Cette vidéo démontre une procédure simplifiée développée pour effectuer des études métaboliques du foie avec suffisamment de rigueur et de reproductibilité, qui peut servir de guide pour effectuer une résection hépatique pour ses études de perfusion vivo. La technique est mieux appliquée au métabolisme en temps réel pour détecter la fonction, dans les métabolites du chiffre d’affaires dans les modèles de maladie. La perfusion permet un contrôle précis des nutriments et des hormones disponibles pour le foie.
Bien que la technique ne soit pas orientée vers la thérapie, les perfusions hépatiques peuvent être essentielles pour comprendre l’étiologie et l’impact de maladies telles que le diabète, la NAFLD et la NASH sur le métabolisme hépatique. Au fur et à mesure que de nouveaux produits pharmaceutiques sont développés, les méthodes d’évaluation du métabolisme énergétique central hépatique deviennent essentielles. Cette méthode peut être utilisée avec des modèles de plusieurs maladies, y compris les cancers et à plusieurs stades différents de la progression de la maladie.
Pour commencer, placez le nez de la souris dans un cône de nez après l’induction de l’anesthésie et collez ses pattes. Administrer la lidocaïne par injection sous-cutanée bilatérale dans la région antérieure de la crête iliaque. Effectuez un test de pincement des orteils pour confirmer l’absence de tous les réflexes de douleur.
Effectuez une céliotomie pour exposer les organes internes en faisant une incision de trois centimètres de large. Élargissez l’incision à l’aide d’un hémostat qui tire la traction en serrant le processus xiphoïde. Utilisez un applicateur à pointe de coton pour dégager le petit et le gros intestin recouvrant la veine porte.
Placez une suture de soie sous l’arche de la veine porte proximale du foie. Placez la deuxième suture de soie proximale ou distale de la veine mésentérique inférieure distale du foie à l’aide d’une suture 2-0. Une fois les sutures en place, canulez la veine porte avec un cathéter de calibre 22, en gardant le biseau pointant vers le haut.
Entrez dans la veine porte à un angle ne dépassant pas 15 degrés. Attachez la première suture au-delà du tapper du cathéter. Une fois la veine porte canulée, ancrez le cathéter distal de deux à trois millimètres de la branche de la veine porte avec la suture en soie.
Fixez la partie inférieure du cathéter avec la deuxième suture. Nouez un nœud avec la suture pour fixer le cathéter à la partie distale de la veine porte et au tissu environnant. Une fois le cathéter fixé, insérez une seringue d’un millilitre avec une aiguille de calibre 27 de 38,1 millimètres de longueur dans le cathéter pour rincer les bulles de sang et d’air.
Utilisez un tube en silicone d’un millimètre de diamètre intérieur et de cinq millimètres de diamètre extérieur avec un robinet d’arrêt fixe pour coupler la colonne de perfusion au cathéter, permettant l’écoulement du tampon dans le foie, marquant le début de la perfusion. Après avoir démarré une minuterie, soulager la pression vasculaire accrue par incision à l’aide de ciseaux dans la veine cave inférieure. Confirmez l’écoulement du perfusat dans le foie en observant le changement homogène de la couleur du foie du rose ou du rouge au jaune pâle.
Une fois le débit confirmé, excisez l’estomac, l’intestin grêle, le gros intestin et le rein droit des tissus environnants. Avec l’aide de l’assistant chirurgical, manœuvrez le foie autour de la cavité abdominale et thoracique pendant que le chirurgien coupe à travers le péritoine pariétal et le tissu thoracique pour réséquer le foie. Soulevez le foie vers le haut et coupez les tissus conjonctifs restants qui maintiennent le foie en place avec des ciseaux.
Manipulez lentement le foie pour faciliter la vue. Les mesures du débit et de la consommation d’oxygène sont essentielles pour surveiller la santé et le fonctionnement du foie. Il y a souvent une légère différence dans la consommation d’oxygène entre les foies nourris et à jeun, ce qui peut être attribué à l’augmentation des demandes d’énergie imposées par la glucogenèse dans le foie à jeun.
Les étapes les plus importantes comprennent l’insertion du cathéter à un angle de 15 degrés, la visualisation de la pointe du cathéter, le roulement du poignet et des épaules lors de l’attache de la suture et l’évitement de la torsion sur la veine porte. Le tissu excisé peut être étudié après la perfusion avec un certain nombre d’approches biochimiques ou analytiques. Les perfusions ex vivo combinées à l’IRM et à la spectroscopie en temps réel permettent de mesurer les flux métaboliques en temps réel.
Naturellement, cela s’étend à la perturbation du flux d’un état de contrôle en réponse aux maladies.
