Biz nazik mükemmel teknik yardım ve destek için Sabine Reckinger teşekkür ederiz.

1. hazırlıklar <ol><li> Örnek koleksiyon Not: Manyetik karıştırıcı yöntemi, tek veya toplanmış kas örnekleri için kullanılabilir. <ol><li> Uygun tercih sitelerinden ve uygun miktarda 9 örnekleri toplamak. Ülke koşullarına veya ICT, OIE veya ISO tavsiyelerine başvurun. <ol><li> Avrupa Birliği için, örneğin, yerli domuz asma kısmına geçişte bir diyafram ayağı 1 gr örnek almak. Tüm kas örnekleri tüm yağ ve fasya serbest olduğundan emin olun. </li></ol></li><li> dil test edilirse, test öncesinde yüzey katmanı kaldırmak. </li><li> Numuneler donmuş, en Trichinella larva dirençli dondurmak ve ölümden sonra çözülmek değil gibi, özen, sindirime daha az dirençlidir ve azalmış tahlil duyarlılık sonuçlanan konteyner duvarları sopa eğilimindedir. Not: Dondurulmuş ise l numune büyüklüğünü iki katınadoğusunda sedimantasyon süresi (aşağıya bakınız) artırmak. </li></ol></li><li> Sindirim sıvısının hazırlanması <ol><li> 3 L&#39;lik bir cam kabın içine 48 ° C - 46 bir ön ısıtmaya tabi musluk suyu 2 L% 25 HCI (16 ± 0.5 mL) ekleyin. eksik sindirim sıcaklık sonuçlarının çok düşük; Bir sıcaklık çok yüksek pepsin enzimatik özellikleri devre dışı bırakır. </li><li> beher içinde, bir karıştırma çubuğu yerleştirin ve önceden ısıtılmış bir plaka çözelti karıştırıldı (46-48 ° C). </li><li> (: 10,000 NF, 1: 12.500 BP, 2000 FIP 1) asidik solüsyona pepsin 10 ± 0.2 g ekleyin. Not: pepsin kalitesi büyük önem ve enzim aktivitesi üretici tarafından tasdik edilmelidir biridir. Laboratuvar Güvenlik nedenlerinden dolayı ve pepsin aktivitesini sürdürmek için, sindirim sıvısı bileşenlerini ekleme sırası bağlı kalınmalıdır. </li></ol></li><li> Kas numune hazırlama <ol><li> bir blender veya öğütücü kas numuneleri 100 g kıymak. Blen kolaylaştırmakding, numunelere 2 ml su önceden ısıtılmış ekleyip 2 maksimum hızda uyum - 3 sn. </li><li> İkinci harmanlama önce, blender açın ve alt ve tekrar karıştırma karıştırma kase kenar marjı üstündeki herhangi bir kas örnek aktarmak. Etin görünür hiçbir parça kalmayıncaya kadar 3 sn - 2 patlamaları ile karıştırma devam edin. Not: Çok az karıştırma eksik sindirim neden olabilir, çok fazla karıştırma örneklerinde 6 Trichinella larva hediyesi zarar verebilir süre. </li></ol></li></ol> 2. Prosedür <ol><li> Kas örnek sindirim <ol><li> bir silindir içine sindirim sıvısının 1 L aktarın. beher içine kıyma aktarın ve bir kaşık ya da çatalla sindirim sıvısı içinde yaymak. İyice 3 L behere önceden ısıtılmış sindirim sıvısı, 500 mL blender kapağı, bıçak ve blender kase durulayın. Not: Eksik durulama sens kaybına neden olabiliriTivity. </li><li> alüminyum folyo ile örtün beher ve 44 sabit bir sıcaklıkta tutmak - 46 ° C ve bir termometre ile izleyin. </li><li> Et parçacıkları kayboluncaya kadar 30 dakika sıçramasına olmadan derin bir girdap oluşturmak için sindirim sıvısı karıştırın. Test et (vahşi hayvanların örneğin et) türüne bağlı olarak, 60 dakika maksimum kadar sindirim süresini uzatır. </li></ol></li><li> Filtrasyon ve sindirim sıvısının sedimantasyon <ol><li> sindirilmemiş doku miktarını belirlemek için, sıfır ölçek ayarlamak Kullanmadan önce elek tartmak ve ağırlığını not edin. Elek temiz ve sedimantasyon huni ulaşan Trichinella larvaları engel olabilecek herhangi bir doku parçacıklarının, yoksun olmalıdır. ayırma hunisi dikey tesviye olup olmadığını kontrol edin. </li><li> Sindirimden sonra, dikkatli bir şekilde ayrılması cam huni içine 180 um&#39;lik bir elekten sindirim sıvısı dökün. Ayırma cam huni genişliği b olmamalıe uzunluğu daha büyük% 55 iyi larva sedimantasyon izin vermek. Herhangi bir taşmasını önlemek için özen gösterin. </li><li> duyarlılık kaybını önlemek için, iyice cam beher ve bir sıkmak yıkama şişesinden musluk suyu yaklaşık 200 mL elek durulayın ve sedimantasyon cam huni içine durulama suyunu aktarın. dikkatle 3 L beher kenarlarını durulama özen gösterin. elek kaldırın ve iyice elek altındaki alanı durulayın. </li></ol></li><li> Sindirilmemiş doku miktarının belirlenmesi Not: Yöntemin uygulanmasında hatalar nedeniyle, kas dokusu iyi fasya ve sindirilemeyen olan bağ dokusu olarak, elek üzerinde kalabilir. sindirilmemiş doku miktarı ilk 10 dakika sedimantasyon adım (2.5 bakınız) sırasında belirlenir. kalıntı su sindirilmemiş doku, belirlenen ağırlığı; etkileyebilir gibi bu elek kuru yaklaşık 30 dakika izin verir. <ol><li> bir ölçekte bir kağıt havlu yerleştirin ve undiges ile elek tartmakted dokular. </li><li> Sindirilmemiş dokularla elek ağırlığı filtrasyon öncesi elek ağırlığının çıkartılması. Başlangıç numune ağırlığının en fazla% 5&#39;ten elek (örneğin, 5 g / 100 g başlangıç maddesi) üzerinde kalır, eğer bir ayrıştırma işlemi tatmin edici olarak kabul edilmektedir. </li><li> sindirilmemiş doku miktarı% 5 aşarsa, taze kas örnekleri kullanarak testi tekrarlayın. Kalan doku ağırlıklı sindirilmemiş kas dokusunun oluşması ve taze örnekleri mevcut değildir durumunda, tekrar sindirilmemiş kalıntıları sindirmek ve özgün örneklerin yanı sıra inceler. </li></ol></li><li> Sindirim sıvısı sedimantasyon <ol><li> 30 dakika boyunca ayırıcı bir huni içinde filtrelendi sindirim sıvısı tutun. Bozulmamış bırakılırsa, Trichinella larvaları huninin alt kısmında çözecek. </li><li> Dondurulmuş numuneler kullanıldığında, 60 dakikalık bir maksimum çökelme süresi artar. </li><li> sedimentasyon tamamlandıktan sonra, tam musluğunu açmakayırma hunisi hızla en az 40 ml sindirim sıvısı izin (kas örnekleri önceden dondurulmuş olsaydı 80 ml) bir ölçüm silindirine kaçıp. </li><li> İlk olarak, silindir içine sıvının yarısı izin sonra tam geçmek sindirim sıvısının 10 mL izin vermek için ters yönde musluğunu açın. Son olarak, başka bir 10 ml ters yönde musluğunu açın. Bu prosedür Trichinella larvaları musluk içinde sıkışıp olmadığını garanti eder. Not: yeterli hızı, hassasiyeti azalan ayırma hunisi içinde kalan larva önlemek için gereklidir. </li></ol></li><li> Silindir sindirim sıvısının sedimantasyon <ol><li> Larvalar çöktürmek için izin vermek için 10 dakika boyunca silindirde tortu bırakın. 10 ml sediment bozmadan bir pipet ile aspirasyon yoluyla 30 ml süpernatantı. </li><li> numune doku liflerinin miktarını azaltmak için, tortu 30 ml musluk suyu ekleyin ve başka bir 10 m bırakınSıvı berrak hale gelene kadar. tekrarlayın. </li><li> Süpernatantı ve 10 ml bir ızgarah Petri kabı veya larva sayım havzasına tortuları yıkanmış aktarın. 10 ml musluk suyu ile silindir durulayın ve ardından numune su ekleyin. Not: Gerekirse örnek döküntü olarak büyük miktarlarda Trichinella larvaları (Şekil 1) belirlenmesini önleyebilir, daha yıkama aşamaları, yapılmalıdır. </li></ol></li><li> Mikroskobik inceleme <ol><li> Hemen yıkama aşamalarından sonra ve numuneler incelemek için 15 20x büyütmede bir trichinoscope veya ayarlanabilir bir yoğunluk alt aşama iletilen ışık kaynağı olan bir stereo-mikroskop kullanarak. </li><li> Gridlenmiş Petri kabı içine numune döküldükten sonra, ızgara tarafından çanak / sistematik havza ızgara inceleyin. Hiçbir şüpheli yapılar bulunursa, yavaşça herhangi Trichinella la izin dairesel bir şekilde Gridlenmiş Petri kabı veya larva sayım havzasında sıvıyı taşımakPotansiyel olarak gözardı rvae, Petri kasesinin ortasına birikir. muayene tekrarlayın. </li><li> Şüpheli bir yapı tespit edilirse, 40 büyütme artırmak - 100X. Bir pipet ile çanak / havzası Trichinella larvaları çıkarın ve% 90 etanol ile bir tüp içine toplayınız. </li><li> tam çanak incelenmiştir sonra, çanak / havzanın nazik sallayarak başlayarak, prosedürü tekrarlayın. en az üç kez veya daha fazla larva kadar aynı işlemi tekrarlayın bulunur. </li><li> larvaların sayısını. kas dokusunun miktarına korelasyon test edilmiş ve gram (lpg) başına larva olarak mevcut. </li><li> çok larvalar güvenilir larva sayısını belirlemek için sindirim sıvısında varsa, ölçüm silindirine larvaları içeren sıvıyı geri dönmek sıkmak yıkama şişesinden musluk suyu ile durulayın ve dibe için larva bırakın. </li><li> 10 dakika sedimentasyon süresinden sonra, belirli bir hacme süpernatant azaltılması (örneğin10 mL) eklenmiştir. kesin hacmini belirlemek için, bir pipet yardımıyla yeni bir silindirin içine süpernatant aktarın. </li><li> dinç sallayarak sıvı içinde homojen larvaları Askıya. çalkalama hareketi sırasında, bir Petri kabı üzerine 20 uL, larva süspansiyon 12 damla ekleyin. </li><li> mikroskopta her damla inceleyin. 240 uL larvaların sayısını belirlemek ve en yüksek ve en düşük sayısını silin. Yüzer toplam hacmine (örneğin 10 mL) larva sayısı tahmin. Not: stereo-mikroskop kalitesi Trichinella larvaların tanımlanması için büyük önem taşımaktadır. </li><li> Larvalar bir pipetle bir tüp içinde toplanan zaman, larvalar pipet duvara sopa yoktu ama tüpüne aktarılır olduğunu dikkatlice kontrol edin. Not: toplanmış örneklerin Olumlu Trichinella bulguları menşe karkas geri havuzundan takip edilmelidir. Pozitif karkas kimliklerini kadar burada, havuz boyutu giderek azaltılmalıdırtified. Örnek büyüklüğü, duyarlılığı artırmak için, bu işlem sırasında artabilir. ortak bir örnek incelenmesi pozitif ya da belirsiz bir sonuç üretir durumunda, bir 20 gramlık bir numune, her domuz alınır. Beş domuz 20 g numuneleri bir araya getirilmiş ve tarif edilen yöntem kullanılarak incelenmiştir. Bu şekilde beş domuz 20 gruplarından örnekleri incelenecektir. Trichinella beş domuz bir havuza numunede tespit edildiğinde, 20 gr örnekleri grubunda bireysel domuzlar toplanan ve menşe olumlu karkas tespit edilinceye kadar ayrı ayrı incelenir. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Gottstein, B., Pozio, E., N&#246;ckler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Diagnosis,+Treatment,+and+Control+of+Trichinellosis.">Epidemiology, Diagnosis, Treatment, and Control of Trichinellosis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 22, 127-145 (2009).</li><li>Pozio, E., Murrell, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematics+and+epidemiology+of+Trichinella.">Systematics and epidemiology of Trichinella.</a> Adv. Parasitol. 63, 367-439 (2006).</li><li>9 CFR Part 318.10 - Prescribed treatment of pork and products containing pork to destroy trichinae. U.S. Government Publishing Office Available from: <a target="_blank" href="https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf">https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf</a> (2012)</li><li>Gamble, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Commission+on+Trichinellosis:+recommendations+on+methods+for+the+control+of+Trichinella+in+domestic+and+wild+animals+intended+for+human+consumption.">International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption.</a> Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).</li><li>Gajadhar, A. A., Forbes, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internationally+recognized+quality+assurance+system+for+diagnostic+parasitology+in+animal+health+and+food+safety,+with+example+data+on+trichinellosis.">An internationally recognized quality assurance system for diagnostic parasitology in animal health and food safety, with example data on trichinellosis.</a> Vet. Parasitol. 103, 133-140 (2002).</li><li>N&#246;ckler, K., Kapel, C. M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Detection+and+surveillance+for+Trichinella:+meat+inspection+and+hygiene,+and+legislation.">Chapter 3, Detection and surveillance for Trichinella: meat inspection and hygiene, and legislation.</a> FAO/WHO/OIE Guidelines for the surveillance, management, prevention and control of trichinellosis. , 69-98 (2007).</li><li>Boch, J., Schnieder, T., Supperer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Veterin&#228;rmedizinische Parasitologie. , (2006).</li><li>Despommier, D. D., M&#252;ller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stichosome+and+its+secretion+granules+in+the+mature+muscle+larva+of+Trichinella+spiralis.">The stichosome and its secretion granules in the mature muscle larva of Trichinella spiralis.</a> J. Parasitol. 62 (5), 775-785 (1976).</li><li>Marucci, G., Interisano, M., La Rosa, G., Pozio, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+nematode+larvae+different+from+those+of+the+Trichinella+genus+detected+by+muscle+digestion.">Molecular identification of nematode larvae different from those of the Trichinella genus detected by muscle digestion.</a> Vet Parasitol. 194, 117-120 (2013).</li><li>Forbes, L. B., Gajadhar, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+validated+Trichinella+digestion+assay+and+an+associated+sampling+and+quality+assurance+system+for+use+in+testing+pork+and+horse+meat.">A validated Trichinella digestion assay and an associated sampling and quality assurance system for use in testing pork and horse meat.</a> J. Food Prot. 62, 1308-1313 (1999).</li><li>Malakauskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+epidemiology+of+Trichinella+spp.+in+three+Baltic+countries:+Lithuania,+Latvia,+and+Estonia.">Molecular epidemiology of Trichinella spp. in three Baltic countries: Lithuania, Latvia, and Estonia.</a> Parasitol. Res. 100 (4), 687-693 (2007).</li><li>Kapel, C. M., Webster, P., Gamble, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+distribution+of+sylvatic+and+domestic+Trichinella+larvae+in+production+animals+and+wildlife.">Muscle distribution of sylvatic and domestic Trichinella larvae in production animals and wildlife.</a> Vet. Parasitol. 132 (1-2), 101-105 (2005).</li><li>Interisano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+latex+agglutination+test+for+the+detection+of+Trichinella+infections+in+pigs.">Validation of a latex agglutination test for the detection of Trichinella infections in pigs.</a> Vet. Parasitol. 194, 121-124 (2013).</li><li>Pozio, E., La Rosa, ., G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-derived+methods+for+the+identification+of+Trichinella+parasites+from+animal+and+human+samples.">PCR-derived methods for the identification of Trichinella parasites from animal and human samples.</a> Methods Mol. Biol. 216, 299-309 (2003).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

manyetik karıştırıcı yöntemi kolayca yapılabilir rağmen, kesinlikle teknik detaylar bağlı kalarak değil, böylece tüketici sağlığını tehlikeye yetersiz duyarlılık yol açar. kritik kontrol noktaları yukarıdaki metinde vurgulanmıştır. Buna ek olarak, uygun ekipman kullanımı test başarılı bir sonuç için çok önemlidir. Tüm kaplar yüzeye larva yapışmayı azaltmak için silikon ile kaplanmış cam ve pipet uçları arasında yapılmalıdır. Sindirim yöntemin duyarlılığı kaslarında larva yoğunluğu ve test edilen kas numunenin miktarına bağlıdır. 3 Bir larva yoğunluğu için - kas dokularının 5 lpg,% 100&#39;lük bir duyarlılık bildirilmiştir, ancak 1 lpg Aşağıdaki duyarlılık% 40 13 düştü. Test edilen bir ev sahibi hayvan türlerine bağlı olarak, test duyarlılığı kullanılan örnek miktarı artırılarak geliştirilebilir. benYaban hayatı nfection yükü dolayısıyla daha büyük örnekler boyutları 14 kullanılır, genellikle düşüktür. Predilection siteleri de ev sahibi hayvanlar arasında değişir. Burada, aynı zamanda daha büyük bir örnek neden olabilir dil dikkate alınması gereken bu gibi kas dokularının alt sindirilebilirliği, 15 boyutları. Bundan başka, manyetik karıştırıcı yöntemi, iç kontrol içermez anlamak önemlidir. Bu nedenle, belgelere örnekleme kalite güvence yönetimi doğru ve kesin sonuçlar elde etmek için esastır. Kas örneklerinde Trichinella larvaları tespit etmek için laboratuvar performansının kalitesi yeterlilik testlerinde her analisti düzenli katılımı ile izlenmelidir. Yöntemin daha fazla sınırlamalar mikroskobu ile kas larvalarının son kimlik aşaması son derece öznel ve hea olduğunu vardırinceleyerek analizci tarafından larva morfolojisi bilgisine vily bağımlı. Bu sorunu aşmak için ilginç bir alternatif yöntem lateks aglütinasyon testi ile larva tespit ardından filtre izolasyonu manyetik karıştırıcı yöntemi / olduğunu. Ancak, AB mevzuatına göre bu yöntem sadece bu tür yaban domuzu 4 yerli domuz değil enfeksiyon riski daha fazladır hayvanlar için et test etmek için eşdeğer olarak kabul edilir. Monoklonal antikorlar ile, larva antijenin belirlenmesi testi daha objektif hale getirir, ancak LABORATUAR et 16 gramı başına larvaların sayısını belirlemek imkan vermemektedir. manyetik karıştırıcı yönteminin daha ileri varyasyonları mekanik destekli havuza örnek sindirim yöntemi / sedimantasyon tekniği, mekanik destekli toplanmış örnek kazı dahilFiltre izolasyon tekniği Sorusuna yöntemi / ve en fazla 35 gr tekniğinin toplanmış numuneler için otomatik sindirim yöntemi. Bu teknikler tüm et ve Trichinella larvaların görselleştirme ve sayma yapay sindirim dayalı, ama filtreleme ve sedimantasyon adımlar için kullanılan ekipman farklılık vardır. Izole edilmiş larva ayrıca bir moleküler test (örneğin, çoklu PCR) 17 tür düzeyinde tespit edilebilir. AB mevzuatına göre, tüm pozitif örnekler Trichinella türleri belirlenmesi için ulusal referans laboratuarına veya EURLP iletilmesi gerekiyor.

Cinsi Trichinella ve Nematodlar dünya çapında etçil ve Hepçil memeliler, kuşlar ve sürüngenlerin çizgili kaslar tespit edilebilir. Bu zoonotik nematodlar domuz, attan insanı ham ya da yarı-çiğ et ve et türevi ürünler ulaşabilir ve av hayvanları yutulur edilir. Bu zoonoz patognomonik belirti ve bulgular, örneğin ishal, ateş, periorbital ödem ve miyalji ve miyokardit, tromboembolik hastalık ve ensefalit 1 olarak olası komplikasyonlar ile karakterize insanlarda ciddi bir hastalık olabilir. Trichinella spiralis vahşi ve evcil hayvanlarda Trichinella enfeksiyonunun en yaygın etiyolojik ajanıdır ve dünya çapında insan enfeksiyonların çoğu neden olur. Avrupa, Kuzey ve Batı Afrika ve Batı Asya&#39;da, Trichinella britovi insan enfeksiyonların kaynağıdır. Buna ek olarak, diğer on takson daha az yaygın etken olarak rapor edilir<html> ve insan hastalığı maddeleri, genellikle, vahşi hayvanlar 2, dünyanın farklı bölgelerinde bulunurlar. Böyle yaban domuzu, ayı, mors ve porsuk gibi yabani hayvanlara ek olarak, domuz dünyada insan enfeksiyonunun en önemli kaynağını oluşturmaktadır. Trişinolozis önlemenin en iyi yolu çiğ et ürünleri yemekten kaçınmaları ve herhangi bir et, güvenli sıcaklıklarda (özellikle oyun eti pişirmek için&gt; 65 ° C 1 dakika boyunca, yani özünde kahverengi pembe et rengini değiştirmek için et ürünü) 3. Avrupa Birliği ve USDA et 4, 5 T. spiralis larvaları öldürmek için kullanılabilir domuz ürünleri dondurma ve pişirme süreleri ve sıcaklıkları belirttiniz. Ayrıca, et ve et ürünlerinde Trichinella inaktivasyonu için önerileri trişinolozis Uluslararası Komisyonu tarafından yayınlanan&quot;xref&quot;&gt; 6. Avrupa&#39;da, Trichinella enfeksiyon riskinin ihmal edilebilir ticari domuz sürüleri kontrollü barınma koşullarının tanıtılması yanında, insan trichinellosisli önlenmesi duyarlı hayvanlardan 4 kas örneklerinin laboratuvar incelemesinde dayanmaktadır. Gıda güvenliği amacıyla, sindirim deneyleri et 3, 7 Trichinella larvaların doğrudan saptanması için tek güvenilir işlemlerdir. Sindirim testinin çeşitli varyasyonlar olsa bile, manyetik karıştırıcı yöntemi uluslararası kabul görmüş referans metot 3, 4, 7. Bu tahlil çizgili kas dokularında Trichinella larvaları tespit dayanmaktadır. Kas örnekleri enzimatik sindirimi ve ardından filtrasyon ve çökelme basamakları, Tri sonrachinella larva mikroskopi ile tanımlanır. ticaret yükümlülükleri ve ulusal mevzuata bağlı olarak, manyetik karıştırıcı yönteminin genel protokolde küçük varyasyonlar çok sayıda vardır. Burada, teknik detaylar AB gereklilikleri 4, ISO özellikleri 8, BİT kurallar 6 ve Parazitler (EURLP) Avrupa Birliği Referans Laboratuvarının tecrübe ve Trichinella Alman Referans Laboratuvarının dayanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Knife, Scissors, Tweezers</td><td></td><td></td><td>Cutting samples and removing non-digestible tissue</td></tr><tr><td>Blender&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>With a sharp chopping blade</td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td></td><td></td><td>With thermostatically controlled heating plate</td></tr><tr><td>Stirring Rod</td><td></td><td></td><td>Teflon-coated, approximately 5 cm long</td></tr><tr><td>Conical glass separation funnel</td><td></td><td></td><td>Capacity of at least 2 L, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation.</td></tr><tr><td>Stands, rings and clamps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sieve</td><td></td><td></td><td>Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td></tr><tr><td>Funnel</td><td></td><td></td><td>Internal diameter not less than 12&amp;nbsp;cm, to support the sieves</td></tr><tr><td>Glass beaker</td><td></td><td></td><td>Capacity 3 L</td></tr><tr><td>Glass measuring cylinder</td><td></td><td></td><td>Capacity 50 to 100 mL, or centrifuge tube</td></tr><tr><td>Stereo-microscope</td><td></td><td></td><td>With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td></td><td></td><td>9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &amp;times; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td></tr><tr><td>Aluminium foil</td><td></td><td></td><td>Alternatively a lid to cover the beakers</td></tr><tr><td>25% hydrochloric acid</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepsin</td><td></td><td></td><td>Strength: 1:10,000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12,500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2,000 FIP (F&amp;eacute;d&amp;eacute;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/mL</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td></td><td></td><td>70-90% ethyl alcohol</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>Heated to 46-48 &amp;deg;C before use</td></tr><tr><td>Balance</td><td></td><td></td><td>Accurate to at least 0.1 g</td></tr><tr><td>Metal tray</td><td></td><td></td><td>Capacity 10 to 15 L, to collect the remaining digestive juice</td></tr><tr><td>Pipettes and pipette holder</td><td></td><td></td><td>Different sizes (1, 10 and 25 mL)</td></tr><tr><td>Thermometer</td><td></td><td></td><td>Accurate to 0.5 &amp;deg;C, temperature range at least from 20 &amp;deg; C to 70&amp;nbsp;&amp;deg;C</td></tr><tr><td>Siphon</td><td></td><td></td><td>For tap water</td></tr></tbody></table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

Trişinolozis insanlarda bir zayıflatıcı bir hastalıktır ve cinsi Trichinella nematod larvaları ile enfekte hayvanların çiğ ya da az pişmiş et tüketiminin neden olur. İnsan enfeksiyonlarının en önemli kaynakları, dünya çapında oyun eti ve domuz eti veya domuz eti ürünlerdir. Birçok ülkede, insan trichinellosisli önlenmesi duyarlı hayvan leşleri kas örneklerinin yapay sindirim yoluyla enfekte hayvanların tanımlanmasında dayanmaktadır. Etin sindirimi ama manyetik karıştırıcı yöntemi altın standart olarak kabul edilir dayalı çeşitli yöntemler vardır. Bu yöntem, kas numuneleri ve müteakip filtrasyon ve çökelme adımları enzimatik sindirimden sonra mikroskop ile Trichinella larva algılanmasını sağlar. Bu yöntem, özel ve pahalı ekipman gerektirmez, ancak, iç kontrol kullanılamaz. Bu nedenle, sıkı kalite yönetimi applie edilmelidirtest boyunca d. Mevcut çalışmanın amacı ayrıntılı talimatlar ve Parazitler Avrupa Birliği Referans Laboratuarı ve Trichinella için Almanya&#39;nın Ulusal Referans Laboratuarı deneyime dayalı analistlere yöntemin, kritik kontrol noktalarını sağlamaktır.

<html> sindirim sonra, enfektif kas larva şekli belirlenmesi daha zor hale değişebilir. Tipik formlar sıkıca sarılmış larvaları hafifçe kıvrılmış larvaları ya da C-şekilli ya da tamamen boş larvalarına (- 2C Şekil 2B) içerir. gramı başına bulunan larva sayısı önemli ölçüde değişebilir ve birkaç yüz larvalarına karşı bir larva arasında olabilir. Enfeksiyon kas larva morfolojisi Şekil 2A&#39;da gösterilmiştir. Uzun 0.7 1.5 mm ve genişliği yaklaşık 0.3 mm Trichinella larvaları vardır. Özofagus dar ve hafifçe yuvarlatılmış uca sahiptir. manikür pürüzsüz. vücut boşluğuna, stichosome ön yarısında, bir yapı 45 55 büyük hücreler (stichocytes) bir sıra ile çevrili uzun ince borunun oluşturduğu, görülebilmektedir. Rektum, 11 herhangi projeksiyonlar olmadan da yuvarlak veya 10 uzantıları. t &quot;&gt; Diğer yapılar, Trichinella larvaları yanı sıra, kas sindirim sonra bulunabilir bazı örnekler Şekil 3A gösterilmiştir -.. 3F Yabani hayvanlar genellikle canlandırılır tarafından eviserasyon sürecinde kontamine diğer parazitler ya da test için kullanılabilir kas örnekleri ile enfekte ya da cansız yapılar / organizmalar. larvaların boyu, anterior ve posterior uçları görünümü ve stichosome yardım oluşumu farklı nematod cins 12 arasında ayrım. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> Şekil 1: (A) Yetersiz ve (B) Yeterli çalkalama Adımlar sonra Trichinella Larva mikroskopik incelenmesi. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">Daha büyük bir ettik görmek için buraya tıklayınız</a>Bu rakamın rsion. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> Şekil 2: Larva (A) Rektum, Stichosome ve yemek borusu Gösterilen Morfoloji Bulaşıcı ve Trichinella Larva. Sindirim gösteren (B) uygulanmasından sonra kas larvaların olası şekilleri sıkıca sarılmış ve hafifçe larvaları ve (C) hareket larvaları çekilerek sarılır. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> Şekil 3: Manyetik Karıştırıcı Yöntemi ile sindirim Kası Örnekleri sonra Rastlantısal Bulguların örnekleri. (A) &#39;nın bir kıl benzer saçyaban domuzu bulunan dünya solucan; (B) yaban domuzu gelen Alaria alata; (C) yaban domuzu kas lifi; (D) Metastrongylus sp. yaban domuzu gelen; Toxocara sp: (E) bitkisel elyaf yaban domuzu (F) bulundu. yaban domuzu gelen larva. Ölçek çubukları 100 um göstermektedir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples at JoVE.com

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Birçok ülkede insan trichinellosisli önlenmesi dünya çapında manyetik karıştırıcı yöntemi altın standart olarak kabul edilen sindirimi, yöntemleri ile duyarlı hayvanlardan kas örneklerinin laboratuvar incelemesinde dayanmaktadır.

Tespiti için Manyetik Karıştırıcı Yöntemi<em&gt; Trichinella</emKas Samples&gt; Larva

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

magnetic-stirrer-method-for-detection-trichinella-larvae-muscle

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

28.6K Görüntüleme.  Federal Institute for Risk Assessment.  Birçok ülkede insan trichinellosisli önlenmesi dünya çapında manyetik karıştırıcı yöntemi altın standart olarak kabul edilen sindirimi, yöntemleri ile duyarlı hayvanlardan kas örneklerinin laboratuvar incelemesinde dayanmaktadır. 

Video: Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. Infective eggs are given by oral gavage, hatch in the distal small intestine, invade the intestinal epithelial cells (IECs) 
that line the crypts of the cecum and proximal colon and upon maturation the worms release eggs into the environment1. This model is a powerful tool to 
examine factors that control CD4+ T helper (Th) cell activation as well as changes in the intestinal epithelium. The immune response that occurs in 
resistant inbred strains, such as C57BL/6 and BALB/c, is characterized by Th2 polarized cytokines (IL-4, IL-5 and IL-13) and expulsion of worms while Th1-associated 
cytokines (IL-12, IL-18, IFN-&gamma;) promote chronic infections in genetically susceptible AKR/J mice2-6. Th2 cytokines promote physiological changes in 
the intestinal microenvironment including rapid turnover of IECs, goblet cell differentiation, recruitment and changes in epithelial permeability and smooth muscle 
contraction, all of which have been implicated in worm expulsion7-15. Here we detail a protocol for propagating Trichuris muris eggs which can 
be used in subsequent experiments. We also provide a sample experimental harvest with suggestions for post-infection analysis. Overall, this protocol will provide 
researchers with the basic tools to perform a Trichuris muris mouse infection model which can be used to address questions pertaining to Th proclivity in 
the gastrointestinal tract as well as immune effector functions of IECs.

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris infection is an intestinal model of Th2 immunity where resistant mice generate a protective Th2 response and susceptible mice generate a pathological Th1 response.

Trichuris muris Enfeksiyon: Gut Tip 2 Bağışıklık ve İnflamasyon Bir Model

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous mycotoxins in food commodities. In this protocol we show how to fabricate and interrogate an electrochemical competitive Enzyme linked immunomagnetic assay based on the use of magnetic beads as solid support for the immunochemical chain3 and screen printed electrodes as sensing platform.
Our method aims to determine the total amount of HT-2 and T-2 toxins, mycotoxins belonging to the trichothecenes family and of great concern for human health4. The use of an antibody clone with a cross reactivity of 100% towards HT-2 and T-2 allows to simultaneously detect both toxins with similar sensitivity5.
The first step of our assay is the coating step where we immobilize HT2-KLH conjugate toxin on the surface of magnetic beads. After a blocking step, necessary to avoid non-specific absorptions, the addition of a monoclonal antibody allows the competition between immobilized HT-2 and free HT-2 or T-2 present in the sample or dissolved in a standard solution.
At the end of the competition step, the amount of monoclonal antibody linked to the immobilized HT-2 will be inversely proportional to the amount of toxin in the sample solution.
A secondary antibody labeled with alkaline phosphatase (AP) is used to reveal the binding between the specific antibody and the immobilized HT-2. The final measurement step is performed by dropping an aliquot of magnetic bead suspension, corresponding to a specific sample/standard solution, on the surface of a screen-printed working electrode; magnetic beads are immobilized and concentrated by means of a magnet placed precisely under the screen-printed electrode. After two minutes of incubation between magnetic beads and a substrate for AP, the enzymatic product is detected by Differential Pulse Voltammetry (DPV) using a portable instrument (PalmSens) also able to initiate automatically eight measurements within an interval of few seconds.

ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

A protocol to detect trichothecenes (mycotoxins of concern for human health) using a newly developed screening method based on a competitive immunochemical method and a final electrochemical detection is demonstrated.

Mikotoksin Algılama ELIME (Enzim İmmüno Manyetik Elektrokimyasal Bağlantılı) Yöntem

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous ...

Biyoloji

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, the muscle stem cell is activated and undergoes cell proliferation to generate a pool of myoblasts, which subsequently differentiate to form new muscle fibers. In many muscle wasting conditions, including muscular dystrophy and ageing, this process is impaired resulting in the inability of muscle to regenerate. The process of muscle regeneration in zebrafish is highly conserved with mammalian systems providing an excellent system to study muscle stem cell function and regeneration, in muscle wasting conditions such as muscular dystrophy. Here, we present a method to examine muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease. The first step involves the use of a genotyping platform that allows the determination of the genotype of the larvae prior to eliciting an injury. Having determined the genotype, the muscle is injured using a needle stab, following which polarizing light microscopy is used to determine the extent of muscle regeneration. We therefore provide a high throughput pipeline which allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

Skeletal muscle regeneration is driven by tissue resident muscle stem cells, which are impaired in many muscle diseases such as muscular dystrophy, and this results in the inability of muscle to regenerate. Here, we describe a protocol that allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

Kas Hastalığının Zebra Balığı Modellerinde Kas Yenilenmesinin İncelenmesi

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

Gelişim Biyolojisi

Intramuscular Injections Along the Motor End Plates: A Minimally Invasive Approach to Shuttle Tracers Directly into Motor Neurons

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the development of several animal models of these neuromuscular disorders has provided the scientific community with different therapeutic scenarios aimed at delaying or reversing the progression of these conditions. By taking advantage of the retrograde machinery of neurons, one of these approaches has been to target skeletal muscles in order to shuttle therapeutic genes into corresponding spinal cord motor neurons. Although once promising, the success of such gene delivery approach has been hampered by the sub-optimal number of transduced motor neurons it has so far shown to yield. Motor end plates (MEPs) are highly specialized regions on the skeletal musculature that are in direct synaptic contact to the spinal cord &#945; motor neurons. In this regard, it is important to note that, so far, the efforts to retrogradely transfer genes into motor neurons were made without reference to the location of the MEP region in the targeted muscles. Here, we describe a simple protocol 1) to reveal the exact location of the MEPs on the surface of skeletal muscles and 2) to use this information to guide the intramuscular delivery and subsequent optimal retrograde transport of retrograde tracers into motor neurons. We hope to utilize the results from these tracing experiments in further studies into investigating retrograde transport of therapeutic genes to spinal cord motor neurons through the targeting of MEPs.

The efficacy of intramuscular uptake and retrograde transport of molecules to corresponding motor neurons depends on the location of the injection sites with respect to the motor end plates (MEPs). Here, we describe how to locate MEPs on skeletal muscles to optimise retrograde transport of tracers into motor neurons.

Motor End Plates boyunca İntramüsküler Enjeksiyonlar: Doğrudan Motor Nöronlar içine Servis Tarayıcıları Bir Minimal İnvaziv Yaklaşım

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the ...

Nörobilim

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in communication with the epidermal cells they innervate and thus their analysis benefits from in situ visualization of both neuronally and epidermally expressed proteins by immunofluorescence. Traditional methods of preparing larval fillets for immunofluorescence experiments leave intact the muscle tissue that covers most of the body wall, presenting several challenges to imaging neuronal and epidermal proteins. Here we describe a method for removing muscle tissue from Drosophila larval fillets. This protocol enables imaging of proteins that are otherwise obscured by muscle tissue, improves signal to noise ratio, and facilitates the use of super-resolution microscopy to study da neuron development.

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Studies of neuronal morphogenesis using Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons benefit from in situ visualization of neuronal and epidermal proteins by immunofluorescence. We describe a procedure that improves immunofluorescence analysis of da neurons and surrounding epidermal cells by removing muscle tissue from the larval body wall.

Kaldırılması<em&gt; Drosophila</emDuyu Nöronlar ve Epidermal Hücre İmmünofloresan Analizi Larvaların Fileto dan&gt; Kas Dokusu

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional measures of muscle health. In this video article, we demonstrate a method to measure force generation during contraction of zebrafish larval trunk muscle. Force measurements are accomplished by placing an anesthetized larva into a chamber filled with a salt solution. The anterior end of the larva is tied to a force transducer and the posterior end of the larva is tied to a length controller. An isometric twitch contraction is elicited by electric field stimulation and the force response is recorded for analysis. Force generation during contraction provides a measure of overall muscle health and specifically provides a measure of muscle function. Although we describe this technique for use with wild-type larvae, this method can be used with genetically modified larvae or with larvae treated with drugs or toxicants, to characterize muscle disease models and evaluate treatments, or to study muscle development, injury, or chemical toxicity.

Force measurements can be used to demonstrate changes in muscle function due to development, injury, disease, treatment or chemical toxicity. In this video, we demonstrate a method to measure force during a maximal contraction of zebrafish larval trunk muscle.

Zebra balığı Larva kas fonksiyonu değerlendirmek için daralma sırasında Kuvvet Ölçümü

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Single Myofiber Isolation and Culture from a Murine Model of Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy in Early Post-Natal Development

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate filament proteins that sustain the nuclear envelope and the components of the nucleoplasm. We recently reported that muscle wasting in EDMD can be ascribed to intrinsic epigenetic dysfunctions affecting muscle (satellite) stem cells regenerative capacity. Isolation and culture of single myofibers is one of the most physiological ex-vivo approaches to monitor satellite cells behavior within their niche, as they remain between the basal lamina surrounding the fiber and the sarcolemma. Therefore, it represents an invaluable experimental paradigm to study satellite cells from a variety of murine models. Here, we describe a re-adapted method to isolate intact and viable single myofibers from post-natal hindlimb muscles (Tibialis Anterior, Extensor Digitorum Longus, Gastrocnemius and Soleus). Following this protocol, we were able to study satellite cells from Lamin &#916;8-11 -/- mice, a severe EDMD murine model, at only 19 days after birth.
We detail the isolation procedure, as well as the culture conditions for obtaining a good amount of myofibers and their associated satellite-cells-derived progeny. When cultured in growth-factors rich medium, satellite cells derived from wild type mice activate, proliferate, and eventually differentiate or undergo self-renewal. In homozygous Lamin &#916;8-11 -/- mutant mice these capabilities are severely impaired.
This technique, if strictly followed, allows to study all processes linked to the myofiber-associated satellite cell even in early post-natal developmental stages and in fragile muscles.

Here, we propose a method to efficiently obtain single muscle fibers at early post-natal developmental stages from homozygous mutant Lamin &#916;8-11 mouse model, a very severe model for Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD).

Erken Doğum Sonrası Gelişimde Emery-Dreifuss Musküler Distrofi'nin Murine Modelinden Tek Miyofiber İzolasyon ve Kültür

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate ...

Tıp

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial respirometric assays from isolated mitochondrial preparations allow for the assessment of mitochondrial function, as well as determination of the mechanism(s) of action of drugs and proteins that modulate metabolism. Current isolation procedures often require large quantities of tissue to yield high quality mitochondria necessary for respirometric assays. The methods presented herein describe how high quality purified mitochondria (~ 450 &#181;g) can be isolated from minimal quantities (~75-100 mg) of mouse skeletal muscle for use in high throughput respiratory measurements. We determined that our isolation method yields 92.5&#177; 2.0% intact mitochondria by measuring citrate synthase activity spectrophotometrically. In addition, Western blot analysis in isolated mitochondria resulted in the faint expression of the cytosolic protein, GAPDH, and the robust expression of the mitochondrial protein, COXIV. The absence of a prominent GAPDH band in the isolated mitochondria is indicative of little contamination from non-mitochondrial sources during the isolation procedure. Most importantly, the measurement of O2 consumption rate with micro-plate based technology and determining the respiratory control ratio (RCR) for coupled respirometric assays shows highly coupled (RCR; &#62;6 for all assays) and functional mitochondria. In conclusion, the addition of a separate mincing step and significantly reducing motor driven homogenization speed of a previously reported method has allowed the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle that results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

Here, we present a modification of a previously reported method that allows for the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle. This procedure results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

Yüksek Verimli Mikroplate Solunum Ölçümler için Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen Mitokondri İzolasyonu

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Drosophila Nöromüsküler Kavşaklarda ve Kas Hücrelerinde Mikrotübül Ağlarının Görüntülenmesi

Using Drosophila Larval Neuromuscular Junction and Muscle Cells to Visualize Microtubule Network

The microtubule network is an essential component of the nervous system. Mutations in many microtubules regulatory proteins are associated with neurodevelopmental disorders and neurological diseases, such as microtubule-associated protein Tau to neurodegenerative diseases, microtubule severing protein Spastin and Katanin 60 cause hereditary spastic paraplegia and neurodevelopmental abnormalities, respectively. Detection of microtubule networks in neurons is advantageous for elucidating the pathogenesis of neurological disorders. However, the small size of neurons and the dense arrangement of axonal microtubule bundles make visualizing the microtubule networks challenging. In this study, we describe a method for dissection of the larval neuromuscular junction and muscle cells, as well as immunostaining of &#945;-tubulin and microtubule-associated protein Futsch to visualize microtubule networks in Drosophila melanogaster. The neuromuscular junction permits us to observe both pre-and post-synaptic microtubules, and the large size of muscle cells in Drosophila larva allows for clear visualization of the microtubule network. Here, by mutating and overexpressing Katanin 60 in Drosophila melanogaster,&#160;and then examining the microtubule networks in the neuromuscular junction and muscle cells, we&#160;accurately reveal the regulatory role of Katanin 60 in neurodevelopment. Therefore, combined with the powerful genetic tools of Drosophila&#160;melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

Yazar Spotlight: Drosophila nöromüsküler kavşaklarında mikrotübül ağını anlamak 

Here, we present a detailed protocol to visualize the microtubule networks in neuromuscular junctions and muscle cells. Combined with the powerful genetic tools of Drosophila melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule-dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

Tespiti için Manyetik Karıştırıcı Yöntemi

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler