Мы стремимся создать надежную модель синдрома сухого глаза. Мы успешно воспроизвели патологическое состояние водянистого дефицита сухого глаза, удалив ELG и ILG из глаз. Из-за глубокого анатомического расположения ILG комбинированное иссечение ELG и ILG является более сложным и инвазивным.
Он также способен вызывать кровотечение во время операции, что предъявляет высокие требования к нашим эксплуатационным качествам. Наша модель успешно индуцировала значительный дефицит водянистой влаги при сухости глаз с минимальным повреждением животного и значительным упрощением хирургической процедуры. Сконструированная мышиная модель очень похожа на тяжелый синдром сухого глаза, такой как синдром Шегрена и синдром Стивенса-Джонсона, что обеспечивает сильную поддержку для соответствующих исследований.
Метод позволяет избежать систематических инъекционных эффектов, устраняет низкую продолжительность эффекта локальной инъекции, устраняет недостатки модели сухого глаза и упрощает экспериментальный процесс, устраняя необходимость в специальной среде для животных. Для начала поместите мышь под наркозом в положение бокового пролежня и обнажите операционную область под операционным микроскопом. С помощью зубчатых щипцов зажмите кожу с правой стороны мордочки мыши.
Сделайте разрез в средней точке линии, пересекая наружный оракул и линию нижней челюсти к внутреннему уголку глаза. Затем обнажите мышечную ткань и аккуратно удалите ELG, расположенную на мышце. Теперь продлите разрез кожи до внутреннего уголка глаза.
Резко отделите мышцу и найдите светло-красную железу под мышцей. Затем снимите кожуру и удалите ILG. Сшить разрез с помощью 5-0 швов с иглодержателем, офтальмохирургическими ножницами и щипцами.
Нанесите мазь офлоксациновая в конце операции для предотвращения инфицирования. После удаления односторонних ELG и ILG поместите мышей в среду с ритмичным 12-часовым циклом света и темноты и свободным доступом к пище и воде. Возьмите хорошо упакованную фенольную красную нить для измерения разрыва.
После обезболивания водянистой недостаточностью сухого глаза мыши осторожно потяните вниз нижнее веко глаза, подлежащее измерению. Поместите верхнюю часть фенольной красной нити во внутреннюю и внешнюю треть нижнего века и быстро запустите таймер. По истечении отведенного времени осторожно втяните нижнее веко и с осторожностью удалите фенольную красную нить вниз.
Используйте шкалу, указанную на внешнем мешке фенольной красной нити, чтобы измерить от верхней части нити до всей красной части. Используйте электронный секундомер, чтобы точно записать продолжительность теста. Чтобы подготовить срезы тканей для окрашивания, берут глазные яблоки, извлеченные из усыпленной мыши.
Затем поместите глазные яблоки в состав с оптимальной температурой резки и используйте замороженный микротом для получения замораживающих срезов ткани толщиной от пяти до семи микрометров. Для извлечения мРНК роговицы с помощью ножниц и щипцов разрезают глазное яблоко от заднего полюса под микроскопом. Отделите хрусталик и уберите излишки склер и радужной оболочки, но оставьте 0,5-миллиметровую белую склеру и всю роговицу.
После двухнедельного периода после резекции слезной железы секреция слезы у мышей с сухим глазом заметно снизилась по сравнению с нормальной группой. Плоскоклеточная метаплазия и накопление воспалительных клеток наблюдались в эпителии роговицы и стромальном слое группы синдрома сухого глаза. Экспрессия кератина 12 была значительно ниже в эпителиальных клетках роговицы в группе сухого глаза по сравнению с нормальной группой.
Экспрессия Pax6 была значительно снижена в эпителиальных клетках роговицы в группе с синдромом сухого глаза по сравнению с нормальной группой. Экспрессия Sprr1b, маркера аномально дифференцированных эпителиальных клеток роговицы, была значительно выше в группе сухого глаза, чем в группе нормальных.
