نحن ملتزمون بإنشاء نموذج موثوق به لمتلازمة جفاف العين. لقد نجحنا في تكرار الحالة المرضية لجفاف العين الناجم عن نقص الماء عن طريق إزالة ELG و ILG من العينين. نظرا للموقع التشريحي العميق ل ILG ، فإن الاستئصال المشترك ل ELG و ILG يكون أكثر تحديا وتوغلا.
كما أنها قادرة على التسبب في حدوث نزيف أثناء العملية ، مما يضع طلبا كبيرا على قدرتنا التشغيلية. لقد نجح نموذجنا في إحداث خباط مائي كبير ، ونقص جفاف العين مع الحد الأدنى من الضرر للحيوان ، وتبسيط كبير للإجراء الجراحي. يشبه نموذج الفأر الذي تم إنشاؤه إلى حد كبير متلازمة جفاف العين الشديدة، مثل متلازمة شوغرن ومتلازمة ستيفنز جونسون، والتي توفر دعما قويا للأبحاث ذات الصلة.
تتجنب الطريقة تأثيرات الحقن المنهجية ، وتعالج المتانة الضعيفة لتأثير الحقن الموضعي ، وتتغلب على أوجه القصور في نموذج العين الجافة ، وتبسط العملية التجريبية من خلال القضاء على الحاجة إلى بيئة حيوانية مخصصة. للبدء ، ضع الفأر المخدر في وضع الاستلقاء الجانبي ، وكشف المنطقة الجراحية تحت مجهر التشغيل. باستخدام ملقط مسنن ، قم بتثبيت الجلد على الجانب الأيمن من وجه الفأر.
قم بعمل شق في منتصف الخط ، مع تقاطع أوراكل الخارجي وخط الفك السفلي إلى الزاوية الداخلية للعين. ثم قم بفضح الأنسجة العضلية وقم بإزالة ELG الموجود على العضلات بعناية. الآن قم بتمديد شق الجلد إلى الزاوية الداخلية للعين.
افصل العضلات بصراحة وحدد موقع الغدة الحمراء الفاتحة أسفل العضلات. ثم انزع وقم بإزالة ILG. خياطة الشق باستخدام 5-0 خيوط بحامل إبرة ومقص جراحي للعيون وملقط.
ضع مرهم أوفلوكساسين في نهاية العملية لمنع العدوى. بعد إزالة ELG و ILG من جانب واحد ، ضع الفئران في بيئة ذات دورة إيقاعية للضوء والظلام لمدة 12 ساعة وحرية الوصول إلى الطعام والماء. خذ خيطا أحمر فينول معبأ جيدا لقياس المسيل للدموع.
بعد تخدير فأر العين الجاف الناجم عن نقص الماء ، اسحب الجفن السفلي للعين برفق ليتم قياسه. ضع الجزء العلوي من الخيط الأحمر الفينول في الثلثين الداخلي والخارجي للجفن السفلي وابدأ المؤقت على الفور. بعد الوقت المخصص ، اسحب الجفن السفلي بعناية وقم بإزالة الخيط الأحمر الفينول لأسفل بحذر.
استخدم المقياس الموجود على الكيس الخارجي للخيط الأحمر الفينول للقياس من أعلى الخيط إلى الجزء الأحمر بالكامل. استخدم ساعة توقيت إلكترونية لتسجيل مدة الاختبار بدقة. لتحضير شرائح الأنسجة للتلوين ، خذ مقل العيون المستخرجة من الفأر القتل الرحيم.
ثم قم بتضمين مقل العيون في مركب درجة حرارة القطع الأمثل واستخدم ميكروتوم مجمد للحصول على شرائح أنسجة متجمدة بسمك خمسة إلى سبعة ميكرومترات. لاستخراج الرنا المرسال للقرنية ، استخدم المقص والملقط لقطع مقلة العين من القطب الخلفي تحت المجهر. افصل العدسة ونظف الصلبة الزائدة والقزحية ، لكن اترك الصلبة البيضاء 0.5 ملم والقرنية بأكملها.
بعد فترة أسبوعين بعد استئصال الغدة الدمعية ، انخفض إفراز الدموع في فئران العين الجافة بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة الطبيعية. لوحظ حؤول حرشفية وتراكم الخلايا الالتهابية في ظهارة القرنية والطبقة اللحمية لمجموعة العين الجافة. كان التعبير عن الكيراتين 12 أقل بكثير في الخلايا الظهارية للقرنية في مجموعة العين الجافة مقارنة بالمجموعة الطبيعية.
انخفض تعبير Pax6 بشكل ملحوظ في الخلايا الظهارية للقرنية في مجموعة العين الجافة مقارنة بالمجموعة الطبيعية. كان التعبير عن Sprr1b ، وهي علامة على الخلايا الظهارية للقرنية المتمايزة بشكل غير طبيعي ، أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة العين الجافة منه في المجموعة الطبيعية.
