Evaluation of the Impact of a New Cooling Cell Processor System on Islet Cell Isolation Facility

안녕하세요, 저는 Center P Lab 책임자인 Dr.Jihad입니다. 이 비디오의 오늘 목표는 아일릿 격리 시설에서 사용되는 적응형 냉각 셀 프로세서가 환경 및 세포 회수에 영향을 미치지 않는 것을 보여주는 것입니다. 먼저 경밀도 및 중밀도 구배와 셀 프로세서 키트를 섭씨 4도에서 사전 냉각합니다.

다음으로, 45분 동안 사전 냉각하여 셀 프로세서를 준비합니다. 사전 냉각 셀 프로세서 키트를 표준 에탄올 냉각 이중 재킷 그래디언트 메이커의 셀 프로세서에 삽입합니다. 두 개의 유리 챔버를 연결하고 자기 교반에 놓습니다.두 챔버 사이에 튜브를 고정합니다. 시원하다.

냉각 후 섭씨 0도에서 에탄올 순환 냉각기가 있는 그라디언트 메이커. 펌프 속도를 분당 150밀리리터로 설정하여 백 바닥에 130밀리리터의 무거운 밀도 구배로 챔버를 채웁니다. 무거운 그라디언트가 가방에 들어가면 두 챔버 사이의 지혈을 닫습니다.

그런 다음 전면 비커에 130ml의 고밀도 전류를 추가하고 후면 비커에 140ml의 저밀도 구배를 추가합니다.Dec. 두 챔버 사이에 지혈제를 고정한 다음 분당 50ml의 펌프 속도를 설정하여 두 챔버 사이에 연속 그라디언트를 만듭니다. 다음으로, 혈액 은행에서 제공하는 전혈 폐기물에서 수집한 여러 개의 풀링된 익명의 버피 코트에서 정제하기 위해 인간 단핵 버피 코트 세포를 준비합니다.

분리 후 분당 25ml로 설정된 연동 펌프를 사용하여 전사 백의 95ml의 고밀도 구배 매체에 저밀도 단핵 셀 현탁액과 유사한 비중 5ml를 추가합니다. 사전 보정된 온도 프로브를 사용하여 30ml의 단핵 세포 현탁액으로 사전 형성된 그래디언트를 탑로드합니다. 끊임없이. 멸균 온도 프로브에 연결된 디지털 열전대를 사용하여 셀 프로세서 내부의 온도를 측정합니다.

프로세스 중 gradients 및 cells의 온도를 모니터링합니다. 그래디언트 로딩이 끝나면 셀 프로세서를 537G로 설정하여 로터에서 발생하는 열을 최소화합니다. 셀 프로세서를 꺼서 유압 시스템이 실행 전 수준으로 돌아가고 공기를 방출할 수 있도록 합니다.

그런 다음 537G에서 셀 프로세서를 다시 시작하고 130밀리리터의 중밀도 구배와 140밀리리터의 저밀도 구배를 추가하여 분당 50밀리리터 및 섭씨 4.3도의 유속으로 연속 밀도 구배를 생성합니다. 다음으로, 분당 25밀리리터의 유속과 섭씨 6도의 유속으로 하중 밀도 구배 위에 30밀리리터의 Buffy coat cell 현탁액을 로드합니다. 셀 로딩 후 5분 후에 50ml의 세척 용액을 셀 프로세서에 추가합니다.

분당 100밀리리터의 유속으로 12개의 병과 섭씨 5도의 충전 튜브(100ml의 세척 매체와 150ml의 셀이 있는 튜브)에서 방적 구배를 수집합니다. 그런 다음 튜브 2에서 12까지 225ml의 세척 매체와 25ml의 세포를 채웁니다. 클린룸 환경, C 등급 및 B 등급의 공기 중 입자 평가는 클린룸, GMP 등급 C, 등급 B 및 BSL 3 표준에 따라 0.5 및 5 미크론의 공기 중 미립자를 초과하지 않는 것으로 나타났습니다.

처음 4단계 동안 구배 온도의 큰 차이는 관찰되지 않았으며 두 프로세서 모두 약 섭씨 4.5도를 유지했습니다. 그러나 원심분리 후 및 수집 단계 중에 두 처리기 모두에 대해 수집 단계의 시작과 끝에서 온도가 상승했습니다. 또한, 냉각된 세포 프로세서는 인간 세포 정제에 영향을 미칩니다.

효율성과 생존 가능성은 원심분리 후에 결정되었습니다. 수집된 세포의 온도는 섭씨 8.5도까지 약간 상승했습니다. 활성 공기 샘플링 및 멸균 스크리닝은 성장이 나타나지 않았습니다.