Bu protokol, düz kas hücrelerinin ve pasif matrisin katkısını aydınlatan üreme organlarının biaksiyel mekanik özelliklerini inceler. Bu teknik, organ geometrisi ve doğal düz kas hücresi matris etkileşimleri basınç ve eksenel uzantıları fizyolojik bir dizi için organın öznel izin korur. Fizyolojik olarak ilgili yükler altında organ biaksiyel fonksiyonunun araştırılması, üreme patolojilerinin etyolojisinin daha iyi anlaşılmasına yardımcı olabilir.
Biaksiyal serviks ve vajina test kadın sağlığı ve biyomekanik alanları içine fikir sağlar. Benzer yöntemler kan damarları, yemek borusu ve kalın bağırsakları incelemek için kullanılmaktadır. Yeni bir organla çalışırken, dokuya en iyi nasıl dikiş verilebilen veya boşaltılan uzunluğun nasıl belirlenebileceği gibi teknik ayrıntıların sonuçlandırılması zaman alabilir.
Deneysel hayvandan üreme sistemi toplamak için, bir kesme mikroskobu altında emici bir ped üzerinde fare yerleştirin ve karın etrafında deri kaldırmak için açılı cımbız ve makas kullanın. Karın kemiğinin üstündeki karın tabanında karın kas duvarını delmeyecek kadar sığ bir kesi yapın ve kesiyi göğüs kafesine doğru ve karın kaslarının derinliklerine doğru üstün bir şekilde devam edin. Yüzeysel yağ çıkardıktan sonra ve dikkatle kasık symphysis kestikten sonra, gerginlik oluşturmak ve vajinadan çevre doku ayırmak için künt diseksiyon kullanmak için mesane kavramak için düz cımbız kullanın.
Sonra vücut boşluğundan dokuları kaldırmak için üreme sisteminin tabanını kesti. Hasat edilen sistem için uygun büyüklüktekan belirlendikten sonra, servikal tarafı kanülasyon cihazının kuvvet transdüser kısmına monte edin ve cihazın mikrometre kısmına organın karşı ucunu monte edin. Sonra dikişile her iki ucunu sıkın.
Monte edilen dokunun boşaltılan uzunluğunu bulmak için, önce duvarı germek için organı gerin. Vajina için, vajinal duvarda oluklar gözlemlemek. Serviks için, merkezi serviks işaretinin üstünde ve altında bulunan mürekkep noktalarının hemen altından kesin.
Sistemin dikişten dikişe kadar olan uzunluğunu ölçmek ve miyograf sisteminin basıncını sıfırdan 10 milimetreciciye çıkarmak için kaliperler kullanın. Organın artık çökmediği basınç, belirli bir basınçta dış çaptaki en büyük sıçrama olarak belirlenebilir. Basınç ve dış çapı kaydettikten sonra, bu verileri organın çökmediği ilk nokta olarak not edin ve kuvveti sıfıra indirdi.
Deneysel in vivo streç bulmak için, boşaltılmış basınç sırasında tahmini in vivo uzunluğuna organı ayarlayın ve boşaltılmış basınçtan maksimum basınca kadar değişen basınç değerleri için basınç karşı kuvvet değerlerini değerlendirmek için tıklayın. Ardından dur'u tıklatın ve dosyayı kaydedin. Basınç çapı ön koşullandırmaiçin basıncı sıfır milimetre cıvaya, deney in vivo uzunluğuna kadar uzunluğa ve degradeyi saniyede 1,5 milimetre civaya ayarlayın.
Sıfır milimetreciciden maksimum basınca ve boşaltılmış basınca basıncı alan bir dizi çalıştırın, 30 saniye tutun ve ek bir 30 saniyelik bekleme süresiyle sıfır milimetreciciye geri döner. Bu sırayı toplam beş döngü boyunca yineledikten sonra, durdur'u tıklatın ve dosyayı kaydedin. Kuvvet uzunluğu ön koşullandırması için, maksimum basıncın 1/3'ünü ve hem giriş hem de çıkış basınçları için boşaltılmış basıncı girin ve organı in vivo uzunluğunun eksi %2'sine ayarlayın.
Başlat'ı tıklatın ve uzunluğu artı %2'ye ayarlayın ve saniyede 10 mikrometre hızında eksi %2'ye geri dönün. Dur'u tıklatıp dosyayı kaydetmeden önce eksenel uzantıyı toplam beş döngü boyunca yineleyin. In vivo uzunluğubasınç çapı test için, başlat'a tıklayın ve in vivo uzunluğuna org ayarlamak, cıva sıfır milimetre basınç ayarlamak ve saniyede cıva 1,5 milimetre degrade ayarlayın.
Basıncı sıfır milimetreciden maksimum basınca yükseltin ve basıncı 20 saniyelik tutma süresiyle sıfır milimetreciciye indirin. Daha sonra sistemi durdurmadan ve verileri kaydetmeden önce testi beş döngü boyunca tekrarlayın. Maksimum basıncın 1/3'ünün kuvvet uzunluğu ve boşaltılmış basıncın 1/3'ü için basıncı ve boşaltılmış basıncın 1/3'ünü ayarlayın ve organı in vivo uzunluğunun eksi %2'sine ayarlayın.
Start'ı tıklattıktan sonra, organı in vivo uzunluğunun artı %2'sine ve saniyede 10 mikrometre lik bir hızla in vivo uzunluğunun eksi %2'sine geri uzatın. Daha sonra sistemi durdurmadan ve verileri kaydetmeden önce testi toplam üç döngü boyunca tekrarlayın. Son testten sonra, KRB test ortamını çıkarın ve organı kalsiyumsuz KRB ortamı ile yıkayın.
Yıkamadan sonra, tedavi solüsyonunu taze kalsiyumsuz KRB ile değiştirmeden önce organı iki milimolar EGTA ile 30 dakika boyunca takviye edilmiş taze kalsiyumsuz KRB çözeltisi ile kuluçkaya yatırın. Bazal ton testinin tamamlanmasında, basınç çapı ön koşullandırma için, start'ı tıklatın ve basıncı sıfır milimetreciciye, tahmini in vivo uzunluğuna göre uzunluğa ve degradeyi saniyede 1,5 milimetre civaya ayarlayın. Sıfır milimetreciciden maksimum basınca ve sıfır milimetre cıvaya geri götüren bir dizi çalıştırmaya başlayın.
Bu işlemi, 30 saniyelik bekleme süresiyle beş döngü boyunca tekrarlayın. Kuvvet uzunluğu ön koşullandırmaiçin, organı in vivo uzunluğa ayarlayın ve her iki basınç için boşbasıncı el ile girin. Başlat'ı tıklatın ve degradeyi 1,5 milimetreciye ve basıncı maksimumun 1/3'üne ayarlayın.
Organı artı %2'ye kadar uzatın ve saniyede 10 mikrometrede eksi %2'ye geri inin ve döngüyü toplam beş kez tekrarlayın. Basınç çapı testi için, organ ın deneysel olarak belirlenen in vivo uzunluğunun eksi %2'si ve sıfır milimetrecıcıdaki basınçla, sıfır milimetreciciden maksimum basınca ve sıfır milimetre cıvaya geri dönme basıncını başlatın ve artırın. Sıfır milimetrelik cıva adımını 20 saniye tutun ve döngüyü beş kez tekrarlayın.
Kuvvet uzunluğu testi için basıncı nominal bir basınca ayarlayın ve organı in vivo uzunluğunun eksi %2'sine ayarlayın. Organı in vivo uzunluğunun artı %2'sine kadar uzatın ve saniyede 10 mikrometre hızla in vivo uzunluğunun eksi %2'sine geri dön. Toplam üç döngüden sonra, verileri kaydedin ve kuvvet uzunluğu testini maksimum basıncın 1/3'ü, maksimum basıncın 2/3'ü ve maksimum basınçta tekrarlayın.
Kadın üreme organlarının mekanik özelliklerinin başarılı bir analizi için, herhangi bir kusur olmadan vajina rahim boynuzları explant zorunludur. Organ tipine bağlı olarak kanül boyutu değişir. Kanülasyon, organın deney sırasında hareket edememesi için ancak işlem sırasında organın duvarına zarar vermeden yapılmalıdır.
Basınçlı miyograf sistemi mekanik testlerden geçtiği için organın çeşitli yönlerini izlemek için kullanılabilir ve ultrason sistemi bazal tonlu ve bazal tonsuz boş durumdaki organların kalınlığını ölçmek için kullanılabilir. Mekanik testlerden sonra, teğet modüler çevresel ve eksenel yönler için hesaplanabilir. Hem bazal ton testi hem de pasif testler, düz kas hücrelerinin kontraktil katkısı olmadan üreme yollarının önemli mekanik özelliklerini verir.
Organlar arasında ölçekleme serviks ve vajina vivo farklı yükler deneyim olarak protokolleri birkaç ayarlamalar gerektirir. Bu düz kas hücrelerinin canlılığını korumak için hızlı bir şekilde diseksiyon gerçekleştirmek için anahtar ama dikkatle istenilen organ delinme değil. Organın artık gerilişini ölçen açı deneyleri mekanik test işlemlerinin yanı sıra çeşitli histolojik ve biyokimyasal tahlillerden sonra yapılabilir.
Düz kas hücre bazal katkısı gelişimi ve araştırılmasından sonra, bu teknik aynı zamanda fizyolojik olarak ilgili yükler altında üreme sisteminin düz kas maksimum kontraktil yanıt değerlendirilmesi sağlar.
