Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação dos Institutos Nacionais de Saúde (EY022383 e EY022683; EjD) e concessão do núcleo (P30EY001765), imagiologia e Microscopia Core Module.

Declaração de Ética: Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Comitê Animal Care Institucional e Use da Universidade Johns Hopkins. Nota: Os ratinhos utilizados durante a filmagem são ratinhos C57BL / 6 de Jackson, embora também possam ser utilizadas outras estirpes ou espécies de roedores. Ao utilizar outras estirpes ou espécies, estar ciente de que as doses de anestesia e cronograma lesão pode variar. É importante para adaptar as condições de I / R para acomodar estirpe, a espécie e variações experimentais. 1. Prepare o Cocktail Anestesia <ol><li> Combinar 1,25 ml de cetamina, xilazina 0,625 ml, 0,375 ml de acepromazina, e 22,75 ml de solução salina tamponada de fosfato num tubo de centrífuga de 50 ml. NOTA: Para o restante do manuscrito, esta solução irá ser referido como o cocktail. </li><li> Filtra-se o cocktail para um novo tubo de centrífuga estéril de 50 ml usando uma seringa de 60 ml e um filtro de 0,20? M. Rótulo e data deste novo tuestar. </li><li> Totalmente envolver o tubo de cocktail em papel de alumínio para evitar a degradação induzida pela luz do anestésico. NOTA: O cocktail pode ser armazenada à temperatura ambiente e reutilizado até a data de expiração do seu ingrediente mais antiga expira. </li></ol> 2. Prepare o Anestesia impulsionador <ol><li> Num tubo de centrífuga de 50 ml, combinar 4 ml de cetamina e 16 ml de solução salina tamponada com fosfato. NOTA: Esta solução será daqui em diante referido como o reforço. </li><li> Filtra-se o reforço para um novo tubo de centrífuga estéril de 50 ml usando uma seringa de 60 ml e um filtro de 0,20? M. Rótulo e data em que este novo tubo. NOTA: O reforço pode ser armazenada à temperatura ambiente e reutilizado até a data de expiração do seu ingrediente mais antiga expira. </li></ol> 3. Prepare o centro cirúrgico <ol><li> Ajuste a temperatura ambiente entre 18 ° C e 21 ° C. </li><li> Vire na mesa de cirurgia, e ajustar o seu calor de superfície ao highetemperatura st. </li><li> Cobrir todas as superfícies de trabalho com underpads cirúrgicos. </li><li> Organizar uma gaiola vazia ou outro recipiente na mesa cirúrgica para aquecer. </li><li> Organizar uma escala e um tagger ouvido na bancada. </li></ol> 4. Preparar a solução de sal equilibrada com a heparina de sódio <ol><li> Adicionar 0,5 ml de heparina de sódio para um frasco de soro de 500 ml de solução salina equilibrada (HBSS). </li><li> Insira a ponta do conjunto principal prepierced tubo Y local dentro da garrafa de 0,1% heparina sódica. </li></ol> 5. Configure o IV Pole <ol><li> Pendure a garrafa de 0,1% heparina sódica da extensão IV pólo, e encaixe abrir a tampa do filtro de ar no conjunto principal prepierced tubo Y-site. </li><li> Elevar a garrafa de heparina de sódio de 0,1% a 163 cm (120 mm Hg). Medir a altura da mesa para o pico do gota a gota a heparina de sódio. </li><li> Remova as bolhas de ar na tubulação IV sacudindo manualmente o conjunto principal prepierced tubo Y-site. </li&gt; </ol> 6. Configure o sódio Heparina Drip <ol><li> Ligue o conjunto principal prepierced tubo Y-site para o colector de cinco válvulas. </li><li> Ligue de calibre 30 ½ polegadas agulhas para o colector de cinco porta usando Luer macho para luer acessórios para tubos do sexo masculino. </li><li> Introduza cada uma das agulhas de calibre 30 ½ polegadas em seu próprio segmento de 10 polegadas de tubo de calibre 30. </li><li> Usando hemostats, quebrar as pontas das agulhas de novas de calibre 30 ½ polegadas agulhas e inserir suas extremidades sem corte no tubo de calibre 30. Esterilidade ou desinfecção das pontas de agulhas, será necessário para o passo 8.3. </li><li> Usando fita, organizar os tubos de calibre 30 com as agulhas de tal modo que os tubos ligados às portas interiores são posicionadas na parte superior dos tubos ligados às portas exteriores. Este acordo vai evitar o enrolamento de tubos durante a punção da câmara anterior. </li><li> Ligue o fluxo de heparina sódica 0,1% para o colector de cinco válvulas e cada porta individual. <ol><li> Certifique-se de que o 0,1%heparina sódica está fluindo fortemente para cada porta. Se uma porta está fluindo fraca, substitua o porto ou limpá-la com ar de uma seringa estéril. </li><li> Permitir que a heparina sódica 0,1% a fluir para 2 - 3 min para remover as bolhas de ar dos tubos de calibre 30 e colector de 5 válvulas. </li></ol></li><li> Desligue todas as portas no colector de 5 válvulas. </li></ol> 7. Prepare os ratos para Cirurgia <ol><li> Traga os ratos para o centro cirúrgico. Fornecer garrafas de água para cada gaiola, a fim de evitar a desidratação dos animais durante a cirurgia. </li><li> Registar o peso de cada rato. </li><li> Injectar cada rato intraperitonealmente com 0,02 ml cocktail por peso corporal grama. </li><li> Marcar e registrar o número de cada rato. </li><li> Coloque todos os ratos para o recipiente vazio na mesa de cirurgia. Permitir 5-10 min para todos os ratos para alcançar profunda anesthetization como confirmado pela ausência da resposta de retirada pedal para pitada dedo do pé. </li><li> Para cada ratinho, administrar uma gota deTropicamida em cada olho para a dilatação da pupila e lubrificação de curto prazo. </li><li> Para cada ratinho, administrar uma gota de proximetacaína em cada olho para anestesia local e de lubrificação de curto prazo. </li><li> Dispor os ratos na ordem de anestesia de modo que o primeiro ratinho a ser anestesiado será o primeiro rato para ser canulada. </li><li> Permitir que cerca de 2 min para o colírio para entrar em vigor. </li><li> Prepare pedaços de 4 polegadas rectas de fita puxando firmemente na fita. Separe um pedaço de fita para cada rato. NOTA: Deixar de puxar firmemente na fita irá resultar na ondulação da fita. </li></ol> 8. canular a câmara anterior <ol><li> Organizar o primeiro mouse sob o microscópio cirúrgico, e focar o microscópio sobre a córnea preferido. NOTA: A canulação pode ser realizada em qualquer um dos olhos. Direito à mão cirurgiões dominantes pode encontrar it mais fácil para canular o olho esquerdo, enquanto a mão esquerda cirurgiões dominantes podem preferir a direita. </li><li> Vire na primeira porta heparina sódica 0,1% no colector de cinco válvulas. </li><li> Sob o microscópio cirúrgico, usar um par de pinças para suavemente proptose do olho. Inserir a agulha de uma cânula de calibre 30 na câmara anterior, aproximadamente, a meio caminho entre as fibras zônula e o vértice da córnea. <ol><li> Tome cuidado para evitar arranhar ou perfurar íris, lente, ou interno superfície da córnea. </li><li> Não penetrar a córnea uma segunda vez. </li><li> Usando um movimento de torção suave para vencer o atrito entre a cânula e a córnea, inserir a cânula profundamente na câmara anterior. </li></ol></li><li> Usar uma tira de fita adesiva para fixar o tubo de calibre 30 para a mesa. Para minimizar o movimento da cânula inserida, pressione o tubo de calibre 30 contra a mesa enquanto pegava a fita. </li><li> Grave a hora de início da cirurgia. </li><li> Utilizando o microscópio, verify que nenhum vazamento é aparente. Se a fuga está presente, o movimento do fluido será visível perto do olho. </li><li> Visualmente confirmar distensão ocular por meio da observação de que o olho de I / R é maior do que o olho contralateral. Juntos, a ausência de fugas e a presença de distensão ocular demonstram uma elevação da pressão intra-ocular bem sucedida. </li><li> Aplicar hipromelose para ambos os olhos. Hipromelose serve para lubrificar as microleaks córnea e de vedação. Reaplicar hipromelose, conforme necessário (aproximadamente a cada 30 min) para a lubrificação sustentado. </li><li> Repita a Etapa 8 até todos os animais foram canulados. </li></ol> 9. Anesthesia Monitor de <ol><li> Use a pitada dedo do pé, observação visual dos bigodes, ou observação visual da cauda para verificar se cada rato permanece anestesiado. Se um rato demonstrar uma resposta pedal retirada, espasmos suiça, ou o movimento da cauda, ​​proceder imediatamente à Etapa 9.2. </li><li> Se um rato começa a despertar durante a cirurgia, elevadora cauda para injectar 0,05 ml de reforço intraperitoneal no abdômen inferior de trás do mouse. Permitir 1-2 min para o reforço entrem em vigor. </li><li> Se um rato requer sedação adicionais, repita o Passo 9 conforme necessário. </li></ol> 10. Remover a cânula da câmara anterior <ol><li> Para cada animal, após 90 min de decorridos, puxe a cânula da câmara anterior. </li><li> Untape o rato da mesa cirúrgica, tendo o cuidado para não perturbar a um tubo de cânula de animais adjacentes. </li><li> Lubrifique ambos os olhos com gel lubrificante. </li><li> Como cânulas subsequentes são removidos, organizar os ratos no contentor vazio na mesa cirúrgica para recuperar de uma cirurgia. Não desligue o fogo da mesa cirúrgica. </li><li> Permitir, no mínimo, 2-3 horas para a recuperação na mesa cirúrgica aquecida. Observar os ratos com frequência até que tenham recuperado totalmente da anestesia. </li></ol> 11. Limpe a Equipment <ol><li> Desinfectar as cânulas usando álcool. NOTA: Outros métodos para a desinfecção ou esterilização, tais como esterilização em autoclave, pode ser substituído. </li><li> Expulsar 0,1% de sódio de heparina a partir do colector de 5-válvula, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando uma seringa de 60 ml cheia com ar. </li><li> Lavar o colector de 5 válvulas, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando um de 60 ml cheia com água destilada. </li><li> Expelir a água destilada a partir do colector de 5-porta, agulhas de calibre 30, tubos de calibre 30, e cânulas usando uma seringa de 60 ml cheia com ar. </li><li> Após a desinfecção das cânulas e enxaguar o aparelho de tubulação, armazenar este equipamento para reutilização. </li><li> Loja, descarte ou desligue todos os outros equipamentos. Deixar o calor da mesa cirúrgica em. </li></ol> 12. Retorno Todos os ratos para suas gaiolas <ol><li> Após os ratos despertar de uma cirurgia (após 2-3 horas), retornar cada animal à sua gaiola. Fornecer alimentos gel para cada gaiola. Retornar todas as gaiolas para seus quartos designados. </li><li> Desligue o fogo da mesa cirúrgica. Descarte todos os resíduos, e limpar a sala de cirurgia. </li></ol> 13. Realizar Avaliação Retinal <ol><li> Conforme o caso, recolher retinas para análise histológica ou ratos adaptar escuro para gravação eletrorretinograma. </li></ol>

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	<li>Osborne, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ischemia:+mechanisms+of+damage+and+potential+therapeutic+strategies.">Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies.</a> Prog Retin Eye Res. 23 (1), 91-147 (2004).</li><li>Bonne, C., Muller, A., Villain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+retinal+ischemia.">Free radicals in retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 275-280 (1998).</li><li>Smith, G. G., Baird, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+time+of+retinal+cells+when+deprived+of+their+blood+supply+by+increased+intraocular+pressure.">Survival time of retinal cells when deprived of their blood supply by increased intraocular pressure.</a> Am J Ophthalmol. 35 (5:2), 133-136 (1952).</li><li>Buchi, E. R., Suivaizdis, I., Fu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-induced+retinal+ischemia+in+rats:+an+experimental+model+for+quantitative+study.">Pressure-induced retinal ischemia in rats: an experimental model for quantitative study.</a> Ophthalmologica. 203 (3), 138-147 (1991).</li><li>Block, F., Schwarz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+b-wave+of+the+electroretinogram+as+an+index+of+retinal+ischemia.">The b-wave of the electroretinogram as an index of retinal ischemia.</a> Gen Pharmacol. 30 (3), 281-287 (1998).</li><li>Katai, N., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+retinal+neuronal+death+by+ischemia-reperfusion+is+executed+by+two+distinct+caspase+family+proteases.">Apoptotic retinal neuronal death by ischemia-reperfusion is executed by two distinct caspase family proteases.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40 (11), 2697-2705 (1999).</li><li>Toriu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lomerizine,+a+Ca2++channel+blocker,+reduces+glutamate-induced+neurotoxicity+and+ischemia/reperfusion+damage+in+rat+retina.">Lomerizine, a Ca2+ channel blocker, reduces glutamate-induced neurotoxicity and ischemia/reperfusion damage in rat retina.</a> Exp Eye Res. 70 (4), 475-484 (2000).</li><li>Kawai, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+of+risk+factors+for+the+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+after+ischemia/reperfusion+in+rats:+effects+of+age,+caloric+restriction,+diabetes,+pigmentation,+and+glaucoma.">Modeling of risk factors for the degeneration of retinal ganglion cells after ischemia/reperfusion in rats: effects of age, caloric restriction, diabetes, pigmentation, and glaucoma.</a> FASEB J. 15 (7), 1285-1287 (2001).</li><li>Chidlow, G., Schmidt, K. G., Wood, J. P., Melena, J., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-lipoic+acid+protects+the+retina+against+ischemia-reperfusion.">Alpha-lipoic acid protects the retina against ischemia-reperfusion.</a> Neuropharmacology. 43 (6), 1015-1025 (2002).</li><li>Fei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upregulation+of+Homer1a+Promoted+Retinal+Ganglion+Cell+Survival+After+Retinal+Ischemia+and+Reperfusion+via+Interacting+with+Erk+Pathway.">Upregulation of Homer1a Promoted Retinal Ganglion Cell Survival After Retinal Ischemia and Reperfusion via Interacting with Erk Pathway.</a> Cell Mol Neurobiol. , (2015).</li><li>Xu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+role+of+Nrf2+for+retinal+ganglion+cells+in+ischemia-reperfusion.">Neuroprotective role of Nrf2 for retinal ganglion cells in ischemia-reperfusion.</a> J Neurochem. 133 (2), 233-241 (2015).</li><li>Kim, B. J., Braun, T. A., Wordinger, R. J., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+morphological+changes+and+impaired+retinal+function+associated+with+temporal+regulation+of+gene+expression+after+retinal+ischemia/reperfusion+injury+in+mice.">Progressive morphological changes and impaired retinal function associated with temporal regulation of gene expression after retinal ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Mol Neurodegener. 8 (21), (2013).</li><li>Portillo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+mediates+retinal+inflammation+and+neurovascular+degeneration.">CD40 mediates retinal inflammation and neurovascular degeneration.</a> J Immunol. 181 (12), 8719-8726 (2008).</li><li>Wei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nrf2+has+a+protective+role+against+neuronal+and+capillary+degeneration+in+retinal+ischemia-reperfusion+injury.">Nrf2 has a protective role against neuronal and capillary degeneration in retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Free Radic Biol Med. 51 (1), 216-224 (2011).</li><li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+ischemic+preconditioning+and+bevacizumab+on+apoptosis+and+vascular+permeability+following+retinal+ischemia-reperfusion+injury.">Effects of ischemic preconditioning and bevacizumab on apoptosis and vascular permeability following retinal ischemia-reperfusion injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (11), 5920-5933 (2010).</li><li>Abcouwer, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minocycline+prevents+retinal+inflammation+and+vascular+permeability+following+ischemia-reperfusion+injury.">Minocycline prevents retinal inflammation and vascular permeability following ischemia-reperfusion injury.</a> J Neuroinflammation. 10 (149), (2013).</li><li>Zheng, L., Gong, B., Hatala, D. A., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+ischemia+and+reperfusion+causes+capillary+degeneration:+similarities+to+diabetes.">Retinal ischemia and reperfusion causes capillary degeneration: similarities to diabetes.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48 (1), 361-367 (2007).</li><li>Weyker, P. D., Webb, C. A., Kiamanesh, D., Flynn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+ischemia+reperfusion+injury:+a+bench-to-bedside+review.">Lung ischemia reperfusion injury: a bench-to-bedside review.</a> Semin Cardiothorac Vasc Anesth. 17 (1), 28-43 (2013).</li><li>Raedschelders, K., Ansley, D. M., Chen, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+and+molecular+origin+of+reactive+oxygen+species+generation+during+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">The cellular and molecular origin of reactive oxygen species generation during myocardial ischemia and reperfusion.</a> Pharmacol Ther. 133 (2), 230-255 (2012).</li><li>Di, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+expression+and+function+in+cerebral+ischemia+reperfusion+injury.">MicroRNAs expression and function in cerebral ischemia reperfusion injury.</a> J Mol Neurosci. 53 (2), 242-250 (2014).</li><li>Saidi, R. F., Kenari, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+ischemia/reperfusion+injury:+an+overview.">Liver ischemia/reperfusion injury: an overview.</a> J Invest Surg. 27 (6), 366-379 (2014).</li><li>Malek, M., Nematbakhsh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+ischemia/reperfusion+injury;+from+pathophysiology+to+treatment.">Renal ischemia/reperfusion injury; from pathophysiology to treatment.</a> J Renal Inj Prev. 4 (2), 20-27 (2015).</li><li>Mallick, I. H., Yang, W., Winslet, M. C., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+of+the+intestine+and+protective+strategies+against+injury.">Ischemia-reperfusion injury of the intestine and protective strategies against injury.</a> Dig Dis Sci. 49 (9), 1359-1377 (2004).</li><li>Hesketh, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+ischaemia+reperfusion+injury:+a+mouse+model+of+injury+and+regeneration.">Renal ischaemia reperfusion injury: a mouse model of injury and regeneration.</a> J Vis Exp. (88), (2014).</li><li>Stefansson, E., Wilson, C. A., Schoen, T., Kuwabara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+ischemia+induces+cell+mitosis+in+the+adult+rat+retina.">Experimental ischemia induces cell mitosis in the adult rat retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 29 (7), 1050-1055 (1988).</li><li>Honjo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statin+inhibits+leukocyte-endothelial+interaction+and+prevents+neuronal+death+induced+by+ischemia-reperfusion+injury+in+the+rat+retina.">Statin inhibits leukocyte-endothelial interaction and prevents neuronal death induced by ischemia-reperfusion injury in the rat retina.</a> Arch Ophthalmol. 120 (12), 1707-1713 (2002).</li><li>Otori, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+c-fos+and+c-jun+mRNA+following+transient+retinal+ischemia:+an+approach+using+ligation+of+the+retinal+central+artery+in+the+rat.">Expression of c-fos and c-jun mRNA following transient retinal ischemia: an approach using ligation of the retinal central artery in the rat.</a> Surv Ophthalmol. 42, 96-104 (1997).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epac2-deficiency+leads+to+more+severe+retinal+swelling,+glial+reactivity+and+oxidative+stress+in+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+induced+ischemic+retinopathy.">Epac2-deficiency leads to more severe retinal swelling, glial reactivity and oxidative stress in transient middle cerebral artery occlusion induced ischemic retinopathy.</a> Sci China Life Sci. 58 (6), 521-530 (2015).</li><li>Zhang, Y., Zhang, Z., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simvastatin+inhibits+ischemia/reperfusion+injury-induced+apoptosis+of+retinal+cells+via+downregulation+of+the+tumor+necrosis+factor-alpha/nuclear+factor-kappaB+pathway.">Simvastatin inhibits ischemia/reperfusion injury-induced apoptosis of retinal cells via downregulation of the tumor necrosis factor-alpha/nuclear factor-kappaB pathway.</a> Int J Mol Med. , (2015).</li><li>Li, B., Pang, I. H., Barnes, G., McLaughlin, M., Holt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+and+device+to+induce+transient+retinal+ischemia+in+the+rat.">A new method and device to induce transient retinal ischemia in the rat.</a> Curr Eye Res. 24 (6), 458-464 (2002).</li></ol>

The authors have no disclosures.

I retina / lesões R por PIO elevada provou a sua utilidade na modelagem de danos celulares e disfunção, especialmente neurodegeneração, na unidade neurovascular da retina de roedores. Este procedimento fornece um tecido de controle robusto e é facilmente acessível em termos de sofisticação técnica. Tem-se observado neste e em outros modelos de lesão I / R que o aumento da pressão e da duração da isquemia pode aumentar a gravidade da lesão 24. Por esta razão, alguns profissionais têm optado po...

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) caracteriza muitas patologias da retina humana, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas 1. Na retina I / R, redução do fluxo sanguíneo (isquemia) na vasculatura retiniana cria um estado de hipersensibilidade da retina ao oxigénio e outros nutrientes, precipitando oxidativo grave e dano inflamatório quando a circulação é, subsequentemente, reposta (reperfusão) 2. A retina neural parece particularmente vulnerável a estas mudanças, a neurodegeneração da retina sendo talvez a característica mais saliente do dano induzido R I /. Apresentado aqui é um protocolo para a modelagem de lesão de I / R retinal no mouse. Esta técnica permite aos pesquisadores para examinar possíveis mecanismos e estratégias de tratamento para doenças humanas da unidade neurovascular da retina. Foi pioneira em 1952 por cirurgiões que procuram compreender as consequências neurodegenerativas de anemia cirúrgica 3, rodent retinal I / R pela pressão intra-ocular elevada (PIO) foi restabelecida em 1991 com a finalidade de padronizar endpoints neurodegenerativas após lesão isquêmica 4. Usando o gotejamento de um reservatório de solução salina para elevar a PIO acima da pressão arterial sistólica, estes estudos demonstraram que a canulação ocular pressurizado foi suficiente para suspender a circulação da retina e desse modo iniciar a degeneração neuronal. Esforços mais recentes usando retina I / R por PIO elevada começaram a elaborar os mecanismos subjacentes I / neurodegeneração da retina induzida por R 5-12. Vários grupos têm relatado alterações patológicas adicionais, incluindo a inflamação 13,14, permeabilidade vascular 15,16, e degeneração capilar 14,17. Tomados em conjunto, estes estudos estabeleceram lesão da retina de I / R de PIO elevada como um modelo de doença retiniana neurovascular um modo mais geral. Caracterizar os mecanismos de lesão de I / R é essencial para o estudo de VAdoença scular. Lesão da retina de I / R de PIO elevada é um dos diversos modelos de lesão induzida por hipoxia, incluindo lesões de I / R em 18 de pulmão, coração, cérebro 19 20 21, fígado, rim e intestino 22, 23. Estes modelos têm sido fundamental no avanço da nossa compreensão da doença vascular e seus remédios clínicos. Ao estender a investigação de processos I / R para tecidos oculares, I da retina / lesões R por PIO elevada ajuda a pintar um quadro mais abrangente destas condições relacionadas. Correspondente em estreita colaboração com as condições clínicas neurodegenerativas na retina, I da retina / lesões R por PIO elevada apresenta uma ferramenta valiosa para os pesquisadores interessados ​​em explorar patogênese isquêmico. O protocolo aqui descrito é alvo, tratável, e acessível. É bem complementado por pontos de extremidade na degeneração neuronal, tais como a quantificação de neurónios da retina, a medição da espessura da retina, e R electrofisiológicoecording da retina a função do neurônio. Este modelo tem provado a sua utilidade no avanço da investigação neurovascular, e isso mostra a promessa em ganhar status como um protocolo fundamental na pesquisa da medicina visual.

<table><tbody><tr><td>Heparin Sodium Injection, USP</td><td>Abraxis Pharmaceutical Products</td><td></td><td>1,000 USP/ml</td></tr><tr><td>BSS Sterile Irrigating Solution</td><td>Alcon Laboratories, Inc.</td><td>9007754-0212</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>SC-2 kg Digital Pocket Scale</td><td>American Weigh Scales, Inc.</td><td>SC-2 kg</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide Ophthalmic Solution USP 1%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>1% (10 mg/ml)</td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution USP, 0.5%</td><td>Bausch + Lomb</td><td></td><td>0.5% (5 mg/ml)</td></tr><tr><td>INTRAMEDIC Polyethylene Tubing</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>427400</td><td>Inner diameter: 427400</td></tr><tr><td>30 G 1/2 PrecisionGlide Needles</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>BC 1 ml TB Syringe, Slim Tip with Intradermal Bevel Needle, 26 G x 3/8</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>BD 60 ml Syringe Luer-Lok Tip</td><td>Benton Dickinson and Company</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss OPMI Visu 200/S8 Microscope</td><td>Carl Zeiss AG</td><td>000000-1179-101</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Syringe Filter</td><td>Corning Inc.</td><td>CLS431224</td><td>0.20 &amp;micro;m</td></tr><tr><td>Durasorb Underpads</td><td>Covidien</td><td>1038</td><td>23 x 24 inches</td></tr><tr><td>Alcohol Prep</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td>2 Ply, Medium</td></tr><tr><td>Student Dumont #5 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Hartman Hemostats</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>Primary Set, Macrobore, Prepierced Y-Site, 80 Inch</td><td>Hospira</td><td>12672-28</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline pH 7.4 (1x)</td><td>Invitrogen</td><td>10010-049</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Distilled water</td><td>Invitrogen</td><td>15230-204</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed Injection: Xylazine Sterile Solution</td><td>LLOYD, Inc.</td><td></td><td>20 mg/ml</td></tr><tr><td>Lubricating Jelly, Water Soluble Bacteriostatic</td><td>MediChoice</td><td></td><td>3-Gram Packet</td></tr><tr><td>NAMIC Angiographic Pressure Monitoring Manifold</td><td>Navilyst Medical, Inc.</td><td>70039355</td><td>5-Valve Manifold with Seven Female Ports</td></tr><tr><td>Goniosoft, Hypromellose 2.5% Ophthalmic Demulcent Solution: Hydroxypropyl Methylcellulose</td><td>OCuSOFT, Inc.</td><td></td><td>2.5% (25 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ketaset CIII: Ketamine Hydrochloride</td><td>Pfizer, Inc.</td><td></td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Trans-Pal I.V. Stand&amp;nbsp;</td><td>Pryor Products</td><td>372</td><td>Furnished with a home-constructed 60-cm stainless steel extension</td></tr><tr><td>Acepromazine: Acepromazine Maleate Injection, USP</td><td>Vet One</td><td></td><td>10 mg/ml</td></tr><tr><td>V-Top Surgery Table/Adjustable Hydraulic</td><td>VSSI</td><td>100-4041-21</td><td></td></tr><tr><td>Tube Fitting Luer Male to Luer Male</td><td>Warner Instruments</td><td>64-1579</td><td></td></tr></tbody></table>

a mouse model of retinal ischemia-reperfusion injury through elevation of intraocular pressure

Retinal isquemia-reperfusão (I / R) é um processo patofisiológico contribuir para os danos celulares em várias condições oculares, incluindo o glaucoma, retinopatia diabética, e oclusões vasculares retinianas. modelos de roedores de lesão de I / R estão fornecendo insights significativos em mecanismos e estratégias de tratamento para o homem I / lesão R, especialmente no que diz respeito a danos neurodegenerativa na unidade neurovascular da retina. Apresentado aqui é um protocolo para a indução de lesões retinianas I / R em ratos através da elevação da pressão intra-ocular (PIO). Neste protocolo, a câmara anterior ocular é canulada com uma agulha, por onde corre o gotejamento de um reservatório de solução salina elevada. Usando este gotejamento para elevar a PIO acima da pressão arterial sistólica, um praticante de pára temporariamente o fluxo sangüíneo da retina interna (isquemia). Quando a circulação é reposta (reperfusão) por remoção da cânula, o dano celular grave resulta, em última instância, resulta na neurodegeneração da retina. garanhão recentes demonstrar inflamação, da permeabilidade vascular, e degeneração capilar como elementos adicionais desse modelo. Em comparação com metodologias I / R retina alternativas, como a ligadura arterial da retina, retinal I / lesão R por PIO elevada oferece vantagens na sua especificidade anatómica, tractability experimental, e acessibilidade técnica, apresentando-se como uma ferramenta valiosa para examinar patogênese neuronal e terapia em a unidade neurovascular da retina.

Os efeitos neurodegenerativos da retina de I / R de elevada pressão intra-ocular são geralmente avaliadas utilizando duas abordagens convencionais. NeuN imunomarcação dos núcleos neuronais revelou perda de células neuronais significativa após I / R insulto (Figura 1). Em resumo, os olhos enucleados 7 dias após I / R, foram fixadas em paraf ormaldeído, marcado com o marcador da célula neuronal NeuN, e todo-montado. As imagens foram capturadas usando microscopia ...

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A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

a-mouse-model-retinal-ischemia-reperfusion-injury-through-elevation

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

14.9K visualizações.  Johns Hopkins University.  Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina....

Vídeo: A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Laser-Induced Chronic Ocular Hypertension Model on SD Rats

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular hypertension is one of the well established animal models. This video demonstrates how to induce ocular hypertension by Argon laser photocoagulation in rat.

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular hypertension is one of the well established animal models. This video demonstrates how to induce ocular hypertension by Argon laser photocoagulation in rat.

Laser-Induced Ocular Modelo Hipertensão crônica em ratos SD

Glaucoma is one of the major causes of blindness in the world. Elevated intraocular pressure is a major risk factor. Laser photocoagulation induced ocular ...

Biologia

A Laser-induced Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension to Characterize Visual Defects

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model of ocular hypertension to mimic human high-tension glaucoma. Here laser illumination is applied to the corneal limbus to photocoagulate the aqueous outflow, inducing angle closure. The changes of IOP are monitored using a rebound tonometer before and after the laser treatment. An optomotor behavioral test is used to measure corresponding changes in visual capacity. The representative result from one mouse which developed sustained IOP elevation after laser illumination is shown. A decreased visual acuity and contrast sensitivity is observed in this ocular hypertensive mouse. Together, our study introduces a valuable model system to investigate neuronal degeneration and the underlying molecular mechanisms in glaucomatous mice.

Chronic ocular hypertension is induced using laser photocoagulation of the trabecular meshwork in mouse eyes. The intraocular pressure (IOP) is elevated for several months after laser treatment. The decrease of visual acuity and contrast sensitivity of experimental animals are monitored using the optomotor test.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

Glaucoma, frequently associated with elevated intraocular pressure (IOP), is one of the leading causes of blindness. We sought to establish a mouse model ...

Medicina

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the brain for visual perception. Damage to RGCs and their axons leads to vision loss and/or blindness. Although the specific cause of glaucoma is unknown, the primary risk factor for the disease is an elevated intraocular pressure. Glaucoma-inducing procedures in animal models are a valuable tool to researchers studying the mechanism of RGC death. Such information can lead to the development of effective neuroprotective treatments that could aid in the prevention of vision loss. The protocol in this paper describes a method of inducing glaucoma - like conditions in an in vivo rat model where 50 &#181;l of 2 M hypertonic saline is injected into the episcleral venous plexus. Blanching of the vessels indicates successful injection. This procedure causes loss of RGCs to simulate glaucoma. One month following injection, animals are sacrificed and eyes are removed. Next, the cornea, lens, and vitreous are removed to make an eyecup. The retina is then peeled from the back of the eye and pinned onto sylgard dishes using cactus needles. At this point, neurons in the retina can be stained for analysis. Results from this lab show that approximately 25% of RGCs are lost within one month of the procedure when compared to internal controls. This procedure allows for quantitative analysis of retinal ganglion cell death in an in vivo rat glaucoma model.

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is characterized by damage to retinal ganglion cells. Inducing glaucoma in animal models can provide insight into the study of this disease. Here, we outline a procedure that induces loss of RGCs in an in vivo rat model and demonstrates the preparation of whole-mount retinas for analysis.

Glaucoma de indução de Procedimento em um<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de Rato e Whole mount-Retina Preparação

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing stable IOP elevation in mice that mimics the post-operative complication of using silicone oil (SO) as a tamponade agent in human vitreoretinal surgery. In this protocol, SO is injected into the anterior chamber of the mouse eye to block the pupil and prevent inflow of aqueous humor. The posterior chamber accumulates aqueous humor and this in turn increases the IOP of the posterior segment. A single SO injection produces reliable, sufficient, and stable IOP elevation, which induces significant glaucomatous neurodegeneration. This model is a true replicate of secondary glaucoma in the eye clinic. To further mimic the clinical setting, SO can be removed from the anterior chamber to reopen the drainage pathway and allow inflow of aqueous humor, which is drained through the trabecular meshwork (TM) at the angle of the anterior chamber. Because IOP quickly returns to normal, the model can be used to test the effect of lowering IOP on glaucomatous retinal ganglion cells. This method is straightforward, does not require special equipment or repeat procedures, closely simulates clinical situations, and may be applicable to diverse animal species. However, minor modifications may be required.

Here, we present a protocol to induce ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse eyes by intracameral injection of silicone oil and the procedure for silicone oil removal from the anterior chamber to return elevated intraocular pressure to normal.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

Neurociência

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. To investigate pathological mechanisms of retinal ischemia, relevant experimental models need to be developed. Anatomically, a main retinal blood supplying vessel is the ophthalmic artery (OpA) and OpA originates from the internal carotid artery of the common carotid artery (CCA). Thus, disruption of CCA could effectively cause retinal ischemia. Here, we established a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion (tBCCAO) to tie the right CCA with 6-0 silk sutures and to occlude the left CCA transiently for 2 seconds via a clamp, and showed that tBCCAO could induce acute retinal ischemia leading to retinal dysfunction. The current method reduces reliance on surgical instruments by only using surgical needles and a clamp, shortens occlusion time to minimize unexpected animal death, which is often seen in mouse models of middle cerebral artery occlusion, and maintains reproducibility of common retinal ischemic findings. The model can be utilized to investigate the pathophysiology of ischemic retinopathies in mice and further can be used for in vivo drug screening.

Here, we describe a mouse model of retinal ischemia by transient bilateral common carotid artery occlusion using simple sutures and a clamp. This model can be useful for understanding the pathological mechanisms of retinal ischemia caused by cardiovascular abnormalities.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), proliferative diabetic retinopathy (PDR), and retinal vein occlusion (RVO). Most OIR studies observe retinal neovascularization at specific time points; however, the dynamic vessel growth in live mice along a time course, which is essential for understanding the OIR-related vessel diseases, has been understudied. Here, we describe a step-by-step protocol for the induction of the OIR mouse model, highlighting the potential pitfalls, and providing an improved method to quickly quantify areas of vaso-obliteration (VO) and neovascularization (NV) using immunofluorescence staining. More importantly, we monitored vessel regrowth in live mice from P15 to P25 by performing fluorescein fundus angiography (FFA) in the OIR mouse model. The application of FFA to the OIR mouse model allows us to observe the remodeling process during vessel regrowth.

This protocol describes a detailed method for the preparation and immunofluorescence staining of mice retinal flat mounts and analysis. The use of fluorescein fundus angiography (FFA) for mice pups and image processing are described in detail as well.

Monitoramento do crescimento dinâmico dos vasos retinais no modelo de rato de retinopatia induzido pelo oxigênio

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

<meta charset="utf8"></head><body>Modelo de camundongo para lesão de isquemia-reperfusão retiniana para estudar patologias retinianas

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, and other vaso-occlusive conditions. This manuscript presents a method for inducing ischemia-reperfusion injury in a mouse model. The method utilized anterior chamber cannulation attached to a saline reservoir, generating hydrostatic pressure to raise the intraocular pressure to 90-100 mmHg. This method effectively caused constriction of retinal capillaries to induce retinal ischemia. At the end of the ischemic period (60 min), the intraocular pressure was normalized (&#8804;20 mmHg) before removing the cannula from the anterior chamber to initiate reperfusion. Days after the ischemia/reperfusion procedure, the eyes were collected and sectioned for histological staining. The histopathology of the retinal sections was scored by evaluating eight parameters of retinal injury: folds, hemorrhage, deformation, cell loss in the ganglion cell, inner nuclear, outer nuclear, and photoreceptor layers, and damage to retinal pigment epithelial cells. This method provided a reproducible model to study the mechanisms and pathology of retinal ischemia/reperfusion injury. In addition, this model can facilitate the discovery of potential therapeutic targets to treat retinal ischemia/reperfusion injury, advancing the study of retinal pathologies and improving patient outcomes.

<meta charset="utf8"></head><body>Indução de lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um modelo de olho de camundongo

This protocol models retinal ischemia-reperfusion injury in a mouse eye by inducing retinal ischemia via anterior chamber cannulation and intraocular pressure elevation, followed by intraocular pressure normalization to initiate the reperfusion.

Indução de lesão de isquemia-reperfusão retiniana em um modelo de olho de camundongo

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, ...