Merhaba, ben Dr.Jihad, Center P Lab Direktörüyüm. Bu videonun bugünkü amacı, kuşgözü izolasyon tesisinde kullanılan ve hücrelerin geri kazanılmasında çevreye hiçbir etkisi olmayan uyarlanmış bir soğutulmuş hücre işlemcisini göstermektir. Hafif ve ağır yoğunluk gradyanlarını ve hücre işlemci kitini dört santigrat derecede önceden soğutarak başlayın.
Ardından, hücre işlemcisini 45 dakika önceden soğutarak hazırlayın. Standart etanol soğutmalı çift cidarlı gradyan yapıcı için ön soğutmalı hücre işlemci kitini hücre işlemcisine yerleştirin. İki cam hazneyi bağlayın ve manyetik bir karıştırma üzerine yerleştirin Clamp boruyu iki hazne arasında. Serin.
Soğuduktan sonra sıfır santigrat derecede etanol sirkülasyonlu soğutucuya sahip gradyan üreticisi. Torbanın altındaki hazneyi 130 mililitre ağır yoğunluk gradyanı ile doldurmak için pompa hızını dakikada 150 mililitreye ayarlayın. Ağır gradyan torbaya girdikten sonra, kanama durdurucuyu iki oda arasında kapatın.
Daha sonra ön behere 130 mililitre yüksek yoğunluklu ve arka behere 140 mililitre düşük yoğunluklu gradyan ekleyin. Kanama durdurucuyu iki hazne arasına sıkıştırın, ardından iki hazne arasında sürekli bir gradyan oluşturmak için dakikada 50 mililitrelik bir pompa hızı ayarlayın. Daha sonra, kan bankası tarafından sağlanan tam kan atığı ürünlerinden toplanan çok sayıda havuzlanmış anonim Buffy ceketten saflaştırma için insan mononükleer buffy ceket hücrelerini hazırlayın.
Ayrıldıktan sonra, dakikada 25 mililitreye ayarlanmış bir peristaltik pompa kullanarak bir transfer torbasında 95 mililitre yüksek yoğunluklu gradyan ortama düşük yoğunluklu mononükleer hücre süspansiyonuna benzeyen beş mililitre özgül ağırlık ekleyin. Önceden kalibre edilmiş bir termo prob kullanarak önceden oluşturulmuş gradyanı 30 mililitre mononükleer hücre süspansiyonu ile üstten yükleyin. Sürekli. Steril bir termo proba bağlı dijital bir termokupl kullanarak hücre işlemcisinin içindeki sıcaklığı ölçün.
İşlem sırasında gradyanların ve hücrelerin sıcaklığını izleyin. Gradyan yüklemesinin sonunda, rotor tarafından üretilen ısıyı en aza indirmek için hücre işlemcisini 537 G'ye ayarlayın. Hidrolik sistemin çalışma öncesi seviyelere dönmesini ve havayı serbest bırakmasını sağlamak için hücre işlemcisini kapatın.
Ardından hücre işlemcisini 537 G'de yeniden başlatın ve dakikada 50 mililitre akış hızında ve 4,3 santigrat derece akış hızında sürekli bir yoğunluk gradyanı oluşturmak için 130 mililitre ağır ve 140 mililitre düşük yoğunluklu gradyan ekleyin. Daha sonra, dakikada 25 mililitre akış hızında ve altı santigrat derece olan bir yük yoğunluğu gradyanının üzerine 30 mililitre Buffy coat cell süspansiyonu yükleyin. Hücre yüklendikten sonra, beş dakika sonra hücre işlemcisine 50 mililitre yıkama solüsyonu ekleyin.
Bükülmüş gradyanı dakikada 100 mililitre akış hızında 12 şişede ve biri 100 mililitre yıkama ortamı ve 150 mililitre hücre içeren beş santigrat derece doldurma tüpünde toplayın. Daha sonra iki ila 12 arasındaki tüpleri 225 mililitre yıkama ortamı ve 25 mililitre hücre ile doldurun. Temiz oda ortamında, C sınıfı ve B sınıfı havadaki partikül değerlendirmesi, temiz oda, GMP derece C, derece B ve BSL üç standardına göre 0,5 ve beş mikron havadaki partikül fazlalığı olmadığını göstermiştir.
İlk dört adımda gradyan sıcaklıklarında önemli bir fark gözlenmedi ve her iki işlemci de yaklaşık 4,5 santigrat dereceyi korudu. Bununla birlikte, santrifüjlemeden sonra ve toplama adımları sırasında, her iki işlemci için de toplama adımlarının başında ve sonunda sıcaklık yükseldi. Ayrıca, soğutulmuş hücre işlemcileri insan hücresinin saflaştırılması üzerinde etkilidir.
Santrifüj sonrası etkinlik ve canlılık belirlendi. Toplanan hücrelerin sıcaklığı hafifçe 8.5 santigrat dereceye yükseldi. Aktif hava örneklemesi ve sterilite taraması büyüme göstermedi.
