Olá, sou o Dr.Jihad, o Diretor do Laboratório Center P. O objetivo hoje deste vídeo é mostrar um processador de células refrigerado adaptado usado na instalação de isolamento de ilhós sem impacto no meio ambiente, bem como na recuperação das células. Comece pré-resfriando os gradientes de densidade leve e pesado e o kit do processador de células a quatro graus Celsius.
Em seguida, prepare o processador celular pré-resfriando por 45 minutos. Insira o kit do processador de célula pré-resfriado no processador de célula para o fabricante de gradiente de camisa dupla refrigerado a etanol padrão. Conecte as duas câmaras de vidro e coloque-as em uma agitação magnética Prenda o tubo entre as duas câmaras. Fresco.
O fabricante de gradiente com um resfriador de circulação de etanol a zero graus Celsius após o resfriamento. Defina a velocidade da bomba para 150 mililitros por minuto para encher a câmara com 130 mililitros de gradiente de densidade pesada no fundo do saco. Uma vez que o gradiente pesado esteja na bolsa, feche o hemostático entre duas câmaras.
Em seguida, adicione 130 mililitros de alta densidade ao béquer frontal e 140 mililitros de gradientes de baixa densidade ao béquer traseiro. Prenda o hemostático entre as duas câmaras e, em seguida, defina uma velocidade de bomba de 50 mililitros por minuto para criar um gradiente contínuo entre duas câmaras. Em seguida, prepare as células do revestimento leuconucleico mononuclear humano para purificação a partir de vários revestimentos Buffy anônimos coletados de resíduos de sangue total fornecidos pelo banco de sangue.
Após a separação, adicione cinco mililitros de gravidade específica semelhante à suspensão de células mononucleares de baixa densidade em 95 mililitros de meio gradiente de alta densidade em uma bolsa de transferência usando uma bomba peristáltica ajustada para 25 mililitros por minuto. Carregue o gradiente pré-formado com 30 mililitros de suspensão de célula mononuclear usando uma sonda térmica pré-calibrada. Continuamente. Meça a temperatura dentro do processador da célula usando um termopar digital conectado a uma sonda térmica estéril.
Monitore a temperatura de gradientes e células durante o processo. No final do carregamento de gradiente, defina o processador da célula em 537 G para minimizar o calor gerado pelo rotor. Desligue o processador da célula para permitir que o sistema hidráulico retorne aos níveis anteriores à execução e libere ar.
Em seguida, reinicie o processador da célula a 537 G e adicione 130 mililitros de gradientes de densidade pesados e 140 mililitros de baixa densidade para criar um gradiente de densidade contínuo a uma taxa de fluxo de 50 mililitros por minuto e 4,3 graus Celsius. Em seguida, carregue 30 mililitros de suspensão de célula de revestimento Buffy em cima de um gradiente de densidade de carga a uma taxa de fluxo de 25 mililitros por minuto e seis graus Celsius. Após o carregamento da célula, adicione 50 mililitros de solução de lavagem no processador da célula após cinco minutos.
Colete o gradiente fiado em 12 garrafas a uma taxa de fluxo de 100 mililitros por minuto e tubo de enchimento de cinco graus Celsius, um com 100 mililitros de mídia de lavagem e 150 mililitros de células. Em seguida, encha os tubos de dois a 12 com 225 mililitros de mídia de lavagem e 25 mililitros de células. A avaliação de partículas transportadas pelo ar em ambiente de sala limpa, grau C e grau B mostrou que não havia excesso de partículas transportadas pelo ar de 0,5 e cinco mícrons de acordo com os padrões de sala limpa, GMP grau C, grau B e BSL três.
Nenhuma diferença significativa nas temperaturas do gradiente foi observada durante as primeiras quatro etapas, com ambos os processadores mantendo aproximadamente 4,5 graus Celsius. No entanto, após a centrifugação e durante as etapas de coleta, a temperatura aumentou no início e no final das etapas de coleta para ambos os processadores. Além disso, os processadores de células resfriadas afetam a purificação da célula humana.
A eficiência e a viabilidade foram determinadas após a centrifugação. A temperatura das células coletadas subiu ligeiramente para 8,5 graus Celsius. A amostragem ativa de ar e a triagem de esterilidade não mostraram crescimento.
