우리는 친절 우수한 기술 지원 및 지원 사빈 Reckinger 감사합니다.

1. 준비 <ol><li> 시료 채취 주 : 교반기 방법은 하나 또는 풀링 근육 샘플을 사용할 수있다. <ol><li> 적절한 취향 사이트로부터 적당량 (9)을 채취. 국가의 요구 사항 또는 ICT, OIE 또는 ISO의 권고 사항을 참조하십시오. <ol><li> 유럽 ​​연합 (EU)의 경우, 예를 들어, 돼지의 힘찬 부분으로의 전환에 다이어프램 기둥에서 1g의 샘플을 채취. 모든 근육 샘플 모든 지방과 근막이 없는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 혀가 테스트되는 경우, 테스트 이전에 표층 제거. </li><li> 샘플을 냉동하는 경우 가장 선모충의 유충이 내성 동결과 죽음 이후 풀다하지 않는 한,주의, 소화에 덜 내성 및 감소 분석 감도의 결과로, 컨테이너 벽에 집착하는 경향이있다. 참고 : 냉동 경우, 리터에서 표본의 크기를 두 배로동쪽으로는 침전 시간 (아래 참조) 증가. </li></ol></li><li> 분해 액의 제조 <ol><li> 3 L의 유리 비커에 48 °의 C - 46로 예열 수돗물의 2 L에 25 % 염산 (16 ± 0.5 mL의)를 추가합니다. 불완전 분해의 온도 결과에 너무 낮다; 온도가 너무 높은 펩신의 효소 속성을 비활성화합니다. </li><li> 비커에 교반 봉을 놓고 예열 접시에 용액을 교반 (46-48 °에 C를). </li><li> (10,000 NF, 1 : 12,500 BP, 2000 FIP 1) 산성 용액에 펩신의 10 ± 0.2 g을 추가합니다. 참고 : 펩신의 품질은 가장 중요하고 효소 활성이 생산자에 의해 인증을 받아야이다. 실험실 안전을 위해 및 펩신 활성을 유지하기 위해 분해 액 성분의 첨가 순서에 부착되어야한다. </li></ol></li><li> 근육 샘플 준비 <ol><li> 믹서 나 분쇄기에 근육 샘플 100g까지 들어온다. BLEN 용이하게하기 위해땡은 샘플을 2 mL의 물을 예열 추가하고 2 최대 속도로 혼합 - 3 초. </li><li> 제 블렌딩 전에 믹서를 열고 바닥 반복 블렌딩 블렌딩 그릇 에지 가장자리의 상단에있는 근육 샘플 옮긴다. 고기의 눈에 보이는 조각이 남아 있지 않을 때까지 3 초 - 2 버스트 혼합을 계속합니다. 참고 : 너무 작은 혼합이 불완전한 소화 될 수 있습니다, 너무 많이 혼합이 샘플 6에서 선모충의 유충 존재를 손상시킬 수있다. </li></ol></li></ol> 2. 절차 <ol><li> 근육 샘플 소화 <ol><li> 실린더로 소화 유체의 1 L를 전송합니다. 비커에 다진 고기를 전송하고 숟가락 또는 포크 소화 유체에 보급. 철저 3 L 비커로 예열 소화 액 500 mL로 믹서 뚜껑, 블레이드 및 믹서 그릇을 씻어. 참고 : 불완전한 세척은 SENS의 손실이 발생할 수 있습니다itivity. </li><li> 알루미늄 호일로 비커를 덮고 (44)의 일정한 온도 유지 - 46 °의 C 및 온도계를 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 고기 입자가 사라질 때까지 30 분 튀는없이 깊은 소용돌이를 생성하는 소화 액체를 저어. 시험 고기 (야생 동물의 고기 등)의 종류에 따라, 60 분의 최대까지 소화 시간을 증가시킨다. </li></ol></li><li> 여과 및 소화 유체의 침강 <ol><li> 소화 조직의 양을 결정하기 위해 0으로 스케일을 조정 사용 전에 자체 무게 및 중량을 참고. 체는 깨끗하고 침강 깔때기에 도달하는 선모충의 유충을 방해 할 수있는 조직 입자의 결여해야한다. 분리 깔때기 수직 수평되어 있는지 확인합니다. </li><li> 소화 후, 조심스럽게 분리 된 유리 깔때기에 180 ㎛의 체를 분해 액을 붓는다. 분리 된 유리 깔때기의 폭 ㄴ 안된다전자 길이보다 큰 55 %는 좋은 유충 침강을 허용합니다. 어떤 오버 플로우를 방지하기 위해주의하십시오. </li><li> 감도의 손실을 방지하기 위해 철저하게 유리 비커와 스퀴즈 세척 병 수돗물의 약 200 mL를 체를 씻어 침강 유리 깔때기로 헹굼 물을 전송합니다. 조심스럽게 3 L 비커의 가장자리를 씻어주의하십시오. 체를 들어 올리고 철저하게 자체에서 영역을 씻어. </li></ol></li><li> 소화 조직 량의 결정 주 : 상기 방법의 실행에서의 오류로 인해, 근육 조직이 잘 근막과 소화되어 결합 조직으로, 체 상에 남아있을 수있다. 소화 조직의 양은 제 10 분간 침강 단계 (250 참조) 동안 결정된다. 잔류 물이 소화되지 않은 조직의 결정 무게에 영향을 미칠 수 있기 때문에 이것은 자체 건조하는 약 30 분을 할 수 있습니다. <ol><li> 규모에 종이 타월을 배치하고, undiges으로 자체 무게테드 조직. </li><li> 소화되지 않은 조직으로 자체 중량에서 여과하기 전에 자체 무게를 뺍니다. 시작 샘플 중량의 5 % 이하가 자체 (즉, 5g / 100g 원료)에 남아있는 경우, 분해 과정은 양호한 것으로 간주된다. </li><li> 소화 조직의 양이 5 %를 초과하는 경우, 새로운 근육 시료를 사용하여 시험을 반복한다. 나머지 조직은 주로 소화 근조직 이루어지는 신선한 샘플을 사용할 수없는 경우, 다시 소화 남아 다이제스트 원래 샘플에 부가 조사한다. </li></ol></li><li> 소화 유체의 침전 <ol><li> 30 분 동안 분별 깔대기에서 여과 소화 유체를 유지한다. 그대로두면 선모충의 유충은 깔때기의 바닥에 정착됩니다. </li><li> 냉동 된 샘플을 사용하는 경우, 60 분간 최대 침강 시간을 증가시킨다. </li><li> 침전이 완료되면 완전히 콕을 열고분액 깔때기의 신속 적어도 40 mL를 소화 유체의리스 (근육 샘플 이전에 냉동 있었다면 80 mL)을 메스 실린더로 도망. </li><li> 먼저, 실린더에 유체의 절반을 허용하고 완전히 통과 분해 액 10 ㎖를 허용하도록 반대 방향 스톱 콕을 열어. 마지막으로, 또 다른 10 ㎖에 대한 반대 방향 스톱 콕을 열어. 이 절차는 선모충의 유충이 꼭지에 갇혀되지 않도록합니다. 주 : 충분한 속도 감도를 감소 분액 깔대기에 남아있는 유충을 피하기 위해 필요하다. </li></ol></li><li> 실린더 내 소화 유체 침강 <ol><li> 유충은 침전 수 있도록 10 분 동안 실린더 내의 퇴적물을 남겨주세요. 10 ML의 침전물을 방해하지 않고 피펫으로 흡입하여 30 mL의 상층 액을 제거합니다. </li><li> 시료의 조직 섬유의 양을 줄이기 위해, 침전물을 30 mL의 수돗물을 추가하고 다른 10m 떠날액체가 분명하다 때까지. 반복합니다. </li><li> 상층 액을 제거하고 10 ㎖가 그리드 화 페트리 접시 또는 애벌레 계산 유역에 침전물을 세척 전송합니다. 10 ML의 수돗물 실린더를 씻어 후 시료에 물을 추가합니다. 주 : 필요한 경우 시료 파편으로 다량의 선모충 유충 (도 1)의 식별을 방지 할 수 있으며, 상기 세척 단계가 수행되어야한다. </li></ol></li><li> 현미경 검사 <ol><li> 즉시 세척 단계 후 샘플을 검사 15 20 배 배율에서 trichinoscope 또는 조정 강도의 하위 단계 전송 광원과 스테레오 현미경을 사용합니다. </li><li> 격자 페트리 접시에 샘플을 주입 한 후 그리드에 의해 요리 / 체계적으로 분지 그리드를 검사합니다. 아무 의심 구조가 발견되지 않으면, 부드럽게 모든 선모충 라 할 수 있도록 원형 방식으로 격자 페트리 접시 또는 애벌레 계산 분지에서 유체를 이동잠재적으로 간과했다 rvae은 페트리 접시의 중심에 축적합니다. 검사를 반복합니다. </li><li> 용의자 구조가있는 경우, 40 배율을 증가 - 100X한다. 피펫으로 접시 / 분지에서 선모충의 유충을 제거하고 90 % 에탄올로 튜브에 수집합니다. </li><li> 완전한 접시가 검사 된 후에는 접시 / 지의 부드러운 흔들림부터의 절차를 반복한다. 적어도 3 회 더 이상 애벌레 때까지 절차를 반복하는 것이 발견된다. </li><li> 유충의 수를 계산합니다. 근육 조직의 양과 상관 관계는 테스트 g (LPG) 당 유생으로 존재. </li><li> 너무 많은 유충이 안정적으로 애벌레 수를 결정하기 위해 소화 유체에 존재하는 경우, 측정 실린더에 유충을 포함하는 유체를 돌려 스퀴즈 세척 병 수돗물로 씻어,하고 아래로 정착 애벌레를 둡니다. </li><li> 10 분 침강 시간 후, 정의 된 볼륨에 뜨는을 감소 (예 :10 ㎖). 정확한 양을 확인하려면, 피펫으로 새 실린더에 뜨는을 전송합니다. </li><li> 격렬한 흔들림에 의해 유체에 균일하게 애벌레를 일시 중단합니다. 요동 동안 배양 접시에 20 μL 애벌레 정지 12 방울을 추가합니다. </li><li> 현미경으로 각 드롭을 검사합니다. 240 μL의 유충의 수를 결정하고 최고 및 최저 카운트를 삭제합니다. 상등액의 총량 (예를 들어 10 ㎖)에 유충의 수를 추정. 참고 : 스테레오 현미경의 품질은 선모충의 유충의 식별을 위해 가장 중요하다. </li><li> 유충은 피펫으로 튜브에 수집 할 때, 애벌레는 피펫 벽에 부착하지 않았지만 튜브로 전송되어 있는지주의 깊게 확인합니다. 참고 : 풀링 된 샘플에서 긍정적 인 선모충 결과는 기원의 시체에 다시 풀에서 추적해야합니다. 양 도체가 아이덴 때까지 여기서, 풀 크기는 점진적으로 감소되어야tified. 샘플 크기는 감도를 증가시키는 과정이 증가 될 수있다. 집단 시료의 검사는 양수 또는 불확실한 결과를 생성하는 경우, 추가 20g 샘플은 각각의 돼지에서 가져온 것입니다. 다섯 돼지에서 20g 샘플을 모으고 기재된 방법을 사용하여 검사된다. 이런 식으로 다섯 돼지의 20 그룹의 샘플을 검사한다. 선모충 5 개의 돼지에서 풀링 된 샘플에서 검출 될 때, 20g의 시료를 그룹의 각각의 돼지로부터 수집되고 원래 양 도체가 검출 될 때까지 각각 별도로 검사된다. </li></ol></li></ol>

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U.S. Government Publishing Office Available from: <a target="_blank" href="https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf">https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2016-title9-vol2/pdf/CFR-2016-title9-vol2-sec318-10.pdf</a> (2012)</li><li>Gamble, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Commission+on+Trichinellosis:+recommendations+on+methods+for+the+control+of+Trichinella+in+domestic+and+wild+animals+intended+for+human+consumption.">International Commission on Trichinellosis: recommendations on methods for the control of Trichinella in domestic and wild animals intended for human consumption.</a> Vet. Parasitol. 93 (3-4), 393-408 (2000).</li><li>Gajadhar, A. A., Forbes, L. 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저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

교반기 방법을 용이하게 수행 할 수 있지만, 엄격 기술적 세부 사항을 준수하지 않는 것은, 따라서 소비자의 건강을 위태롭게 충분한 감도로 이끈다. 임계 제어 지점은 위의 텍스트에서 강조되고있다. 또한, 해당 장치의 사용은 시험의 성공적인 결과에 매우 중요하다. 모든 선박들은 표면 애벌레의 부착을 감소시키는 실리콘 코팅 유리 피펫 팁 만들어 져야한다. 소화 방법의 민감도는 근육의 유충 밀도 시험 근육 시료의 양에 따라 달라진다. (3)의 유충 밀도 - 근육 조직 5 LPG, 100 %의 민감도가보고 되었으나 한 LPG보다 감도가 40 % (13)에 떨어 뜨렸다. 테스트 된 숙주 동물의 종에 따라 시험의 민감도가 사용 시료의 양을 증가시킴으로써 향상시킬 수있다. 제 i야생 동물 nfection 부담 때문에 더 큰 샘플 크기는 14을 사용, 일반적으로 낮다. 취향 사이트는 또한 호스트 동물마다 다릅니다. 여기서, 또한 큰 샘플을 초래할 수 혀 고려할 필요 같은 일부 근육 조직의 하부 소화율은 15 크기. 또한, 자석 교반기 방법은 내부 제어를 포함하지 않는다는 것을 이해하는 것이 중요하다. 따라서, 문서에 대한 샘플링에서 품질 보증 관리는 정확하고 정밀한 결과를 얻기 위해 필수적이다. 근육 샘플 선모충 유충을 검출하는 기관 성능의 품질 능력 시험에서 각 분석 정기적 참여에 의해 모니터링한다. 방법의 또 다른 한계는 현미경으로 근육 애벌레의 최종 식별 단계는 매우 주관적 및 난방입니다입니다심사 분석에 의해 애벌레 형태의 지식에 vily 의존. 이 문제를 회피하는 흥미로운 또 다른 방법은 라텍스 응집 시험으로 애벌레 검출 다음 필터 분리에 자석 교반기 방법 /입니다. 그러나 EU 법규에 따라이 방법은 같은 멧돼지 4로 국내 돼지하지만 감염의 위험이 높은 동물 고기의 테스트에 해당하는 것으로 간주됩니다. 모노클로 날 항체와 항원 유생의 식별은 시험보다 대물 수 있지만, 기관 고기를 16 그램 당 유충의 수를 결정하는 가능성을 부정한다. 자석 교반기 방법의 또 다른 변화는 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 소화 방법 / 침전 기술, 기계적으로 지원 풀링 된 샘플 발굴 포함필터 분리 기술에 estion 방법 / 최대 35g 기술의 풀링 된 샘플에 대한 자동 소화 방법. 이들 기술은 모두 고기 선모충 유충의 시각화 및 계산의 인공 소화에 기초하지만, 여과 및 침전 단계에 사용되는 기기 상이된다. 분리 된 유충은 또한 분자 시험 (예를 들어, 다중 PCR) (17)에 의해 종 레벨에서 식별 될 수있다. EU 법률에 따르면, 모든 긍정적 인 샘플은 선모충 종 판별을 위해 국가 참조 실험실 또는 EURLP에 전달해야합니다.

속 선모충의 선충은 전 세계적으로 육식 동물과 잡식 동물 포유류, 조류, 파충류의 가로 무늬 근육에서 검출 될 수있다. 이러한 동물 매개 선충 돼지, 말에서 인간 원료 또는 반 원시 고기와 고기 파생 된 제품을 도달 할 수 있습니다, 게임 동물은 섭취한다. 이 인수 공통 전염병은 pathognomonic 징후와 증상, 예를 들어, 설사, 발열, 눈 주위 부종과 근육통 및 심근염, 혈전 색 전성 질환과 뇌염 1 가능한 합병증을 특징으로 인체에 심각한 질병이 될 수 있습니다. 선모충은 야생 및 국내 동물 선모충 감염의 가장 광범위 병인 에이전트이며, 전 세계적으로 인간 감염의 대부분을 발생합니다. 유럽, 북미 및 서부 아프리카, 서아시아에서 선모충의 britovi 인간 감염의 또 다른 근원이다. 또한 10 개의 다른 분류군 덜 일반적 원인으로보고있다<html> 인간 질병의 에이전트는 일반적으로 야생 동물 2, 세계의 다른 지역에서 발견된다. 이러한 멧돼지, 곰, 바다 코끼리와 오소리 등 야생 동물뿐만 아니라, 돼지 고기는 전 세계적으로 인간 감염의 가장 중요한 소스를 나타냅니다. trichinellosis을 방지하는 가장 좋은 방법은 원시 육류 제품을 먹는 자제하고 고기, 안전 온도 (특히 게임 고기를 요리하다&gt; 65 ° C 1 분 동안, 즉의 핵심에 갈색에 핑크에서 고기 색상을 변경하려면 고기 제품) 3. 유럽 연합 (EU)과 USDA은 고기 4, 5 T.의 spiralis 유충을 죽이는 데 사용 할 수 있습니다 돼지 고기 제품에 대한 동결 및 조리 시간과 온도를 지정했습니다. 또한, 육류 및 육류 제품에 선모충의 비활성화에 대한 권장 사항은 Trichinellosis에 관한 국제위원회가 발표되었다&quot;외부 참조&quot;&gt; 6. 유럽에서는, 선모충 감염의 위험성을 무시할 상업용 돼지 무리의 제어 하우징 조건의 도입에 더하여, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사에서 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다. 식품 안전을 위해 소화 분석 고기 3, 7 선모충 유충의 직접 검출을위한 신뢰할 수있는 유일한 방법이다. 소화 분석의 여러 가지 변형이 있더라도 교반기 방법은 국제적으로 인정 된 기준 방법 3, 4, 7이다. 이 분석은 가로 무늬 근육 조직에서 선모충의 유충의 검출을 기반으로합니다. 근육 샘플의 효소 분해 및 후속 여과 및 침전 단계 후 트라이chinella 유충은 현미경으로 식별됩니다. 무역 의무와 국내법에 따라, 자석 교반기 메소드의 범용 프로토콜에서 작은 변화의 다수가 있습니다. 여기에, 기술적 인 세부 사항은 유럽 연합 (EU)의 요구 사항 4, ISO 규격 8, ICT 가이드 라인 (6) 및 기생충 (EURLP)에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 연구소의 경험과 선모충에 대한 독일의 참조 연구소를 기반으로합니다.

<table><tbody><tr><td>Knife, Scissors, Tweezers</td><td></td><td></td><td>Cutting samples and removing non-digestible tissue</td></tr><tr><td>Blender&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>With a sharp chopping blade</td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td></td><td></td><td>With thermostatically controlled heating plate</td></tr><tr><td>Stirring Rod</td><td></td><td></td><td>Teflon-coated, approximately 5 cm long</td></tr><tr><td>Conical glass separation funnel</td><td></td><td></td><td>Capacity of at least 2 L, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation.</td></tr><tr><td>Stands, rings and clamps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sieve</td><td></td><td></td><td>Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh</td></tr><tr><td>Funnel</td><td></td><td></td><td>Internal diameter not less than 12&amp;nbsp;cm, to support the sieves</td></tr><tr><td>Glass beaker</td><td></td><td></td><td>Capacity 3 L</td></tr><tr><td>Glass measuring cylinder</td><td></td><td></td><td>Capacity 50 to 100 mL, or centrifuge tube</td></tr><tr><td>Stereo-microscope</td><td></td><td></td><td>With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table</td></tr><tr><td>Petri dishes</td><td></td><td></td><td>9 cm diameter, marked on their undersides into 10 &amp;times; 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope</td></tr><tr><td>Aluminium foil</td><td></td><td></td><td>Alternatively a lid to cover the beakers</td></tr><tr><td>25% hydrochloric acid</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pepsin</td><td></td><td></td><td>Strength: 1:10,000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12,500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2,000 FIP (F&amp;eacute;d&amp;eacute;ration internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/mL</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td></td><td></td><td>70-90% ethyl alcohol</td></tr><tr><td>Tap water</td><td></td><td></td><td>Heated to 46-48 &amp;deg;C before use</td></tr><tr><td>Balance</td><td></td><td></td><td>Accurate to at least 0.1 g</td></tr><tr><td>Metal tray</td><td></td><td></td><td>Capacity 10 to 15 L, to collect the remaining digestive juice</td></tr><tr><td>Pipettes and pipette holder</td><td></td><td></td><td>Different sizes (1, 10 and 25 mL)</td></tr><tr><td>Thermometer</td><td></td><td></td><td>Accurate to 0.5 &amp;deg;C, temperature range at least from 20 &amp;deg; C to 70&amp;nbsp;&amp;deg;C</td></tr><tr><td>Siphon</td><td></td><td></td><td>For tap water</td></tr></tbody></table>

magnetic stirrer method for the detection of trichinella larvae in muscle samples

Trichinellosis 인간의 쇠약 질환과 속 선모충의 선충 유충에 감염된 동물의 원시 또는 덜 익힌 고기의 소비로 인해 발생합니다. 인간 감염의 가장 중요한 소스는 전 세계 게임 고기와 돼지 고기 나 돼지 고기 제품입니다. 많은 나라에서, 인간 trichinellosis 예방은 감염 동물 사체로부터 근육 시료의 인공 소화에 의해 감염된 동물의 식별에 기초한다. 고기의 소화하지만, 자석 교반기 방법이 황금 표준으로 간주됩니다에 따라 여러 가지 방법이 있습니다. 이 방법은 근육 샘플 및 후속 여과 및 침전 단계의 효소 분해 후 현미경으로 선모충의 유충의 검출을 할 수 있습니다. 이 방법은 특별한 고가의 장비를 필요로하지 않지만, 내부의 제어 장치는 사용할 수 없다. 따라서, 엄격한 품질 관리는있는 수정되어야한다테스트를 통해 거라고. 본 연구의 목적은 세부 처리 지침 및 기생충에 대한 유럽 연합 (EU) 참조 약국 및 선모충 독일의 국립 참조 연구소의 경험을 바탕으로 애널리스트의 방법의 중요 관리 점을 제공하는 것입니다.

<html> 소화 후, 감염성 근육 유충의 형상 인식을 더 어렵게 변할 수있다. 일반적인 형태는 단단히 코일 유충, 가볍게 코일 유충 또는 C 형 또는 완전히 uncoiled 유충 (- 2C도 2B)를 포함한다. 그램 당 발견 된 유충의 수는 상당히 다를 수 있으며, 몇 백 애벌레 한 유충에 이르기까지 다양 할 수 있습니다. 감염성 근육 유충의 형태는도 2a에 도시된다. 길이 0.7 ~ 1.5 mm, 폭 약 0.3 mm는 선모충의 유충입니다. 식도는 좁고 약간 둥근 끝이있다. 표피는 부드러운이다. 체강 상기 stichosome의 앞쪽 절반에서, 구조 (45) (55)에 큰 셀 (stichocytes)의 행에 의해 둘러싸인 긴 세관 이루어지는 관찰 할 수있다. 직장 11 어떤 예측하지 않고 또한 둥근 또는 10 부속되어. t &quot;&gt; 기타 구조, 선모충의 유충 외에, 근육 소화 후 발견 될 수있는 몇 가지 예는도 3a에 도시되어있다 -.. 3 층을 야생 동물이 자주 애니메이션으로 내장 적출 과정에서 오염 된 다른 기생충이나 테스트에 사용할 수있는 근육 샘플에 감염되어 또는 무생물 구조 / 생물. 유충의 길이는 전방 및 후방 끝의 모양과 stichosome 도움의 발생은 다른 선충 장군 (12)를 구별한다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig1.jpg" /> 그림 1 : (A) 부족 및 (B) 충분한 헹굼 단계 후 선모충 유충의 현미경 검사. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig1large.jpg" target="_blank">더 큰이 적이 보려면 여기를 클릭하십시오</a>이 그림의 rsion. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig2.jpg" /> 그림 2 : 유충 (A)의 직장, Stichosome과 식도 표시 형태론 감염성의 선모충 애벌레. 소화 표시 (B) 후 근육 애벌레의 가능한 모양 단단히 감아 가볍게 애벌레와 (C)를 이동하는 유충을 uncoiled 코일. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/55354/55354fig3.jpg" /> 그림 3 : 자석 교반기 방법으로 소화 근육의 샘플 후 부대 조사 결과의 예. (A)의 모 형 머리멧돼지에있는 지구 벌레; (B) 멧돼지에서 Alaria의 alata는; (C) 멧돼지에서 근육 섬유; (D) Metastrongylus SP. 멧돼지에서; Toxocara 특검팀 : (E) 식물 섬유는 멧돼지 (F)에서 발견. 멧돼지에서 애벌레. 스케일 바는 100 μm의를 나타냅니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55354/55354fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

많은 나라에서 인간 trichinellosis 방지 전세계 교반기 방법 금 표준 간주되는 소화의 방법에 의해 감염 동물의 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다.

의 검출을위한 자석 교반기 방법<em&gt; 선모충</em근육 샘플에서&gt; 애벌레

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

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Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

28.6K 조회수.  Federal Institute for Risk Assessment.  많은 나라에서 인간 trichinellosis 방지 전세계 교반기 방법 금 표준 간주되는 소화의 방법에 의해 감염 동물의 근육 샘플의 실험실 시험에 기초한다. 

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Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. Infective eggs are given by oral gavage, hatch in the distal small intestine, invade the intestinal epithelial cells (IECs) 
that line the crypts of the cecum and proximal colon and upon maturation the worms release eggs into the environment1. This model is a powerful tool to 
examine factors that control CD4+ T helper (Th) cell activation as well as changes in the intestinal epithelium. The immune response that occurs in 
resistant inbred strains, such as C57BL/6 and BALB/c, is characterized by Th2 polarized cytokines (IL-4, IL-5 and IL-13) and expulsion of worms while Th1-associated 
cytokines (IL-12, IL-18, IFN-&gamma;) promote chronic infections in genetically susceptible AKR/J mice2-6. Th2 cytokines promote physiological changes in 
the intestinal microenvironment including rapid turnover of IECs, goblet cell differentiation, recruitment and changes in epithelial permeability and smooth muscle 
contraction, all of which have been implicated in worm expulsion7-15. Here we detail a protocol for propagating Trichuris muris eggs which can 
be used in subsequent experiments. We also provide a sample experimental harvest with suggestions for post-infection analysis. Overall, this protocol will provide 
researchers with the basic tools to perform a Trichuris muris mouse infection model which can be used to address questions pertaining to Th proclivity in 
the gastrointestinal tract as well as immune effector functions of IECs.

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris infection is an intestinal model of Th2 immunity where resistant mice generate a protective Th2 response and susceptible mice generate a pathological Th1 response.

Trichuris muris 감염 : 굿에서 2 형 내성 및 염증의 모델

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

연구

면역학 및 감염병학

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous mycotoxins in food commodities. In this protocol we show how to fabricate and interrogate an electrochemical competitive Enzyme linked immunomagnetic assay based on the use of magnetic beads as solid support for the immunochemical chain3 and screen printed electrodes as sensing platform.
Our method aims to determine the total amount of HT-2 and T-2 toxins, mycotoxins belonging to the trichothecenes family and of great concern for human health4. The use of an antibody clone with a cross reactivity of 100% towards HT-2 and T-2 allows to simultaneously detect both toxins with similar sensitivity5.
The first step of our assay is the coating step where we immobilize HT2-KLH conjugate toxin on the surface of magnetic beads. After a blocking step, necessary to avoid non-specific absorptions, the addition of a monoclonal antibody allows the competition between immobilized HT-2 and free HT-2 or T-2 present in the sample or dissolved in a standard solution.
At the end of the competition step, the amount of monoclonal antibody linked to the immobilized HT-2 will be inversely proportional to the amount of toxin in the sample solution.
A secondary antibody labeled with alkaline phosphatase (AP) is used to reveal the binding between the specific antibody and the immobilized HT-2. The final measurement step is performed by dropping an aliquot of magnetic bead suspension, corresponding to a specific sample/standard solution, on the surface of a screen-printed working electrode; magnetic beads are immobilized and concentrated by means of a magnet placed precisely under the screen-printed electrode. After two minutes of incubation between magnetic beads and a substrate for AP, the enzymatic product is detected by Differential Pulse Voltammetry (DPV) using a portable instrument (PalmSens) also able to initiate automatically eight measurements within an interval of few seconds.

ELIME Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical Method for Mycotoxin Detection

A protocol to detect trichothecenes (mycotoxins of concern for human health) using a newly developed screening method based on a competitive immunochemical method and a final electrochemical detection is demonstrated.

진균 독소의 검출을위한 ELIME (효소가 단백질 자기 전기를 연결) 방법

Immunoassays are a valid alternative to the more expensive and time consuming quantitative HPLC or GC1, 2 methods for the screening detection of hazardous ...

생물학

Examining Muscle Regeneration in Zebrafish Models of Muscle Disease

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, the muscle stem cell is activated and undergoes cell proliferation to generate a pool of myoblasts, which subsequently differentiate to form new muscle fibers. In many muscle wasting conditions, including muscular dystrophy and ageing, this process is impaired resulting in the inability of muscle to regenerate. The process of muscle regeneration in zebrafish is highly conserved with mammalian systems providing an excellent system to study muscle stem cell function and regeneration, in muscle wasting conditions such as muscular dystrophy. Here, we present a method to examine muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease. The first step involves the use of a genotyping platform that allows the determination of the genotype of the larvae prior to eliciting an injury. Having determined the genotype, the muscle is injured using a needle stab, following which polarizing light microscopy is used to determine the extent of muscle regeneration. We therefore provide a high throughput pipeline which allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

Skeletal muscle regeneration is driven by tissue resident muscle stem cells, which are impaired in many muscle diseases such as muscular dystrophy, and this results in the inability of muscle to regenerate. Here, we describe a protocol that allows the examination of muscle regeneration in zebrafish models of muscle disease.

근육 질환의 제브라피시 모델에서 근육 재생 검토

Skeletal muscle has a remarkable ability to regenerate following injury, which is driven by obligate tissue resident muscle stem cells. Following injury, ...

발생학

Intramuscular Injections Along the Motor End Plates: A Minimally Invasive Approach to Shuttle Tracers Directly into Motor Neurons

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the development of several animal models of these neuromuscular disorders has provided the scientific community with different therapeutic scenarios aimed at delaying or reversing the progression of these conditions. By taking advantage of the retrograde machinery of neurons, one of these approaches has been to target skeletal muscles in order to shuttle therapeutic genes into corresponding spinal cord motor neurons. Although once promising, the success of such gene delivery approach has been hampered by the sub-optimal number of transduced motor neurons it has so far shown to yield. Motor end plates (MEPs) are highly specialized regions on the skeletal musculature that are in direct synaptic contact to the spinal cord &#945; motor neurons. In this regard, it is important to note that, so far, the efforts to retrogradely transfer genes into motor neurons were made without reference to the location of the MEP region in the targeted muscles. Here, we describe a simple protocol 1) to reveal the exact location of the MEPs on the surface of skeletal muscles and 2) to use this information to guide the intramuscular delivery and subsequent optimal retrograde transport of retrograde tracers into motor neurons. We hope to utilize the results from these tracing experiments in further studies into investigating retrograde transport of therapeutic genes to spinal cord motor neurons through the targeting of MEPs.

The efficacy of intramuscular uptake and retrograde transport of molecules to corresponding motor neurons depends on the location of the injection sites with respect to the motor end plates (MEPs). Here, we describe how to locate MEPs on skeletal muscles to optimise retrograde transport of tracers into motor neurons.

모터 엔드 플레이트 함께 근육 주사 : 직접 모터 뉴런에 셔틀 트레이서에 대한 최소 침습 접근

Diseases affecting the integrity of spinal cord motor neurons are amongst the most debilitating neurological conditions. Over the last decades, the ...

신경과학

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in communication with the epidermal cells they innervate and thus their analysis benefits from in situ visualization of both neuronally and epidermally expressed proteins by immunofluorescence. Traditional methods of preparing larval fillets for immunofluorescence experiments leave intact the muscle tissue that covers most of the body wall, presenting several challenges to imaging neuronal and epidermal proteins. Here we describe a method for removing muscle tissue from Drosophila larval fillets. This protocol enables imaging of proteins that are otherwise obscured by muscle tissue, improves signal to noise ratio, and facilitates the use of super-resolution microscopy to study da neuron development.

Removal of Drosophila Muscle Tissue from Larval Fillets for Immunofluorescence Analysis of Sensory Neurons and Epidermal Cells

Studies of neuronal morphogenesis using Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons benefit from in situ visualization of neuronal and epidermal proteins by immunofluorescence. We describe a procedure that improves immunofluorescence analysis of da neurons and surrounding epidermal cells by removing muscle tissue from the larval body wall.

제거<em&gt; 초파리</em감각 뉴런과 표피 세포의 면역 형광 분석을위한 애벌레 필렛에서&gt; 근육 조직

Drosophila larval dendritic arborization (da) neurons are a popular model for investigating mechanisms of neuronal morphogenesis. Da neurons develop in ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional measures of muscle health. In this video article, we demonstrate a method to measure force generation during contraction of zebrafish larval trunk muscle. Force measurements are accomplished by placing an anesthetized larva into a chamber filled with a salt solution. The anterior end of the larva is tied to a force transducer and the posterior end of the larva is tied to a length controller. An isometric twitch contraction is elicited by electric field stimulation and the force response is recorded for analysis. Force generation during contraction provides a measure of overall muscle health and specifically provides a measure of muscle function. Although we describe this technique for use with wild-type larvae, this method can be used with genetically modified larvae or with larvae treated with drugs or toxicants, to characterize muscle disease models and evaluate treatments, or to study muscle development, injury, or chemical toxicity.

Force measurements can be used to demonstrate changes in muscle function due to development, injury, disease, treatment or chemical toxicity. In this video, we demonstrate a method to measure force during a maximal contraction of zebrafish larval trunk muscle.

Zebrafish의 유충의 근육 기능을 평가하기 위해 수축하는 동안 힘 측정

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Single Myofiber Isolation and Culture from a Murine Model of Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy in Early Post-Natal Development

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate filament proteins that sustain the nuclear envelope and the components of the nucleoplasm. We recently reported that muscle wasting in EDMD can be ascribed to intrinsic epigenetic dysfunctions affecting muscle (satellite) stem cells regenerative capacity. Isolation and culture of single myofibers is one of the most physiological ex-vivo approaches to monitor satellite cells behavior within their niche, as they remain between the basal lamina surrounding the fiber and the sarcolemma. Therefore, it represents an invaluable experimental paradigm to study satellite cells from a variety of murine models. Here, we describe a re-adapted method to isolate intact and viable single myofibers from post-natal hindlimb muscles (Tibialis Anterior, Extensor Digitorum Longus, Gastrocnemius and Soleus). Following this protocol, we were able to study satellite cells from Lamin &#916;8-11 -/- mice, a severe EDMD murine model, at only 19 days after birth.
We detail the isolation procedure, as well as the culture conditions for obtaining a good amount of myofibers and their associated satellite-cells-derived progeny. When cultured in growth-factors rich medium, satellite cells derived from wild type mice activate, proliferate, and eventually differentiate or undergo self-renewal. In homozygous Lamin &#916;8-11 -/- mutant mice these capabilities are severely impaired.
This technique, if strictly followed, allows to study all processes linked to the myofiber-associated satellite cell even in early post-natal developmental stages and in fragile muscles.

Here, we propose a method to efficiently obtain single muscle fibers at early post-natal developmental stages from homozygous mutant Lamin &#916;8-11 mouse model, a very severe model for Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD).

초기 산후 발달에 있는 에머리 드레이푸스 근 이영양증의 Murine 모형에서 단 근섬유 격리 및 문화

Autosomal dominant Emery-Dreifuss muscular dystrophy (EDMD) is caused by mutations in the LMNA gene, which encodes the A-type nuclear lamins, intermediate ...

의학

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial respirometric assays from isolated mitochondrial preparations allow for the assessment of mitochondrial function, as well as determination of the mechanism(s) of action of drugs and proteins that modulate metabolism. Current isolation procedures often require large quantities of tissue to yield high quality mitochondria necessary for respirometric assays. The methods presented herein describe how high quality purified mitochondria (~ 450 &#181;g) can be isolated from minimal quantities (~75-100 mg) of mouse skeletal muscle for use in high throughput respiratory measurements. We determined that our isolation method yields 92.5&#177; 2.0% intact mitochondria by measuring citrate synthase activity spectrophotometrically. In addition, Western blot analysis in isolated mitochondria resulted in the faint expression of the cytosolic protein, GAPDH, and the robust expression of the mitochondrial protein, COXIV. The absence of a prominent GAPDH band in the isolated mitochondria is indicative of little contamination from non-mitochondrial sources during the isolation procedure. Most importantly, the measurement of O2 consumption rate with micro-plate based technology and determining the respiratory control ratio (RCR) for coupled respirometric assays shows highly coupled (RCR; &#62;6 for all assays) and functional mitochondria. In conclusion, the addition of a separate mincing step and significantly reducing motor driven homogenization speed of a previously reported method has allowed the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle that results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

Here, we present a modification of a previously reported method that allows for the isolation of high quality and purified mitochondria from smaller quantities of mouse skeletal muscle. This procedure results in highly coupled mitochondria that respire with high function during microplate based respirometirc assays.

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아의 분리

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Observation Microtubule networks in Drosophila Neuromuscular junctions and muscle cells(초파리 신경근 접합부 및 근육 세포의 미세소관 네트워크 관찰)

Using Drosophila Larval Neuromuscular Junction and Muscle Cells to Visualize Microtubule Network

The microtubule network is an essential component of the nervous system. Mutations in many microtubules regulatory proteins are associated with neurodevelopmental disorders and neurological diseases, such as microtubule-associated protein Tau to neurodegenerative diseases, microtubule severing protein Spastin and Katanin 60 cause hereditary spastic paraplegia and neurodevelopmental abnormalities, respectively. Detection of microtubule networks in neurons is advantageous for elucidating the pathogenesis of neurological disorders. However, the small size of neurons and the dense arrangement of axonal microtubule bundles make visualizing the microtubule networks challenging. In this study, we describe a method for dissection of the larval neuromuscular junction and muscle cells, as well as immunostaining of &#945;-tubulin and microtubule-associated protein Futsch to visualize microtubule networks in Drosophila melanogaster. The neuromuscular junction permits us to observe both pre-and post-synaptic microtubules, and the large size of muscle cells in Drosophila larva allows for clear visualization of the microtubule network. Here, by mutating and overexpressing Katanin 60 in Drosophila melanogaster,&#160;and then examining the microtubule networks in the neuromuscular junction and muscle cells, we&#160;accurately reveal the regulatory role of Katanin 60 in neurodevelopment. Therefore, combined with the powerful genetic tools of Drosophila&#160;melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

저자 스포트라이트: Understanding Microtubule Network in Drosophila Neuromuscular Junctions 

Here, we present a detailed protocol to visualize the microtubule networks in neuromuscular junctions and muscle cells. Combined with the powerful genetic tools of Drosophila melanogaster, this protocol greatly facilitates genetic screening and microtubule-dynamics analysis for the role of microtubule network regulatory proteins in the nervous system.

의 검출을위한 자석 교반기 방법

요약

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