Это видео демонстрирует упрощенную процедуру, разработанную для выполнения метаболических исследований печени с достаточной строгостью и воспроизводимостью, которая может служить руководством для выполнения печеночной резекции для ее исследований перфузии vivo. Метод лучше всего применять к метаболизму в режиме реального времени для выявления функции в обороте метаболитов в моделях заболеваний. Перфузия позволяет точно контролировать питательные вещества и гормоны, доступные печени.
Хотя метод не направлен на терапию, перфузии печени могут играть важную роль в понимании этиологии и влияния таких заболеваний, как диабет, НАЖБП и НАСГ, на метаболизм печени. По мере разработки новых фармацевтических препаратов важное значение приобретают методы оценки центрального энергетического метаболизма печени. Этот метод может быть использован с моделями нескольких заболеваний, включая рак и на нескольких различных стадиях прогрессирования заболевания.
Для начала поместите нос мыши в носовой конус после индукции анестезии, и заклейте ее лапы. Вводят лидокаин через подкожную инъекцию двусторонне в область переднего подвздошного гребня. Выполните тест на защемление пальца ноги, чтобы подтвердить отсутствие всех болевых рефлексов.
Выполните целиотомию, чтобы обнажить внутренние органы, сделав разрез шириной три сантиметра. Расширьте разрез с помощью гемостата, который тянет тягу, зажимая мечевидный отросток. Используйте аппликатор с хлопковым наконечником, чтобы очистить тонкий и толстый кишечник, покрывающий воротную вену.
Расположите шелковый шов под дугой воротной вены проксимально к печени. Поместите второй шелковый шов проксимальным или дистальным от нижней брыжеечной вены дистально от печени с помощью шва 2-0. Как только швы будут на месте, каннулируйте воротную вену катетером 22 калибра, сохраняя скос направленным вверх.
Введите в воротную жилу под углом не более 15 градусов. Завяжите первый шов мимо крана катетера. После того, как воротная вена каннулирована, закрепите катетер на два-три миллиметра дистально от ветви воротной вены шелковым швом.
Закрепите нижнюю часть катетера вторым швом. Завяжите узел шовом, чтобы закрепить катетер на дистальной части воротной вены и окружающих тканях. После того, как катетер закреплен, вставьте в катетер шприц на один миллилитр с иглой 27 калибра длиной 38,1 миллиметра для промывки пузырьков крови и воздуха.
Используйте силиконовую трубку с одним миллиметром внутреннего диаметра и силиконовую трубку наружного диаметра пять миллиметров с фиксированным стопорным краном, чтобы соединить перфузионную колонну с катетером, позволяя потоку буфера в печень, отмечая начало перфузии. После запуска таймера снимают повышенное сосудистое давление путем разреза ножницами в нижнюю полую вену. Подтверждают поступление перфузата через печень, наблюдая однородное изменение цвета печени от розового или красного до бледно-желтого.
Как только поток подтвердится, иссекните желудок, тонкую кишку, толстую кишку и правую почку из окружающих тканей. С помощью хирургического помощника маневрируйте печенью вокруг брюшной и грудной полости, поскольку хирург разрезает теменной брюшины и грудную ткань, чтобы резецировать печень. Поднимите печень вверх и отрежьте ножницами оставшиеся соединительные ткани, удерживающие печень на месте.
Медленно манипулируйте печенью для удобства зрения. Измерения скорости потока и потребления кислорода жизненно важны для мониторинга здоровья и функции печени. Часто существует небольшая разница в потреблении кислорода между питаемой и голодающей печенью, что можно объяснить повышенными энергетическими потребностями, вызванными глюкогенезом в печени натощак.
Наиболее важные шаги включают в себя введение катетера под углом 15 градусов, визуализацию кончика катетера, сворачивание запястья и плеч при связывании шва и предотвращение перекрута на воротной вене. Иссеченная ткань может быть изучена после перфузии с помощью любого количества биохимических или аналитических подходов. Перфузии ex vivo в сочетании с МРТ и спектроскопией в реальном времени позволяют измерять метаболические потоки в режиме реального времени.
Естественно, это распространяется на возмущение потока из контрольного состояния в ответ на заболевания.
