O estudo investiga os efeitos cardioprotetores do Munziq na lesão de perfusão miocárdica em ratos, particularmente aqueles com fluido corporal anormal. Nosso objetivo é determinar se o pré-tratamento com Munziq pode mitigar a lesão de isquemia-reperfusão miocárdica, induzir alterações patológicas, proteger a função cardíaca e explorar seus mecanismos, especialmente por meio da via de sinalização NF-kappa B. Nosso grupo de pesquisa tem se concentrado no estudo da lesão miocárdica de isquemia-reperfusão.
Nosso achado sugere que a inibição da via NF-kappa B pode aliviar a lesão miocárdica de isquemia-reperfusão, o que pode mitigar a lesão miocárdica de isquemia-reperfusão ao inibir a via NF-kappa B, afetando a função mitocondrial e o metabolismo miocárdico. Nossa pesquisa identifica o Munziq como uma potencial terapêutica de lesão de isquemia-reperfusão miocárdica, avançando no campo explorando uma abordagem de medicina natural. Essa descoberta é significativa, pois tem como alvo a via NF-kappa B, um novo mecanismo para o tratamento de lesões de isquemia-reperfusão miocárdica.
Nossas descobertas abrem caminho para uma maior aplicação clínica da medicina tradicional no tratamento de doenças cardiovasculares. Para começar, aloje os ratos no fluido corporal anormal, ou grupo ABF, em um ambiente controlado dentro de caixas climáticas e forneça ração comum. Fornecer aos ratos ração comum misturada com ração seca e fria, ou seja, sementes de cevada e coentro, por 21 dias para estabelecer o modelo ABF.
Usando uma técnica de administração intragástrica, administrar cinco gramas por quilograma de Munziq aos ratos do grupo Munziq por 21 dias antes da lesão de isquemia-reperfusão miocárdica, ou cirurgia MIRI. Para estabelecer o modelo MIRI, após 21 dias de pré-tratamento, coloque o rato anestesiado em uma mesa cirúrgica estéril. Realize uma traqueostomia para permitir a respiração assistida por ventilação mecânica no rato.
Antes de abrir o tórax, lave o local da cirurgia com água e sabão, raspe a área e desinfete-a com uma solução de iodo. Em seguida, usando tesouras estéreis, pinças e afastadores, abra a parede torácica para expor o coração e identificar a artéria descendente anterior, que fica na superfície do coração. Usando uma sutura 6-0, ligue a artéria para induzir isquemia regional por 30 minutos.
Confirme a oclusão eficaz observando uma cor pálida no miocárdio. Após 30 minutos, solte a ligadura e deixe a reperfusão por 120 minutos. Confirme a reperfusão do miocárdio quando ele retornar a uma cor vermelha brilhante.
Após a reperfusão, use um tubo de coleta de sangue a vácuo para coletar um a dois mililitros de sangue da aorta abdominal. Depois de sacrificar o rato, use uma pinça estéril e uma tesoura para coletar o tecido do miocárdio da área do infarto no ventrículo esquerdo. Coloque o tecido coletado em um recipiente estéril para análise posterior.
Depois de coletar o coração infartado do miocárdio do rato estabelecido com MIRI, use uma tesoura e lâmina estéreis para transeccionar o coração horizontalmente em duas metades ao longo do ponto médio do eixo longo do ventrículo esquerdo perpendicular à direção do coração. Divida metade da parte apical em duas porções. Conservar uma porção em paraformaldeído a 4% à temperatura ambiente durante duas a 24 horas para exame morfológico.
Coloque a outra porção em glutaraldeído a quatro graus Celsius por uma a quatro horas para microscopia eletrônica. Em seguida, divida a parte da base do coração, incluindo as áreas isquêmicas e não isquêmicas, em duas porções. Coloque uma porção em um criogênico e congele-o rapidamente em nitrogênio líquido.
Transfira o tecido congelado para um freezer de 80 graus Celsius negativos para testes de biologia molecular. Centrifugar o sangue colhido da veia cava inferior a 1 000 g durante 10 minutos. Armazene o soro separado em um freezer de 80 graus Celsius negativos.
Coloque as seções de tecido fixadas em formaldeído em uma incubadora de 65 graus Celsius para assar por 1,5 a duas horas. Mergulhe as seções de tecido cozido em xileno por 10 minutos. Em seguida, mergulhe sequencialmente as seções de tecido em álcool anidro um e dois por cinco minutos cada, seguido por 95%, 90%, 80% e 70% de álcool e, finalmente, em água destilada por cinco minutos cada.
Manchar as seções de tecido com hematoxilina por três minutos. Realize a diferenciação ácida imergindo brevemente as seções de tecido em uma solução de álcool de ácido clorídrico por um a dois segundos. Termine a diferenciação enxaguando em água da torneira por cinco minutos.
Em seguida, mergulhe as seções de tecido em água destilada e, em seguida, em álcool 70%, 80%, 90% e 95% por três minutos cada. Depois de imergir a seção em álcool anidro um e dois, manche as seções com 0,5% de eosina em etanol por um minuto. Agora, enxágue as seções em etanol 95% para remover o excesso de cor vermelha.
Em seguida, mergulhe as seções em etanol anidro por cinco minutos, seguido de imersão em xileno um e dois por cinco minutos cada. Monte as seções manchadas com bálsamo neutro. Observe alterações patológicas no tecido ao microscópio.
O tecido miocárdico no grupo simulado exibiu degeneração granular e vacuolar, infiltração limitada de glóbulos vermelhos e linfócitos e dilatação e congestão vascular ocasionais. No grupo MIRI, houve dano grave do tecido miocárdico com extensa degeneração granular e vacuolar. O dano miocárdico foi notavelmente grave no grupo MIRI ABF em comparação com o grupo MIRI controle, mostrando sinais amplificados de degeneração e infiltração tecidual.
As células miocárdicas tratadas com Munziq nos grupos controle e ABF MIRI apresentaram degeneração granular e vacuolar reduzida com menos glóbulos vermelhos, infiltração de linfócitos e congestão. As células miocárdicas no grupo simulado mantiveram a estrutura miofibrilar intacta, o comprimento uniforme do sarcômero e numerosas mitocôndrias. No grupo MIRI, as células miocárdicas exibiram inchaço, comprimento variado do sarcômero e miofilamentos rompidos, com extenso dano mitocondrial.
O tratamento com Munziq reduziu o inchaço das células miocárdicas e preservou a miofibrila, o sarcômter e a estrutura mitocondrial, semelhante às condições simuladas. Os níveis séricos de cTn-T, CK-MB e ICAM-1 foram significativamente maiores no grupo MIRI ABF do que no grupo MIRI controle. O pré-tratamento com Munziq reduziu notavelmente os níveis de cTn-T, CK-MB e ICAM-1 nos grupos ABF e MIRI controle.
O grupo MIRI ABF apresentou níveis aumentados de malondialdeído e diminuição dos níveis de óxido nítrico no tecido miocárdico em comparação com o grupo MIRI controle. O pré-tratamento com Munziq reduziu significativamente o conteúdo de lactato desidrogenase e malondialdeído, aumentando os níveis de óxido nítrico no miocárdio isquêmico. O grupo ABF MIRI exibiu níveis elevados de interleucina um beta, interleucina seis e TNF alfa, particularmente nos níveis de proteína.
O pré-tratamento com Munziq reduziu os níveis séricos e de mRNA de interleucina um beta, interleucina seis e TNF alfa, particularmente nos níveis de proteína no miocárdio. Os marcadores da via NF-kappa B foram regulados positivamente no tecido MIRI, indicando inflamação. O tratamento com Munziq diminuiu a expressão dos marcadores da via, indicando redução da ativação da via NF-kappa B.
