Este video muestra un procedimiento simplificado desarrollado para realizar estudios hepáticos metabólicos con suficiente rigor y reproducibilidad, que puede servir de guía para realizar la resección hepática para sus estudios de perfusión vivo. La técnica se aplica mejor al metabolismo en tiempo real para detectar la función, en metabolitos de recambio en modelos de enfermedad. La perfusión permite un control preciso de los nutrientes y hormonas disponibles para el hígado.
Aunque la técnica no está dirigida hacia la terapia, las perfusiones hepáticas pueden ser fundamentales para comprender la etiología y el impacto de enfermedades, como la diabetes, la EHGNA y la EHNA en el metabolismo hepático. A medida que se desarrollan nuevos productos farmacéuticos, los métodos para evaluar el metabolismo energético central hepático se vuelven esenciales. Este método se puede utilizar con modelos de varias enfermedades, incluidos los cánceres y en varias etapas diferentes de la progresión de la enfermedad.
Para empezar, coloque la nariz del ratón en un cono nasal después de la inducción de la anestesia y cierre con cinta adhesiva sus patas. Administrar lidocaína mediante una inyección subcutánea bilateralmente en la región de la cresta ilíaca anterior. Realice una prueba de pellizco del dedo del pie para confirmar la ausencia de todos los reflejos de dolor.
Realizar celiotomía para exponer los órganos internos haciendo una incisión de tres centímetros de ancho. Expanda la incisión usando un hemostático que tira de la tracción sujetando el proceso xifoide. Use un aplicador con punta de algodón para limpiar el intestino delgado y grueso que cubre la vena porta.
Coloque una sutura de seda debajo del arco de la vena porta proximal al hígado. Coloque la segunda sutura de seda proximal o distal de la vena mesentérica inferior distal del hígado utilizando una sutura 2-0. Una vez que las suturas estén en su lugar, cannulate la vena porta con un catéter de calibre 22, manteniendo el bisel apuntando hacia arriba.
Ingrese a la vena porta en un ángulo de no más de 15 grados. Ate la primera sutura más allá del interventor del catéter. Después de canular la vena porta, ancle el catéter de dos a tres milímetros distales de la rama de la vena porta con la sutura de seda.
Asegure la parte inferior del catéter con la segunda sutura. Ate un nudo con la sutura para asegurar el catéter a la porción distal de la vena porta y el tejido circundante. Después de asegurar el catéter, inserte una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 27 con una longitud de 38,1 milímetros en el catéter para eliminar las burbujas de sangre y aire.
Utilice un tubo de silicona de un milímetro de diámetro interior y cinco milímetros de diámetro exterior con una llave de parada fija para acoplar la columna de perfusión al catéter, permitiendo el flujo del tampón hacia el hígado, marcando el inicio de la perfusión. Después de iniciar un temporizador, alivie el aumento de la presión vascular mediante la incisión con tijeras en la vena cava inferior. Confirme el flujo de perfusato a través del hígado observando el cambio homogéneo en el color del hígado de rosa o rojo a amarillo pálido.
Una vez que se confirma el flujo, extirpe el estómago, el intestino delgado, el intestino grueso y el riñón derecho del tejido circundante. Con la ayuda del asistente quirúrgico, maniobre el hígado alrededor de la cavidad abdominal y torácica mientras el cirujano corta a través del peritoneo parietal y el tejido torácico para resecar el hígado. Levante el hígado hacia arriba y corte los tejidos conectivos restantes que mantienen el hígado en su lugar con tijeras.
Manipule lentamente el hígado para facilitar la vista. Las mediciones de la tasa de flujo y el consumo de oxígeno son vitales para monitorear la salud y la función del hígado. A menudo hay una ligera diferencia en el consumo de oxígeno entre los hígados alimentados y en ayunas, lo que se puede atribuir al aumento de las demandas de energía impuestas por la glucogénesis en el hígado en ayunas.
Los pasos más importantes incluyen insertar el catéter en un ángulo de 15 grados, visualizar la punta del catéter, rodar la muñeca y los hombros al atar la sutura y evitar la torsión en la vena porta. El tejido extirpado se puede estudiar después de la perfusión con cualquier número de enfoques bioquímicos o analíticos. Las perfusiones ex vivo en combinación con la resonancia magnética en tiempo real y la espectroscopia permiten la medición de los flujos metabólicos en tiempo real.
Naturalmente, esto se extiende a la perturbación del flujo de un estado de control en respuesta a las enfermedades.
