Notre recherche est centrée sur nos manchons d’expansion intestinale et nos manchons d’expansion vaginale, qui fournissent tous deux une force distraite dont il a été démontré qu’elle allonge considérablement les canaux intestinaux et vaginaux. Nous espérons optimiser nos dispositifs avec l’ajout de produits thérapeutiques à base de protéines pour aider à minimiser l’inflammation et la fibrose locales suite au déploiement de ces dispositifs. En liant ces agents thérapeutiques directement à nos dispositifs, nous pouvons contourner la nécessité d’une administration systémique ciblant directement nos zones d’intérêt avec une dose localisée.
Cette localisation permettra de réduire le dosage des médicaments, de diminuer le risque d’effets secondaires systémiques et de réduire le coût des traitements. À l’avenir, nous voulons déterminer le taux de libération de ces thérapies à base de protéines qui sont liées à nos dispositifs recouverts de PVA, ce qui sera nécessaire pour déterminer les dosages de médicaments pour différents types de traitements. Pour commencer, préparez la solution d’alcool polyvinylique à 5 % ou de PVA en ajoutant cinq grammes de PVA dans 100 millilitres d’eau déminéralisée.
Mélanger le mélange sur une plaque chauffante pour faciliter la dissolution. Ensuite, préparez le milligramme par millilitre de solution de peptide 2 de type glucagon ou de GLP-2 en ajoutant un milligramme de GLP-2 dans un millilitre d’eau déminéralisée. Pré-contractez les manchons d’expansion intestinale et les manchons d’expansion vaginale sur une pipette en verre, en stabilisant les extrémités avec des pipettes en plastique coupées bien ajustées autour de la pipette et des manchons en verre.
Peignez les manchons pré-contractés avec la solution PVA à 5 % à l’aide d’un petit pinceau. Laissez sécher les manches à température ambiante pendant 10 minutes entre chaque couche. Une fois que la cinquième couche est sèche, placez les manchons pré-contractés dans un dessiccation sous une capuche de sécurité chimique.
Ajoutez trois millilitres de glutaraldéhyde à 25 % et trois millilitres d’acide sulfurique à 94 à 98 % dans des béchers ouverts séparés dans le dessiccateur pour permettre la réaction de la vapeur et réticuler les membranes PVA sur les manchons. Après une réticulation pendant 48 heures, retirez les manchons de la chambre et laissez le glutaraldéhyde s’évaporer pendant 15 minutes. Pipetez 50 microlitres de solution GLP-2 sur chaque manchon réticulé pour une utilisation ultérieure.
Pour faire la courbe standard du GLP-2 liée au PVA, pipetez 50 microlitres de PVA à 5 % sur le fond de 18 puits d’une plaque à 24 puits. Laissez six puits vides pour contenir les manchons d’expansion intestinale et les manchons d’expansion vaginale avec trois puits pour chaque type de dispositif. Laissez la couche de PVA sécher pendant la nuit dans un four à 120 degrés Celsius.
Le lendemain, placez la plaque à 24 puits dans une dessiccation sous une hotte de sécurité chimique. Ajoutez trois millilitres de glutaraldéhyde à 25 % et trois millilitres d’acide sulfurique à 94 à 98 % dans des béchers ouverts séparés à l’intérieur du dessiccateur pour permettre la réaction de vapeur et réticuler les membranes PVA sur la plaque à 24 puits. Après 48 heures de réticulation, retirez la plaque à 24 puits du dessiccateur et laissez le glutaraldéhyde s’évaporer pendant 15 minutes.
Ensuite, créez un gradient de concentration en ajoutant 250, 150, 25 et zéro microlitre d’un milligramme par millilitre de solution de GLP-2 dans leurs puits étiquetés respectifs. Ensuite, placez les manchons d’expansion intestinale et vaginale enrobés de médicament dans leurs puits respectifs. Après avoir ajouté la concentration respective de GLP-2 et les manchons d’expansion intestinale et les manchons d’expansion vaginale enrobés de médicament dans les puits, réfrigérez la plaque à 24 puits pendant la nuit à quatre degrés Celsius pour permettre la liaison du médicament.
Le lendemain, ajoutez deux millilitres d’un milligramme par millilitre de lait en poudre dans une solution de blocage d’eau déminéralisée dans chaque puits pendant une heure. Après le blocage, lavez chaque puits trois fois avec du PBS pendant cinq minutes par lavage. Préparez la solution d’anticorps anti-GLP-2 de lapin en ajoutant 40 microlitres d’anticorps anti-GLP-2 de lapin dans 50 millilitres d’eau déminéralisée.
Ensuite, ajoutez deux millilitres de la solution d’anticorps dans chaque puits de la plaque. Réfrigérez l’assiette toute la nuit à quatre degrés Celsius. Le lendemain, lavez chaque puits trois fois avec du PBS pendant cinq minutes par lavage.
Préparez la solution d’anticorps secondaires de phosphatase alcaline IgG anti-lapin en ajoutant 20 millilitres d’anticorps dans 40 millilitres d’eau déminéralisée. Ajoutez deux millilitres de la solution secondaire d’anticorps dans chaque puits et incubez à température ambiante pendant deux heures. Après avoir lavé les puits avec du PBS, ajoutez deux millilitres de substrat de micro-puits bleu de phosphatase alcaline dans chaque puits et incubez pendant 20 minutes.
Pendant l’incubation, surveillez la réaction lorsque la solution change de couleur du jaune au bleu. Arrêtez la réaction en pipetant 200 microlitres de la solution de chaque puits dans une plaque de 96 puits étiquetée. Lisez la plaque à 96 puits à l’aide d’un lecteur de microplaques à absorbance à une longueur d’onde de 620 nanomètres.
Générez la courbe standard et calculez la concentration de GLP-2 sur les manchons revêtus de PVA. La concentration de GLP-2 des manchons d’expansion intestinale et des dispositifs d’expansion vaginale est en moyenne de 22,69 microgrammes par centimètre carré, ce qui est similaire à la concentration dans les puits de 50 microgrammes de la plaque à 24 puits avec 23,7 microgrammes par centimètre carré.
