עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע רוסי, להעניק אין. 14-50-00060 ו LLC RUSCHEMBIO. עבודה זו נתמכה גם על ידי Crohn`s ו קוליטיס קרן של אמריקה להעניק 294,083 (כדי AVT), ועל ידי NIH מענק RO1 DK47700 (כדי CJ).

מחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם המכון הלאומי הנחיות בריאות אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש של המכון טרודו. 8-12 בן שבוע C57BL / 6 עכברים שימשו במחקר. 1. הכנה לקראת ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לעקר מכשירי ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן מערכת הרדמה מבוסס isoflurane עם חרטומו, ואת משטח לוהט. ודא משטח מחומם לא יתר על המידה (&lt;39 ºC). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי מכל הדחת גז isoflurane ממוקם כראוי על מנת להבטיח את יציאות פליטה בתחתית המכל אינם חסומים או מאפיל בכל דרך. לשקול מיכל הדחה גז לפני הליך ומשקל מסמך על המכל. בטל מכל כאשר משקל מכל עולה על 50 גרם של משקל שנצבר (~ 12 שעות). </li></ol> 2. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכבר עם 3% isoflurane בתא אינדוקציה (1 ליטר / דקהO 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת עומק ההרדמה על ידי חוסר יכולת להישאר זקוף, אובדן תנועה רצונית תכליתית, אובדן רפלקס מצמוץ, הרפיית שרירים, ואובדן בתגובה רפלקס גירוי (הבוהן או קמצוץ הזנב עם לחץ חזק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הערכת קצב הנשימה ואת דפוס ידי התבוננות דופן בית החזה ותנועות בטן. בהרדמה אופטימלית, קצב הנשימה צריך להיות ~ 55-65 נשימות לדקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר עכבר מאולם האינדוקציה ובמהירות לגלח את אזור הבטן של העכבר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע התייבשות קרנית, למקם משחת עיניים תפל בעיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשים את הסמן על המשטח הלוהט ולחבר אותו באמצעות חרטומו למערכת הרדמה. הפוך קרום חרטומו לטקס בטוח מתאים בחוזקה על הראש של העכבר ואין דליפה של isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקטינים את שיעור isoflurane ל -1.5%, ולהזריק עצירות (0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו קטמין (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) תת עורי כדי למנוע את הרוח של מפל-כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב העור דואר של אזור הפעולה עם מקלון צמר גפן סטרילי ספוג פתרון כירורגי בבטאדין ואחריו אתנול 70%. </li></ol> 3. כירורגיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך פיום בטן סנטימטר באמצע קו 3-5 במספרי הפעלה. כסה את איזור פעולה עם הכרית לא חסיד סטרילי טבול מלוח. לבודד cecum ואת המעי ולחשוף את עורק mesenteric המעולה שימוש צמר גפן טבולה מלוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקל קליפ החלים, לבצע חתכים קטנים לפדר סביב עורק mesenteric המעולה שימוש איריס בסדר scissors.To לעשות זאת, בעדינות להרים את המעי עם מלקחי הלבשה וחותך לפדר משני צידי עורק mesenteric המעולה במיקום קליפ הרצוי (איור 1A). לאחר מכן, להוסיף כמה טיפות של תמיסת מלח סטרילית לאזור על מצב קליפ רצוי לפני היישום קליפים. הערה: כדי לבצע את ניתוח הדמה, בצע את הליך כירורגי עד שלב 3.2. אין ליישם קליפים. במקום זאת, לשמור על רקמות לחות על ידי ים חמים הוסיףאלין כמתואר 3.6 עבור שעה 1. לאחר מכן, המשך לשלב 4.1, </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסום את סניפי ממדרגה ראשונה של העורק mesenteric מעולה עם קליפים כלי הדם (כוח 70 גרם) באמצעות applier קליפ כדי ליצור אזור ס&quot;מ 5-7 של מעי איסכמי סמוך cecum (איור 1B). למרות המיקום של הכלי הוא שמרני, ייתכן שיש שינויים קלים בין עכברים (ראה דוגמאות על איור 1). לכן, 2 או 3 קליפים בדרך כלל נדרשים (לראות את המיקום של קליפים על איור 1 א, ד, ה, חיצים שחורים). הערה: השתמש קליפים כלי באיכות גבוהה. קליפים לחץ גבוה יכול לפגוע בכלי ולמנוע התחדשות ואילו קליפים בלחץ נמוך (&lt;30 גרם) לא יכול לחסום את זרימת הדם לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חסום זרימת דם בטחונות דרך המעי באמצעות שני קליפים כלי דם על פני כלי (40 כוח ג&#39;י), demarking באזור מעי איסכמי (איור 1). ספיגה של כלי בטחונות נדרשהלמנוע אספקת דם מכלי דם סמוכים (לראות את המיקום של קליפים על איור 1 א, ד, ה, חצים ירוקים). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: הוסף פתרון הפרין (6 יחידות USP / מ&quot;ל), כדי למנוע קרישת דם. Dropwise להוסיף 0.5 מיליליטר של תמיסת הפרין אל המעי המבודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי כרית לא חסיד לחים עדינים עם מי מלח מחומם מראש ל 37 מעלות צלזיוס, החלימו על תחום כירורגים. ודא כי מגבונים נשארים רטובים במהלך ההליך כולו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על איסכמיה במשך 60 דקות באמצעות 1-1.5% הרדמה isoflurane לאורך כל הדרך. אם הליך איסכמיה מבוצע כהלכה, באזור איסכמי ישתנה לאדום יין בצבע ב כ 30 דקות. שים לב כלי דם דיסטלי לתפקיד קליפ מוגדל במהלך איסכמיה (איור 1, לוחות מימין) המציין חסימה מוצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקוב מקרוב אחר העכבר בשלב איסכמיה. תמשיך לחול תמיסת מלח כדי לרפד לא חסיד המכסה את אתר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סימן<html> את הקצוות של האזור איסכמי ידי pipetting 20 μl של hematoxylin Gill`s 3 על הרקמה כדי להקל קצירת רקמה איסכמית רקמה בריאה סמוכים מאותו עכבר להשוואה (איור 1E, פאנל מימין). </li></ol> 4. שלב reperfusion <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף של איסכמיה להוסיף כמה טיפות של תמיסת מלח על האזור קליפ בעדינות להסיר קליפים כלי הדם עם applier קליפ. ואז, בעדינות לדחוף את המעי חזרה אל חלל הבטן באמצעות עצות צמר גפן טבולה מלוחות. הסר כרית לא חסיד ולסגור את דופן הבטן ואת העור באמצעות קליפים הפצע נירוסטה 9 מ&quot;מ. אם reperfusion מבוצע יותר מ -3 שעות, השתמש תפר vicryl נספגים לסגור את דופן הבטן לפני יישום קליפים פצע על העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על עכברים בכלוב נקי מחומם עבור פרק הזמן הרצוי (30 דק &#39;, 60 דק&#39;, 120 דק &#39;, או 180 דקות) עבור השלב reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק חיות לפחות כל 30 דקות כדי להבטיח יציבות. </li></ol>class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Necropsy והקציר של המעי הדק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים על ידי ה- CO 2 ממנת יתר ואחריו נקע בצוואר הרחם בזמן הרצוי הבאים reperfusion. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח חלל הבטן לאסוף את רקמת המעי איסכמי לניתוח נוסף. קציר נורמלי בריאות רקמות סמוכות הרקמות הפגועות בקרתי פנימי לחשבון לכל תגובה מערכתית בכל נוגע לפגיעה. הערה: בקרה זה מתאימה יותר מאשר אחיזת העיניים המופעלות עכברים שליטים כי עכברי דמה מופעל אינם עוברים תגובה מערכתית בכל הנוגע לפגיעה נגרמת IR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף היטב את תוכן המעי באמצעות מזרק 30 מ&quot;ל עם מחט gavage מצורף מלא מלוחים ואז לחתוך את המעי longitudinally. אם מדגם של מעי נדרש עבור ניתוח ביטוי גנים, לחתוך שבר 1.5 מ&quot;מ אורכים, ולהשתמש חתיכת נותרים לניתוח היסטולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח היסטולוגית, להכין רולדה בעזרת זוג מלקחיים כדי לגלגל את intestine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשמור על הצורה התגלגלה, למקם את החלקים של מעי בין כריות קצף ביופסית קלטות רקמה (איור 2). מניח את הקלטות בפורמלין 10% שנאגרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמה בפורמלין hr 24 לפחות. חלף פורמלין עם אתנול 70% עבור 24 שעות נוספות. רקמות חנות באתנול 70% ללא הגבלת זמן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להטביע פרפין, לחתוך 5 סעיפים מיקרומטר ואת הכתם עם באמצעות hematoxylin ו eosin פרוטוקול סטנדרטי (איור 3). </li></ol> 6. ניקוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון הפגיעה בעכברים איסכמיה-רה-פרפוזיה כפי שמסוכם בטבלה 2. בחר שיטת הניקוד המתאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: מחלקים את שדה הראייה לארבעה חלקים מאז חומרת הפגיעה משתנה לאורך כל הקטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את ממוצע הציונים של כל קטע מתוך דפי תווים שהושגו בצורה עיוורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השווה את הכיתה של הרקמה הפגועה בין מקרים ובקרה וכן thדואר ללא פגע רקמות באמצעות מבחן Kruskal-Wallis, ואחריו מבחן ההשוואות המרובה של דאן. </li></ol>

The authors declare no conflict of interest

פיתוח מודלים העכבר של פציעה IR מעיים השתפרו מאוד להבנת המנגנונים של פגיעה ברקמות וסייע בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאל למזער נזק לרקמות 7,9,11,34. השלבים הקריטיים של פרוטוקול זה הם מיצוב נכון של קליפים כלי הדם, עיתוי נכון של הערכה היסטולוגית איסכמיה והתקינה של פ...

המעי רגיש מאוד הפרעה של זרימת הדם הגורמת לנזק איסכמיה ו אפיתל. Reperfusion לאחר איסכמיה מספק מחדש חמצון של רקמות, והוא יכול לקדם פתולוגיה. לכן, פגיעה איסכמיה ו reperfusion מעיים מזוהה עם מגוון רחב של פתולוגיות, כולל דלקת מעי נמקית, דחייה של השתל בהשתלות מעי דק, סיבוכי ניתוח מפרצת אבי העורקים בבטן, מכונת לב-ריאה, ו 1,2 מחלת מעי דלקתית. פגיעה במעיים IR, במיוחד איסכמיה mesenteric חריפה, הוא מצב מסכן חיים וכתוצאה מכך תחלואה ותמותה 3. למרות לא ידוע ולא מובן,-reperfusion איסכמיה של המעי (IR) פציעה הוא חשב להיות קשורה לשינויים החיידקים במעיים כמו גם את הייצור של מינים החמצן מגיב וציטוקינים דלקתיים וכמוקינים 1,4-6. זה מוביל הפעלה של שניהםנייט ומנגנוני החיסון אדפטיבית אשר לקדם 1,7,8 פגיעה דלקת רקמות. במודלים של בעלי חיים הם קריטיים להבנת המנגנונים של פגיעה IR, מאחר שהם מאפשרים gain- קל ניסויים גנטיים הפסד של פונקציה. במודלים של בעלי חיים כמה IR פותחו הכוללים חסימה של כלי דם מלא, איסכמיה זרימה נמוכה, ו מפולח חסימה של כלי דם (שהעיקריים בם פורטו סקירה מקיפה אחרונה 9). איסכמיה מעיים הנגרמת על ידי חסימה של כלי דם מלא של עורק mesenteric המעולה (SMA) היא מודל קל נפוץ של IR בחיות גדולות ומכרסמים 9-11. עם זאת, באזורים שונים של המעי יש רגישות שונה על פשע. בנוסף, המגוון הרחב של חומרי הרדמה, משככי כאבים, טכניקות חסימה בעורק, כמו גם חוסר עקביות משך פגיעת איסכמית תוצאת התאוששות מעלות משתנות של פציעת בלבול הבנתנו את הביולוגיה של IR ברחבי studie המרובהים. טבלה 1 מדגים סתירות אלה במחקרים IR בעכברים. החסרון הגדול ביותר מהשימוש פעמים איסכמי קצרות (30-45 דקות) הוא מיקוד החלון של התאוששות שעליו הבדלים להבחין בין מקרים ובקרות ניתן לצפות. פציעה קלה עד האפיתל עשויה להיפתר שעה לאחר רה-פרפוזיה, ולכן התמחתה מדדי פתולוגיים שיידרשו כדי למצוא הבדלי שבת אפיתל. לעומת זאת, נזק מוגזם, כפי שניתן לראות על ידי 100 דקות של פגיעה איסכמית עלול לגרום denudement שלם של האפיתל, שם השבת כבר אי אפשר, להגדיל את שיעור התמותה, וזמן ההתאוששות. לכן, כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של IR מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה שלנו. מודל זה של פציעת IR במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

<table><tbody><tr><td>Heated Pad</td><td>Sunbeam</td><td>E12107-819</td><td>Alternative: Braintree Scientific heated pad</td></tr><tr><td>Table top research anesthesia Machine</td><td>Vasco</td><td>UCAP 0001-0000171</td><td>Alternative: Parkland Scientific, V3000PS</td></tr><tr><td>Nose Cone</td><td>Parkland Scientific</td><td>ARES500</td><td></td></tr><tr><td>Scavenger canister and replacement cartridge</td><td>Parkland Scientific</td><td>80000, 80120</td><td></td></tr><tr><td>Induction Chamber</td><td>Surgivet</td><td>V711802</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>NDC 66794-013-10</td><td>Controlled substance, contact IACUC</td></tr><tr><td>Animal clipper&amp;nbsp;</td><td>Oster&amp;nbsp;</td><td>Oster Golden A5 078005-050-003</td><td></td></tr><tr><td>Ophthalmic ointment</td><td>Webster</td><td>8804604</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>McKesson</td><td>562766</td><td>Controlled substance,contact IACUC</td></tr><tr><td>Ketaset (Ketamine HCl)</td><td>Pfizer</td><td>NADA 45-290</td><td>Controlled substance, contact IACUC</td></tr><tr><td>Cotton tips</td><td>Puritan medical products</td><td>806-WC</td><td>Autoclave before use</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Products</td><td>67618-150-17</td><td>10% Povidone-Iodine</td></tr><tr><td>Sterile saline solution</td><td>Aspen</td><td>46066-807-60</td><td>Adjust to room temperature before use</td></tr><tr><td>IR rodent thermometer</td><td>BIOSEB</td><td>BIO-IRB153</td><td></td></tr><tr><td>Micro vascular clips, 70 g</td><td>Roboz Surgical&amp;nbsp;</td><td>RS5424, RS5435</td><td>Alternative: WPI 14121, for SMA occlusion</td></tr><tr><td>Micro vascular clips, 40 g</td><td>Roboz Surgical&amp;nbsp;</td><td>RS6472</td><td>Alternative:WPI 14120, for collateral vessels occlusion</td></tr><tr><td>Clip applying forceps</td><td>World Precision Instruments</td><td>14189</td><td>Alternative: Roboz #RS-5410 or&amp;nbsp; #RS-5440</td></tr><tr><td>Gill&#039;s 3 hematoxylin</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-390-17</td><td></td></tr><tr><td>Surgical staples, Reflex 9 mm</td><td>Cell Point Scientific</td><td>201-1000</td><td></td></tr><tr><td>Autoclip applier</td><td>Beckton Dickinson</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>Byopsy foam pad</td><td>Simport</td><td>M476-1</td><td></td></tr><tr><td>Tissue cassette</td><td>Fisher Healthcare</td><td>15182701A</td><td>Histosette II combination lid and base</td></tr><tr><td>10% buffered formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Surgical iris scissors</td><td>World Precision Instruments</td><td>501263-G SC</td><td>Alternative: Roboz RS6816</td></tr><tr><td>Operating scissors</td><td>World Precision Instruments</td><td>501219-G</td><td>Alternative: Roboz RS6814</td></tr><tr><td>Dressing forceps</td><td>Roboz Surgical&amp;nbsp;</td><td>RS-5228, RS-8122</td><td>Alternative: World Precision Instruments 1519-G</td></tr><tr><td>Heparin, endotoxin free, 300 USP units/vial, 50 mg</td><td>Sigma</td><td>2106</td><td></td></tr><tr><td>Reflex wound clip removing forceps</td><td>Roboz Surgical&amp;nbsp;</td><td>RS-9263</td><td>Alternative: World Precision Instruments: 500347</td></tr><tr><td>Mice C57BL/6J mice&amp;nbsp;</td><td>Jackson Laboratory</td><td>Stock No 0664</td><td></td></tr><tr><td>Telfa non-adherent dressings, 3 x 4, sterile</td><td>Coviden</td><td>1050</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand transfer pipets</td><td>Fischer Scientific</td><td>13-711-5AM</td><td>Use pipets to dropwise add saline</td></tr></tbody></table>

murine model of intestinal ischemia-reperfusion injury

איסכמיה מעיים הוא מצב מסכן חיים הקשורים מגוון רחב של מצבים רפואיים, כולל טרשת עורקים, פקקת, תת לחץ דם, דלקת מעי נמקית, השתלת מעי, טראומה ודלקת כרונית. פציעה איסכמיה-רה-פרפוזיה מעיים (IR) היא תוצאה של איסכמיה mesenteric חריפה, הנגרמת על ידי זרימת דם מספקת דרך כלי mesenteric, וגרמו נזק מעיים. Reperfusion איסכמיה הבאים יכולים להחמיר נזק של המעי. המנגנונים של פגיעת IR הם מורכבים לא ידועים ולא מובנים. לכן, במודלים של בעלי חיים קטנים ניסיוניים הם קריטיים להבנת הפתופיזיולוגיה של פציעת IR לבין ההתפתחות של טיפולים חדשניים. כאן אנו מתארים במודל עכבר של פגיעה IR חריפה במעי המספק פגיעה לשחזור של המעי הדק ללא תמותה. זו מושגת על ידי איסכמיה התרמה באזור של מעי דיסטלי ידי זמנית occluding ענפים בטחונות הפריפריה הטרמינל של עורק mesenteric המעולה במשך 60 דקות באמצעות קטעי כלי דם. Reperfusion עבור שעה 1, או 2 שעות לאחר תוצאות פגיעות פגיע לשחזור של המעי נבדק על ידי ניתוח היסטולוגית. עמדה הנכונה של קליפים כלי הדם היא קריטית עבור ההליך. לכן את הסרטון ממחיש באופן חזותי מפורט צעד אחר צעד תיאור של הטכניקה הזו. מודל זה של פציעת IR במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

אנחנו מותאמים פרוטוקול הניסוי של ניתוח IR להשיג פגיעה לשחזור IR מושרה של המעי בעכברים. נציג תוצאות מודגמות בסעיף זה. איור 1 מציג דוגמאות של עמדת קליפים כלי דם כדי לגרום איסכמיה של המעי הע...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury at JoVE.com

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

murine-model-of-intestinal-ischemia-reperfusion-injury

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

19.4K Views.  Trudeau Institute.  כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים ...

Video: Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ischemia and reperfusion. Immune response includes cytokine expression and release or secretion of endogenous ligands of innate immune receptors. Activation of innate immunity can potentially modulate infarct size. We have modified an existing murine closed-chest model using hanging weights which could be useful for studying myocardial pre- and postconditioning and the role of innate immunity in myocardial ischemia and reperfusion. This model allows animals to recover from surgical trauma before onset of myocardial ischemia.
Volatile anesthetics have been intensely studied and their preconditioning effect for the ischemic heart is well known. However, this protective effect precludes its use in open chest models of coronary artery ligation. Thus, another advantage could be the use of the well controllable volatile anesthetics for instrumentation in a chronic closed-chest model, since their preconditioning effect lasts up to 72 hours. Chronic heart diseases with intermittent ischemia and multiple hit models are other possible applications of this model.
For the chronic closed-chest model, intubated and ventilated mice undergo a lateral blunt thoracotomy via the 4th intercostal space. Following identification of the left anterior descending a ligature is passed underneath the vessel and both suture ends are threaded through an occluder. Then, both suture ends are passed through the chest wall, knotted to form a loop and left in the subcutaneous tissue. After chest closure and recovery for 5 days, mice are anesthetized again, chest skin is reopened and hanging weights are hooked up to the loop under ECG control.
At the end of the ischemia/reperfusion protocol, hearts can be stained with TTC for infarct size assessment or undergo perfusion fixation to allow morphometric studies in addition to histology and immunohistochemistry.

Surgical trauma induces an inflammatory response. Cytokines and endogenous ligands are known to modulate myocardial infarct size following ischemia and reperfusion. We present a modified closed-chest model of murine ischemia and reperfusion using hanging weights to minimize effects of thoracotomy.

דגם Murine סגור החזה של איסכמיה של שריר הלב reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce multiple tissue and organ damage. Despite recent advances and therapeutic approaches, the overall morbidity has remained unsatisfactory especially in patients with underlying parenchymal abnormalities. In the context of aggressive cancer growth and metastasis, surgical I/R is suspected to be the promoter regulating tumor recurrence. This article aims to describe a clinically relevant murine model of liver I/R and colorectal liver metastasis. In doing so, we aim to assist other investigators in establishing and perfecting this model for their routine research practice to better understand the effects of liver I/R on promoting liver metastases.

We describe in detail a clinically relevant colorectal cancer liver metastases (CRLM) tumor model and the influence of liver ischemia reperfusion (I/R) in tumor growth and metastasis. This model can help to better understand the mechanisms underlying surgery-induced promotion of liver metastatic growth.

מודל מורנה של גידולים גרורות בכבד בהגדרה של איסכמיה Reperfusion פציעה

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Cancer Research

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Intestinal Stem Cell Isolation and Culture in a Porcine Model of Segmental Small Intestinal Ischemia

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ischemia, when the blood supply and therefore oxygen is decreased to the intestine. This leads to intestinal barrier loss and damage to the underlying tissue. Intestinal stem cells reside at the base of the crypts of Lieberk&#252;hn and are responsible for intestinal renewal during homeostasis and following injury. Ex vivo cell culture techniques have allowed for the successful study of epithelial stem cell interactions by establishing culture conditions that support the growth of three-dimensional epithelial organ-like systems (termed "enteroids" and "colonoids" from the small and large intestine, respectively). These enteroids are composed of crypt and villus-like domains and mature to contain all of the cell types found within the epithelium. Historically, murine models have been utilized to study intestinal injury. However, a porcine model offers several advantages including similarity of size as well as gastrointestinal anatomy and physiology to that of humans. By utilizing a porcine model, we establish a protocol in which segmental loops of intestinal ischemia can be created within a single animal, enabling the study of differing time points of ischemic injury and repair in vivo. Additionally, we describe a method to isolate and culture the intestinal stem cells from the ischemic loops of intestine, allowing for the continued study of epithelial repair, modulated by stem cells, ex vivo.

This protocol will enable readers to successfully establish a porcine model of segmental intestinal ischemia and subsequently isolate and culture intestinal stem cells for the study of epithelial repair following injury.

בידוד תאי המעי ותרבות במודל של חזירי של סגמנטלי איסכמיה במעיים קטן

Intestinal ischemia remains a major cause of morbidity and mortality in human and veterinary patients. Many disease processes result in intestinal ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

מודל עכבר יעיל של פגיעה חד-צדדית באיסכמיה-רפרפוזיה של הכליה

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of heart reflow and induce secondary myocardial injury. A simple and reproducible model of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury is a good tool for researchers. Here, a customizable method to create a myocardial infarction (MI) model and MIRI by precision ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD) through micromanipulation is described. Accurate and reproducible ligature positioning of the LAD helps obtain consistent results for heart injury. ST-segment changes can help to identify model accuracy. The serum level of cardiac troponin T (cTnT) is used to assess the myocardial injury, cardiac ultrasound is employed to evaluate the myocardial systolic function, and Evans-Blue/triphenyl tetrazolium chloride staining is used to measure infarct size. In general, this protocol reduces procedure duration, ensures controllable infarct size, and improves mouse survival.

Here we describe a simple and reproducible method that can induce myocardial infarction or myocardial ischemia-reperfusion injury in mice by precision ligation of the left anterior descending coronary artery through micromanipulation.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

מודל מכרסם של פגיעה איסכמיה-רפרפוזיה במעי באמצעות חסימה של העורק המזנטרי העליון

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...

מודל עכברי לחקר איסכמיה ריאתית-פגיעה ברפרפוזיה

Murine Left Pulmonary Hilar Clamp Model of Lung Ischemia Reperfusion Injury

Ischemia reperfusion injury (IRI) during lung transplantation is a major risk factor for post-transplant complications, including primary graft dysfunction, acute and chronic rejection, and mortality. Efforts to study the underpinnings of IRI led to the development of a reliable and reproducible mouse model of left lung hilar clamping. This model involves a surgical procedure performed in an anesthetized and intubated mouse. A left thoracotomy is performed, followed by careful lung mobilization and dissection of the left pulmonary hilum. The hilar clamp involves reversible suture ligation of the pulmonary hilum with a slipknot, which stops the arterial inflow, venous outflow, and airflow through the left mainstem bronchus. Reperfusion is initiated by careful removal of the suture. Our laboratory uses 30 min of ischemia and 1 h of reperfusion for the experimental model in the current investigations. However, these time periods can be modified depending on the specific experimental question. Immediately prior to sacrifice, arterial blood gas can be obtained from the left ventricle after a 4 min period of right hilar clamping to ensure that the PaO2 values obtained are attributed to the injured left lung alone. We also describe a method to measure cell extravasation with flow cytometry, which involves intravenous injection of a fluorochrome-labeled antibody specific for the cell(s) to be studied prior to sacrifice. The left lung can then be harvested for flow cytometry, frozen or fixed, paraffin-embedded immunohistochemistry, and quantitative polymerase chain reaction. This hilar clamp technique allows for&#160;detailed study of the cellular and molecular mechanisms underlying IRI. Representative results reveal decreased left lung oxygenation and histologic evidence of lung injury following hilar clamping. This technique can be readily learned and reproduced by personnel with and without microsurgical experience, leading to reliable and consistent results and serving as a widely adoptable model for studying lung IRI.

מחבר זרקור: תובנות לגבי ההשפעה של איסכמיה רפרפוזיה על השתלת ריאות

The protocol outlines a feasible, reliable, and reproducible method of left pulmonary hilar clamping that can be used to study lung ischemia-reperfusion injury in mouse models.