다음 프로토콜은 20-35g 마우스에서 잘 작동하는 시스템을 설명합니다. 방법은 쉽게 간단히 카테터의 크기를 변경하여 더 크거나 작은 마우스에 적응 될 수있다. 모든 동물 프로토콜은 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 1. 폐 떨어 뜨림 <ol><li> 삽관에 사용하는 상용 1 인치 긴 20g 정맥 캐뉼라를 선택합니다. </li><li> 수동으로도 1에 도시 된 바와 같이 그 선단부에 약간의 곡률을 생성하도록 절곡 카테터 팁을 수정한다. </li><li> IP는 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (15 ㎎ / ㎏)의 혼합물로 마취 주사 마우스, 반사 및 움직임의 부재를 확인하여 마취. 즉시 마취 후 눈에 수의학 연고를 적용합니다. 마취는 눈에 수의학 연고를 적용하고 이후 수술 및 점안 마취에 대한 카프로 펜 (5 ~ 10 ㎎ / ㎏ SQ)을 얻었다 직후. </li><li> 양해 각서 (MOU)를 배치경 사진 플랫폼에 자체 부정사. 도 2에 도시 된 바와 같이, 봉합 루프와 함께 큰 사무실 바인더 완벽 잘 작동에 녹화. </li><li> 목 청소의 복부 부분을 면도하고 70 % 알코올로 목 영역을 소독. 새로운 라텍스 -와 powder- 무료 장갑, 70 % 알코올로 소독 된 수술 도구를 사용합니다. </li><li> 사용 날카로운 가위는 약 12​​mm 아래 앞니 아래의 목에 작은 수술 절개를합니다. </li><li> 집게 부드럽게 목 피부를 당겨와 기관의 복부 벽을 알 수 미부까지. </li><li> 부드럽게 혀를 철회하고 마우스의 복부 표면을 향해 기울어 구부러진 끝 캐 뉼러를 삽입합니다. 1.4에서와 같이, 목의 피부에 부드럽게 당기와 기관에 캐 뉼러를 삽입합니다. 참고 : 약간의 연습으로, 카테터는 기관을 아래로 이동 볼 수 있습니다. 이 식도로가는 경우, 카테터의 움직임의 시각적 관찰은 없을 것이다. 어떤 절개하지기관에서 만들어진다. </li><li> 카테터는 목의 기관에서 볼되면, 안정적으로 그것을 약 5mm 고급 성대를 통과하지만 여전히 잘 카리나 위. </li><li> 겔로드 피펫 팁 카테터를 통해 주입 액의 50 μL까지 심어 준비합니다. 루어 허브에서 팁을 배치,하지만 마우스의 호흡과 팁 동기에 유체의 움직임을 관찰하기 위해주의 깊게 살펴 주입하기 전에. 그런 다음 instillate를 주입. </li><li> 1 mL의 시린지로 즉시 폐 액체 깊이를 분배하기 위해 카테터를 통해 폐에 공기 0.6 ㎖가 비교적 급속 팽창을한다. 정맥을 제거합니다. </li><li> 정맥을 제거합니다. </li><li> VetBond에 대한 패키지 삽입 지시에 따라 작은 수술 상처를 닫 시아 노 아크릴 레이트 접착제의 작은 금액을 사용합니다. 개별 케이지에 마우스를 놓고 그들이 일어나까지 시각적으로 모니터링하고 discomf의 표시없이 정상적으로 작동오트. </li></ol> 2. 폐 고정 참고 : 모든 실험 절차는 마우스에서 수행되면, 폐는 포름 알데히드 (또는 기타 원하는 정착액)와 고정에 의해 조직 학적 처리를 위해 준비 할 수 있습니다. <ol><li> IACUC 수용 절차에 마우스를 희생. 비디오에 도시 대표 마우스를 들어, 마취 된 쥐의 경추 탈구가 사용된다. </li><li> 수술, 기관의 복부 측면을 노출 작은 컷을하고, 기관에 18 G 스텁 바늘 끝을 삽입하고, 스레드와 함께 매서 (아직 수행하지 않은 경우) 기관 절개술을 수행합니다. </li><li> 조심스럽게, 중간 선 절개로 가슴을 열고 다이어프램을 절단하고, 폐를 노출하는 측면 가슴 벽을 제거합니다. </li><li> 포름 알데히드를 포함하는 링 스탠드에 저수지에 바늘의 루어 끝을 연결합니다. 그림 3을 참조하십시오. </li><li> 25cm 각서의 레벨보다 포름 알데히드의 상면을 설정할그 자체. 그림 3을 참조하십시오. 다음 꼭지의 끝에서 유체를 실행하여 고정 튜브에 공기가없는 있는지 확인하십시오. 저수지 튜브로 기관 캐뉼라의 루어 끝을 연결합니다. 포름 알데히드와 폐를 팽창 할 수있는 꼭지를 엽니 다. 적어도 20 분 동안 압력으로 폐를 남겨주세요. </li><li> 포름 알데히드와 폐를 팽창 할 수있는 꼭지를 엽니 다. 적어도 20 분 동안 압력으로 폐를 남겨주세요. </li><li> 다음으로, 스텁 바늘의 끝을지나 기관을 묶어. 그것은 uncannulated 기관의 더 많은 노출 바늘에 다시 천천히 당겨하는 데 도움이 될 수 있습니다. 안전하게 연결하면, 꼭지를 제거합니다. </li><li> 조심스럽게 폐를 해부하다. </li><li> 하룻밤 포름 알데히드의 폐를 놓습니다. 긴 시간은 괜찮, 일부 얼룩이나 절차는 특정 시간을 지정할 수 있습니다. 또한 Z-수정 같은 다른 액체 고정 제는, 점적 및 침지에 사용될 수있다. </li><li> 또한 조직 학적 처리하기 전에 측정다음에 기술 된 바와 같이 고정 된 폐 용적. </li></ol> 고정 폐 볼륨 3. 측정 <ol><li> .도 4에 도시 된 바와 같이 아르키메데스 원리를 이용한 폐의 부피를 측정 포름 알데히드에서 고정 폐를 제거하고 심장 및 다른 비 - 폐 조직 해부. </li><li> 완전히 수몰 폐를 유지하는 데 사용되는 이전에 구성된 간단한 만든 와이어지지 장치를 사용한다. 참고 :이 장치가 사용되는 중 균형과 호환 할 필요가있다. 도 5에 도시 된 전형적인 플라스틱 피펫 장치는 얇은 (20 G) 와이어로 제조된다. 이 시스템은 비디오에 사용 된 균형이 잘 작동하지만, 가장 쉽게 실험실 저울에 적용 할 수있다. </li><li> 물에 장소에 지원 케이지 균형과 용기에 물 ≈200 ml의 비커를 놓습니다. . 그림 6 참조 금속 케이지를 제거; 물 표면에 폐를두고 물에서 눌러케이지. </li><li> 균형에 무게를 기록한다. 이 수는 물 변위의 양을 반영하고, 따라서 폐 용적의 직접적인 척도이다. 확인 폐 또는 봉합 또는 측면이나 비커의 바닥에 닿지 않도록 와이어 케이지의 어떤 부분을주의하십시오. </li><li> 정확도,이 측​​정을 반복한다. 조직에있는 물에서 폐, 건조를 제거합니다. 다시 자리에 케이지와 비커를 용기와 폐 용적 측정을 반복한다. 두 부피 측정은 다음 평균화한다. 주 : 폐보다 약 일주일 포르말린에 남아있는 경우, 폐에 공기를 액체에 용해 될 것이다. 이 경우, 폐 싱크 것, 그래서 침수 폐 유지도 5에서와 같이 임의의 장치를 사용하는 것이 더 이상 필요하지 않다. 이러한 경우 볼륨은도 4에 도시 된 것처럼 완전히 잠길 때까지 봉합 문자열 중 하나에 의해 폐 유지시킴으로써 간단하게 측정 할 수있다. </li></ol>

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여기에 설명 된 절차는 여러 가지 장점이있다. 먼저 필요한 장비는 간단하고 저렴하다. 둘째, 삽관 빠르게 거의 오류없이 수행 할 수있다. 셋째로, 고정 폐 용적을 일정한 압력으로 폐를 고정하고 측정하는 능력은 폐 (10)의 구조 또는 셀의 적절한 정량을 허용한다. 삽관에 한 가지 단점은 작은 수술이다. 이것은 2 차 점적 주입이 필요한 경우의 절차를 반복 할 ...

여러 가지 이유로, 폐암 널리 마우스에서 연구되지 ​​않았다. 그 이유 중 하나는 폐에 대한 액세스가 생체 내에서 매우 곤란하며, 고정 된 폐의 정량 분석은 일반적으로 수행되지 않는다는 것이다. 이 문서에서 설명하는 방법은이 상황을 해결하기 위해 설계되었습니다. 목표는 여기에 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명한다. 이러한 방법 중 어느 것도 완전히 새로운 없지만, 그들은 여기에 설명 된대로 단순화 된 방식으로 독립 실행 형 방법으로 함께 제시되지 않았다. 주로 길이 연구에서 개별 마우스에서 반복 폐 기능 또는 기관지 세척을하는 목적 마우스 폐 삽관 용 방법을 설명 하였다 원고있어왔다. 그 원래의 종이 때문에, MOUS에 다른 접근 방식을 설명했다 몇 가지 다른 논문이 있었다전자 삽관 1 -9. 이들 방법 모두가 성공적으로 사용될 수 있지만, 그들은 일반적으로 상당한 훈련이 필요하며, 사소 실패율없이 종종있다. 또한, 폐 기능의 측정을 수행하기 위해, 캐 뉼러는 공기 누설이 없도록 충분히 밀접 기관 적합해야한다. 그러나, 삽관 용 다른 실용적인 사용은 폐에 직접 특정 에이전트 (암세포 또는 기타 욕설) 또는 치료제를 제공하는 것이다. 이러한 절차는 꽉 피팅 정맥이나 정교한 폐 기능의 장비를 필요로하지 않습니다. 여기에 도시 된 본 방법의 특징은 신규 한 식도를 입력 뉼러의 가능성없이 삽관을 허용 작은 외과 수술을 포함한다. 이 간단한 방법은 비교적 적은 훈련이나 경험이 성공적인 삽관을 할 수 있습니다. 30 개의 마우스 / 시간은 제로에 접근 실패율이 방법을 사용하여 처리 될 수있다. T 일단그는 마우스는 부상 또는 암의 폐 후 조직 학적 및 병리학 적 분석을 위해 제거 할 수 있습니다, 희생 할 준비가되어 있습니다. 그러나, 적절하게 다른 폐과의 비교를 위해 모든 조직 학적 변수를 정량화하기 위해서, 정착 과정을 표준화하고 적절히 고정 폐 용적 (10)을 정량화하는 것이 필수적이다. 이 논문은 상세히 표준화 정착 절차뿐만 아니라 고정 폐 용적을 측정 할 수있는 방법을 허용 간단한 절차를 설명한다. 이러한 체적 측정없이, 단지 상대 밀도가 10을 측정 할 수 있기 때문에, 부피가 조직학의 정량화에 필수적인 메트릭이다. 폐 용적이 알려지면, 그러나, 세포 및 폐의 다른 구조적 측정의 절대 측정은 다음 정량화 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>Laboratory Balance</td><td>Ohaus</td><td>Adventurer Pro Model AV 313&amp;nbsp;</td><td>Other balances can be used if they have a range of 1-300 g</td></tr><tr><td>20 g Luer intravenous catheter</td><td>Insylte</td><td></td><td>Several other possible vendors, &lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, Jelco Optiva</td></tr><tr><td>500 ml laboratory bottle</td><td>Various</td><td></td><td>Several other possible vendors</td></tr></tbody></table>

instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research

부상 또는 쥐를 죽이지 않고 직접 폐로 라이브 제제, 세포, 또는 화학 물질을 주입하는 능력은 폐암 연구에서 중요한 도구이다. 폐 기능 측정을 위해 마우스를 삽관하는 방법을 보여주는 게시 된 많은 방법이 있지만, 아무도는 마우스의 큰 동료의 급격한 기관 점안에 대한 잠재적 인 문제없이 없습니다. 본 논문에서는 간단하고 빠른 방법은 효율적인 방식으로 이러한 instillations을 수행하는 연구자있게 것이 기재되어있다. 이 방법은 특별한 도구 나 조명을 필요로하지 않고 약간의 연습을 배울 수 있습니다. 또한, 마우스를 마취 기관을 시각화 목에 작은 절개를 제작 한 후 직접 정맥 카테터를 삽입하는 것을 포함한다. 작은 절개 빠르게 조직 접착제로 폐쇄하고, 마우스를 복구 할 수있다. 숙련 된 학생 또는 기술자는 2 분 / 마우스의 평균 속도로 instillations을 수행 할 수 있습니다. T 일단암이 확립 그는, 폐의 조직 학적 정량 분석​​에 대한 요구가 빈번하다. 전통적으로 고정하는 동안 폐 인플레이션을 표준화 귀찮게하지 않습니다 일반적으로 병리학 및 분석은 종종 매우 주관적 일 수있는 평가 시스템을 기반으로합니다. 이 언젠가 폐 종양의 크기의 추정을위한 총 충분히 적합 할 수 있지만, 폐 세포 구조 또는 임의의 적절한 stereological 정량화 재현성 정착 과정 및 후속 폐 량 측정을 필요로한다. 여기에서 우리는 모두 압력 폐를 고정하고 정확하게 고정 폐 용적을 측정하는 간단한 신뢰할 수있는 절차에 대해 설명합니다. 유일한 요구 사항은 MG-1 300 g의 범위에 걸쳐 정확한 실험 실용 저울이다. 그러므로 여기에 제시된 절차는 크게 마우스에서 폐암을 생성 처리, 및 분석 할 수있는 능력을 향상시킬 수있다.

절차는 그 자체로 어떤 일반화 된 결과로 연결되지 않는 첫 번째 프로토콜에 대해 설명합니다. 단지 직접 기관지 내로 물질을 주입하기위한 수단을 더 믿을만한 설명한다.도 7은 트립 판 블루가 여기에 기재된 방법에 주입시킨 폐의 일례를 도시한다. 기관 또는 마우스 (11, 12)에 주어진 다른 염료 또는 추적자로 볼 된 것과 유사한 염료의 광범위한 분포는있다. 우?...

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Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다.

마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

The ability to instill live agents, cells, or chemicals directly into the lung without injuring or killing the mice is an important tool in lung cancer ...

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28.2K 조회수.  Johns Hopkins University.  이 논문의 목적은 크게 폐암 또는 다른 병리와 설정 및 마우스 폐의 분석에 도움이 될 간단한 방법을 설명하는 것입니다. 우리는 간단하고 확실하게 폐 instillations, 정착, 폐 용적 측정을 수행하는데 3 프로토콜을 제시한다. 

비디오: Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of micrometastases by radiologic imaging and the success in their therapeutic eradication remain limited.
While animal models have proven to be invaluable tools for cancer research1, the monitoring/visualization of micrometastases remains a challenge and inaccurate evaluation of metastatic spread in preclinical studies potentially leads to disappointing results in clinical trials2. Consequently, there is great interest in refining the methods to finally allow reproducible and reliable detection of metastases down to the single cell level in normal tissue. The main focus therefore is on techniques, which allow the detection of tumor cells in vivo, like micro-computer tomography (micro-CT), positron emission tomography (PET), bioluminescence or fluorescence imaging3,4. We are currently optimizing these techniques for in vivo monitoring of primary tumor growth and metastasis in different osteosarcoma models. Some of these techniques can also be used for ex vivo analysis of metastasis beside classical methods like qPCR5, FACS6 or different types of histological staining. As a benchmark, we have established in the present study the stable transfection or transduction of tumor cells with the lacZ gene encoding the bacterial enzyme &beta;-galactosidase that metabolizes the chromogenic substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-beta-D-galactopyranoside (X-Gal) to an insoluble indigo blue dye7 and allows highly sensitive and selective histochemical blue staining of tumor cells in mouse tissue ex vivo down to the single cell level as shown here. This is a low-cost and not equipment-intensive tool, which allows precise validation of metastasis8 in studies assessing new anticancer therapies9-11. A limiting factor of X-gal staining is the low contrast to e.g. blood-related red staining of well vascularized tissues. In lung tissue this problem can be solved by in-situ lung perfusion, a technique that was recently established by Borsig et al.12 who perfused the lungs of mice under anesthesia to clear them from blood and to fix and embed them in-situ under inflation through the trachea. This method prevents also the collapse of the lung and thereby maintains the morphology of functional lung alveoli, which improves the quality of the tissue for histological analysis. In the present study, we describe a new protocol, which takes advantage of a combination of X-gal staining of lacZ-expressing tumor cells and in-situ perfusion and fixation of lung tissue. This refined protocol allows high-sensitivity detection of single metastatic cells in the lung and enabled us in a recent study to detect "dormant" lung micrometastases in a mouse model13, which was originally described to be non-metastatic14.

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

The novel protocol reported in the present study allows selective detection of lung metastases at single cell resolution in mice by combined in-situ lung perfusion and fixation and X-Gal staining of lacZ-tagged tumor cells.

복합에 의한 마우스의 싱글 셀 해상도에서 폐 Metastases의 향상된 시각화<em&gt;에서 시츄</em폐 조직 및 X-걸의 착색의&gt; 재관류<em&gt; lacZ</em&gt; 태그 종양 세포

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

연구

의학

Perfusion and Inflation of the Mouse Lung for Tumor Histology

The ability to evaluate lung histology is critical for the fields of lung cancer research and cancer metastasis. It is equally important to perform necropsies rapidly and efficiently from studies without sacrificing the quality of the tissues procured. The goal of this protocol is to present a method to rapidly perfuse, inflate, and fix mouse lungs for downstream histological analysis. This method does not standardize lung inflation; thus, it does not require any special procedures or equipment and instead simply instills fixative directly through the trachea following perfusion through the heart. This allows for sufficient estimation of tumor size, histology, and scoring. This also allows for the collection of frozen tissue prior to lung tissue fixation. This method is limited in that it does not allow for later morphometric quantification of the lung; however, it is more than sufficient for lung tumor analysis from genetically engineered mouse models (GEMMs), syngeneic models, as well as xenograft tumor and metastasis studies.

The purpose of this method is to present a simple and efficient method for the perfusion, inflation, and fixation of mouse lungs for the examination of lung tumor pathology and evaluation of metastases to the lung.

종양 연고학을 위한 마우스 폐의 관류 및 인플레이션

The ability to evaluate lung histology is critical for the fields of lung cancer research and cancer metastasis. It is equally important to perform ...

암 연구학

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs. This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the lung, and is therefore often incorporated in studies aimed at studying alveoli. We provide a detailed survival protocol for performing intratracheal instillations in mice. Using this approach, one can target delivery of test solutes or solids (such as lung therapeutics, surfactants, viruses, and small oligonucleotides) into the distal lung. Tracheal instillations may be the preferred methodology, over inhalation protocols that may primarily target the upper respiratory tract and possibly expose the investigator to potentially hazardous substances. Additionally, in using the tracheal instillation protocol, animals can fully recover from the non-invasive procedure. This allows for making subsequent physiological measurements on test animals, or reinstallation using the same animal. The amount of instillate introduced into the lung must be carefully determined and osmotically balanced to ensure animal recovery. Typically, 30-75 &mu;L instillate volume can be introduced into mouse lung.

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs. This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the lung, and is therefore often incorporated in studies aimed at studying alveoli. We provide a detailed survival protocol for performing intratracheal instillations in mice.

마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림

Intratracheal instillations deliver solutes directly into the lungs.  This procedure targets the delivery of the instillate into the distal regions of the ...

생물학

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

동계 쥐 흑색 종 세포의 주입은 폐에서 그들의 전이성 잠재력을 확인하는 방법

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Pre-Conditioning the Airways of Mice with Bleomycin Increases the Efficiency of Orthotopic Lung Cancer Cell Engraftment

Lung cancer is a deadly treatment refractory disease that is biologically heterogeneous. To understand and effectively treat the full clinical spectrum of thoracic malignancies, additional animal models that can recapitulate diverse human lung cancer subtypes and stages are needed. Allograft or xenograft models are versatile and enable the quantification of tumorigenic capacity in vivo, using malignant cells of either murine or human origin. However, previously described methods of lung cancer cell engraftment have been performed in non-physiological sites, such as the flank of mice, due to the inefficiency of orthotopic transplantation of cells into the lungs. In this study, we describe a method to enhance orthotopic lung cancer cell engraftment by pre-conditioning the airways of mice with the fibrosis inducing agent bleomycin. As a proof-of-concept experiment, we applied this approach to engraft tumor cells of the lung adenocarcinoma subtype, obtained from either mouse or human sources, into various strains of mice. We demonstrate that injuring the airways with bleomycin prior to tumor cell injection increases the engraftment of tumor cells from 0-17% to 71-100%. Significantly, this method enhanced lung tumor incidence and subsequent outgrowth using different models and mouse strains. In addition, engrafted lung cancer cells disseminate from the lungs into relevant distant organs. Thus, we provide a protocol that can be used to establish and maintain new orthotopic models of lung cancer with limiting amounts of cells or biospecimen and to quantitatively assess the tumorigenic capacity of lung cancer cells in physiologically relevant settings.

We describe a method to significantly enhance orthotopic engraftment of lung cancer cells into the murine lungs by pre-conditioning the airways with injury. This approach may also be applied to study stromal interactions within the lung microenvironment, metastatic dissemination, lung cancer co-morbidities, and to more efficiently generate patient derived xenografts.

Orthotopic 폐 암 세포 Engraftment의 효율성 증가 사전 조건 Bleomycin와 쥐의 기도

Lung cancer is a deadly treatment refractory disease that is biologically heterogeneous. To understand and effectively treat the full clinical spectrum of ...

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung fixation to produce reliable histological specimens of the lung. Due to the nature of the lung&rsquo;s structural composition, which consists largely of air and tissue, there is a risk that it collapses or deflates during the fixation process. Various lung fixation methods exist, each of which has its own advantages and disadvantages. The lung fixation method presented here utilizes constant pressure to enable optimal tissue evaluation for studies using an emphysematous mouse lung model. The main advantage is that it can fix many lungs with the same condition at one time. Lung specimens are obtained from chronic cigarette smoke-exposed mice. Lung fixation is performed using specialized equipment that enables the production of constant pressure. This constant pressure maintains the lung in a reasonably inflated state. Thus, this method generates a histological specimen of the lung that is suitable to evaluate cigarette smoke-induced mild emphysema.

Presented here is a useful protocol for lung fixation that creates a stable condition for histological evaluate of lung specimens from a mouse model of emphysema. The main advantage of this model is that it can fix many lungs with the same constant pressure without lung collapse or deflation.

마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

<meta charset="utf8"></head><body>형광 현미경 분석을 위한 폐의 곰팡이 포자 국소화 보존

Efficient Method for Imaging Murine Lungs that Preserves Spatial Dynamics of Fungal Spores in the Airways

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and bronchioles, branch until terminating in the alveolar airspace where gas exchange occurs. Infections originating in the bronchioles or alveoli elicit distinct host responses and disease manifestations. Therefore, understanding precisely where spores naturally localize in the lungs, particularly soon after infection, expands opportunities for investigation of host-pathogen interactions. Herein, we detail an in-situ analysis of lungs from mice infected with Coccidioides posadasii cts2/ard1/cts3&#916; arthroconidia. Conventional methods for histological preservation involve liquid inflation of the airways with a fixative solution, which displaces the natural location of aspirated fungal particles, pushing spores from proximal bronchioles to terminal airspaces.
Conversely, this method of air-inflation with blood vasculature perfusion-fixation preserves the physiologic position of fungal spores within the bronchioles. Moreover, we describe a simple approach to cryopreserving, embedding, and imaging lung specimens. We also share high-throughput computational techniques via the open-source QuPath program to analyze the spatial distribution of fungal spores within the lung. The method presented here is simple and quick, requires minimal equipment to perform, and can be easily adapted for use with many respiratory fungal infection models.

<meta charset="utf8"></head><body>기도에서 곰팡이 포자의 공간 역학을 보존하는 쥐 폐를 이미징하는 효율적인 방법

We present a method for a fungal pathogenesis model that preserves the natural positioning of fungal spores in the lung airways for analysis via fluorescent microscopy.

기도에서 곰팡이 포자의 공간 역학을 보존하는 쥐 폐를 이미징하는 효율적인 방법

Fungi infect humans when environmental spores are inhaled into the lungs. The lung is a heterogeneous organ. Conducting airways, including bronchi and ...

면역학 및 감염병학

Using Nicotine in a Silica-Exposed Mouse Model to Promote Lung Epithelial-Mesenchymal Transition

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role of nicotine, the primary addictive ingredient in cigarettes, in silicosis development is unclear. The mouse model employed in this study was simple and easily controlled, and it effectively simulated the effects of chronic nicotine ingestion and repeated exposure to silica on lung fibrosis through epithelial-mesenchymal transition in human beings. In addition, this model can help in the direct study of the effects of nicotine on silicosis while avoiding the effects of other components in cigarette smoke.
After environmental adaptation, mice were injected subcutaneously with 0.25 mg/kg nicotine solution into the loose skin over the neck every morning and evening at 12 h intervals over 40 days. Additionally, crystalline silica powder (1-5 &#181;m) was suspended in normal saline, diluted to a suspension of 20 mg/mL, and dispersed evenly using an ultrasonic water bath. The isoflurane-anesthetized mice inhaled 50 &#181;L of this silica dust suspension through the nose and were awoken via chest massage. Silica exposure was administrated daily on days 5-19.
The double-exposed mouse model was exposed to nicotine and then silica, which matches the exposure history of workers who are exposed to both harmful factors. In addition, nicotine promoted pulmonary fibrosis through epithelial-mesenchymal transformation (EMT) in mice. This animal model can be used to study the effects of multiple factors on the development of silicosis.

This study describes a mouse model to study the synergistic effect of nicotine on the progression of pulmonary fibrosis in experimental silicosis mice. The dual-exposure mouse model simulates the pathological progression in the lung after simultaneous exposure to nicotine and silica. The methods described are simple and highly reproducible.

폐 상피-중간엽 전이를 촉진하기 위해 실리카 노출 마우스 모델에서 니코틴 사용

Smoking and exposure to silica are common among occupational workers, and silica is more likely to injure the lungs of smokers than non-smokers. The role ...

마우스 폐 암 연구에 유용한 점안 및 고정 방법

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기도에서 곰팡이 포자의 공간 역학을 보존하는 쥐 폐를 이미징하는 효율적인 방법

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폐 상피-중간엽 전이를 촉진하기 위해 실리카 노출 마우스 모델에서 니코틴 사용