Nous nous engageons à établir un modèle fiable du syndrome de l’œil sec. Nous avons réussi à reproduire l’état pathologique de la sécheresse oculaire par carence aqueuse en supprimant l’ELG et l’ILG des yeux. En raison de la localisation anatomique profonde de l’ILG, l’excision combinée de l’ELG et de l’ILG est plus difficile et invasive.
Il est également capable de provoquer des saignements pendant l’opération, ce qui met à rude épreuve notre capacité de fonctionnement. Notre modèle a réussi à induire une sécheresse oculaire significative déficiente en humeur aqueuse avec des dommages minimes à l’animal et une simplification significative de la procédure chirurgicale. Le modèle murin construit est très similaire au syndrome de l’œil sec sévère, comme le syndrome de Sjögren et le syndrome de Stevens-Johnson, ce qui fournit un soutien solide à la recherche connexe.
La méthode évite les effets d’injection systématiques, résout la faible durabilité de l’effet d’injection locale, surmonte les lacunes du modèle de l’œil sec et simplifie le processus expérimental en éliminant le besoin d’un environnement animal dédié. Pour commencer, placez la souris anesthésiée en position de décubitus latéral et exposez la zone chirurgicale sous un microscope opératoire. À l’aide d’une pince dentée, clampez la peau du côté droit du visage de la souris.
Faites une incision au milieu de la ligne, en coupant l’oracle externe et la ligne mandibulaire jusqu’au coin interne de l’œil. Ensuite, exposez le tissu musculaire et retirez soigneusement l’ELG situé sur le muscle. Étendez maintenant l’incision cutanée au coin interne de l’œil.
Séparez brutalement le muscle et localisez la glande rouge clair sous le muscle. Ensuite, décollez et retirez l’ILG. Suturez l’incision à l’aide de sutures 5-0 avec un porte-aiguille, des ciseaux chirurgicaux ophtalmiques et des pinces.
Appliquez la pommade à l’ofloxacine à la fin de l’opération pour prévenir l’infection. Après avoir retiré l’ELG et l’ILG unilatérales, placez les souris dans un environnement avec un cycle rythmé de 12 heures et un accès libre à la nourriture et à l’eau. Prenez un fil rouge phénol bien emballé pour mesurer la déchirure.
Après avoir anesthésié la souris à carence aqueuse, tirez doucement la paupière inférieure de l’œil à mesurer. Positionnez le haut du fil rouge phénol dans les tiers intérieur et extérieur de la paupière inférieure et lancez rapidement la minuterie. Après le temps imparti, rétractez soigneusement la paupière inférieure et retirez le fil rouge de phénol vers le bas avec précaution.
Utilisez l’échelle fournie sur le sac extérieur du fil rouge phénol pour mesurer du haut du fil à l’intégralité de la partie rouge. Utilisez un chronomètre électronique pour enregistrer avec précision la durée du test. Pour préparer des tranches de tissu à colorer, prélevez les globes oculaires extraits de la souris euthanasiée.
Ensuite, intégrez les globes oculaires dans un composé à température de coupe optimale et utilisez un microtome congelé pour obtenir des tranches de tissu congelées de cinq à sept micromètres d’épaisseur. Pour l’extraction de l’ARNm cornéen, utilisez des ciseaux et des pinces pour couper le globe oculaire du pôle postérieur au microscope. Séparez le cristallin et nettoyez l’excès de sclérotique et d’iris, mais laissez la sclérotique blanche de 0,5 millimètre et toute la cornée.
Après une période de deux semaines après la résection de la glande lacrymale, la sécrétion lacrymale chez les souris oculaires sèches a considérablement diminué par rapport au groupe normal. Une métaplasie squameuse et une accumulation de cellules inflammatoires ont été observées dans l’épithélium cornéen et la couche stromale du groupe des yeux secs. L’expression de la kératine 12 était significativement plus faible dans les cellules épithéliales cornéennes du groupe de l’œil sec par rapport au groupe normal.
L’expression de Pax6 a été significativement réduite dans les cellules épithéliales cornéennes du groupe de l’œil sec par rapport au groupe normal. L’expression de Sprr1b, un marqueur des cellules épithéliales cornéennes anormalement différenciées, était significativement plus élevée dans le groupe des yeux secs que dans le groupe normal.
