Araştırmam kronik öksürüğe odaklanıyor. Öksürüğün patofizyolojisini anlamak için, çalışmalarım anahtar faktör seviyelerindeki değişiklikleri doğrulamak için test örnekleri gerektirdi. Farelerden doku örnekleri toplamak için standart prosedürler oluşturmayı hedefliyorum.
Öksürük aşırı duyarlılığı genellikle viral bir enfeksiyon tarafından tetiklenir. İlk kez, viral enfeksiyonun akciğerdeki T lenfositlerinden interferon-gama salınımını arttırırken öksürük aşırı duyarlılığını tetikleyebileceğini bulduk. Kronik öksürüğü olan hastaların çoğunda, hava yollarını ve akciğerleri etkileyen bir dizi uyarana karşı artan nöral duyarlılık ile karakterize öksürük aşırı duyarlılığı vardır.
Gelecekte, öksürük aşırı duyarlılığına katkıda bulunan periferik ve merkezi süreçlere odaklanacağız. Başlamak için, öksürük tespitinden sonra derin anestezi uygulanmış H1N1 ile enfekte olmuş fareyi alın ve göz yörüngelerinden kan toplayın. Kan pıhtılaşmasını önlemek için kan ve antikoagülanı tamamen karıştırmak için kan alma tüpünü sallayın.
Daha sonra, toplanan kanı 800 G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüj edin. Süpernatanı toplayın ve saklayın. Peletleri bir mililitre D-Hank çözeltisinde yeniden süspanse edin.
Hücre profillerini belirlemek için 10 mikrolitre kan hücresi süspansiyonunu bir cam slayt üzerine yayın. Dalağı toplamak için farenin göğsünü açın, sol kulak kepçesini çıkarın ve ardından pulmoner ve sistemik dolaşımı beş mililitre normal salin ile perfüze edin. Cerrahi forseps kullanarak, tüm dalağı fareden çıkarın.
Şimdi, dalağın ağırlığını ölçün. Dalağı ikiye bölün. Histopatolojik analiz için ilk yarıyı oda sıcaklığında% 4 paraformaldehit ile sabitleyin.
Sitokin ölçümü için ikinci yarıyı eksi 80 santigrat derecede saklayın. Bronkoalveoler lavaj sıvısı toplanması için, sağ ana gövde bronşunda bağlanarak sağ akciğeri ayırın. Bronkoalveoler lavaj sıvısını 0.5 mililitre PBS ile üç kez lavaj yaparak sol akciğerlerden toplayın.
Santrifüj, dört santigrat derecede beş dakika boyunca 800 G'de bronkoalveoler lavaj sıvısını topladı. Ardından, süpernatanı toplayın. Peleti 200 mikrolitre PBS'de tekrar süspanse edin.
Bir sayma slaytı kullanarak, bronkoalveoler lavaj sıvısındaki lökositleri sayın. Hücre profillerini diferansiyel sayımlarla belirlemek için, 50 mikrolitre hücre süspansiyonunu cam slaytlara sürün ve kurumasını bekleyin. Hematoksilen eozin ile boyamadan önce slaydı gece boyunca %4 paraformaldehit ile sabitleyin.
Bronkoalveoler lavaj sıvısı toplandıktan sonra, histopatolojik analiz için sağ akciğer ve trakeanın yarısını çıkarın ve %4 paraformaldehit ile sabitleyin. Diğer yarısını western blotting, RT-qPCR ve enzime bağlı immünosorbent testi için eksi 80 santigrat derecede saklayın. H1N1 virüsü enfeksiyonu, fare akciğerlerinde ödem ve birçok lenfosit ve nötrofil infiltrasyonu dahil olmak üzere inflamatuar değişikliklere neden oldu.
H1N1 virüsü enfeksiyonu, kirpik dökülmesi ve inflamatuar hücre infiltrasyonları dahil olmak üzere fare trakealarında inflamatuar değişikliklere neden oldu. H1N1 virüsü enfeksiyonu, farelerde beyaz pulpa alanının tüm dalak alanına oranını önemli ölçüde artırdı ve dalağın beyaz pulpasında lenfositler birikti.
