Здравствуйте, я доктор Джихад, директор лаборатории Центра. Сегодняшняя цель этого видео — показать адаптированный охлаждаемый процессор ячеек, используемый в изоляторе для глазков, без воздействия на окружающую среду, а также при восстановлении клеток. Начните с предварительного охлаждения легкого и сильного градиентов плотности и комплекта процессора ячейки при четырех градусах Цельсия.
Далее подготовьте процессор ячейки путем предварительного охлаждения в течение 45 минут. Вставьте комплект процессора для предварительного охлаждения ячеек в процессор для стандартного градиентного генератора с двойным охлаждением этанолом. Соедините две стеклянные камеры и поместите их на магнитную мешалку. Зажмите трубку между двумя камерами. Классно.
Градиентный генератор с циркуляционным охладителем этанола при нулевом градусе Цельсия после охлаждения. Установите скорость насоса на 150 миллилитров в минуту, чтобы заполнить камеру 130 миллилитрами градиента большой плотности на дне мешка. Как только тяжелый градиент окажется в пакете, закройте гемостат между двумя камерами.
Затем добавьте 130 миллилитров высокой плотности в передний стакан и 140 миллилитров градиентов низкой плотности в задний стакан.Декабрь. Зажмите гемостат между двумя камерами, затем установите скорость насоса 50 миллилитров в минуту, чтобы создать непрерывный градиент между двумя камерами. Затем подготовьте человеческие мононуклеарные клетки оболочки баффи для очистки из нескольких объединенных анонимных оболочек баффи, собранных из продуктов жизнедеятельности цельной крови, предоставленных банком крови.
После разделения добавьте пять миллилитров удельного веса, напоминающего суспензию мононуклеарных элементов низкой плотности, в 95 миллилитров градиентной среды высокой плотности в мешок для переноса с помощью перистальтического насоса, установленного на 25 миллилитров в минуту. Сверху загрузите предварительно сформированный градиент 30 миллилитрами суспензии мононуклеарных элементов с помощью предварительно откалиброванного термозонда. Беспрерывно. Измерьте температуру внутри процессора ячейки с помощью цифровой термопары, подключенной к стерильному термозонду.
Следите за температурой градиентов и ячеек во время процесса. В конце градиентной нагрузки установите процессор ячейки на 537 G, чтобы свести к минимуму тепло, выделяемое ротором. Выключите процессор ячеек, чтобы гидравлическая система вернулась к предварительному уровню и выпустила воздух.
Затем перезагрузите процессор ячейки на 537 G и добавьте 130 миллилитров тяжелых и 140 миллилитров градиентов низкой плотности, чтобы создать непрерывный градиент плотности со скоростью потока 50 миллилитров в минуту и 4,3 градуса по Цельсию. Затем загрузите 30 миллилитров суспензии Buffy coat cell поверх градиента плотности нагрузки со скоростью потока 25 миллилитров в минуту и шести градусов Цельсия. После загрузки ячейки через пять минут добавьте в процессор ячейки 50 миллилитров моющего раствора.
Соберите градиент вращения в 12 бутылок со скоростью потока 100 миллилитров в минуту и пять градусов Цельсия заполните пробирку, в одной из которых 100 миллилитров промывочного материала и 150 миллилитров ячеек. Затем заполните пробирки со второго по 12 225 миллилитров промывочного материала и 25 миллилитров ячеек. Оценка взвешенных в воздухе частиц в чистых помещениях, класс C и класс B, показала, что не было превышения частиц в воздухе от 0,5 до пяти микрон в соответствии с тремя стандартами чистых помещений, GMP класса C, класса B и BSL.
Существенной разницы в температурах градиента не наблюдалось в течение первых четырех этапов, при этом оба процессора поддерживали температуру около 4,5 градусов Цельсия. Однако после центрифугирования и на этапах сбора температура повышалась в начале и в конце этапов сбора для обоих процессоров. Кроме того, охлажденные клеточные процессоры влияют на очистку клеток человека.
Эффективность и жизнеспособность определяли после центрифугирования. Температура собранных клеток немного поднялась до 8,5 градусов по Цельсию. Активный отбор проб воздуха и скрининг на стерильность не показали роста.
