миокарде. В группе ABF MIRI наблюдался повышенный уровень интерлейкина 1 бета, интерлейкина 6 и ФНО альфа, особенно на уровнях белка.
Предварительная обработка препаратом Мунзик снижала уровни интерлейкина 1 бета, интерлейкина 6 и ФНО в сыворотке крови и мРНК в сыворотке крови, особенно на уровне белка в миокарде. Маркеры пути NF-kappa B были повышены в тканях MIRI, что указывает на воспаление. Лечение Мунзиком снижало экспрессию маркеров путей, что указывает на снижение активации пути NF-каппа B.
