Estamos empenhados em estabelecer um modelo confiável de síndrome do olho seco. Replicamos com sucesso o estado patológico de deficiência aquosa de olhos secos, removendo ELG e ILG dos olhos. Devido à localização anatômica profunda do ILG, a excisão combinada de ELG e ILG é mais desafiadora e invasiva.
Também é capaz de causar sangramento durante a operação, o que exige muito de nossa capacidade operacional. Nosso modelo induziu com sucesso um olho seco deficiente em humor aquoso significativo com danos mínimos ao animal e simplificação significativa do procedimento cirúrgico. O modelo de camundongo construído é altamente semelhante à síndrome do olho seco grave, como a síndrome de Sjögren e a síndrome de Stevens-Johnson, que fornece forte suporte para pesquisas relacionadas.
O método evita efeitos sistemáticos de injeção, aborda a baixa durabilidade do efeito de injeção local, supera as deficiências do modelo de olho seco e simplifica o processo experimental, eliminando a necessidade de um ambiente animal dedicado. Para começar, coloque o mouse anestesiado em decúbito lateral e exponha a área cirúrgica sob um microscópio cirúrgico. Usando uma pinça dentada, prenda a pele no lado direito do rosto do mouse.
Faça uma incisão no ponto médio da linha, cruzando o oráculo externo e a linha mandibular até o canto interno do olho. Em seguida, exponha o tecido muscular e remova cuidadosamente o ELG localizado no músculo. Agora estenda a incisão na pele até o canto interno do olho.
Separe o músculo sem rodeios e localize a glândula vermelha clara abaixo do músculo. Em seguida, retire e remova o ILG. Suturar a incisão com suturas 5-0 com porta-agulha, tesoura cirúrgica oftálmica e pinça.
Aplique pomada de ofloxacina no final da operação para prevenir a infecção. Depois de remover o ELG e o ILG unilaterais, coloque os camundongos em um ambiente com um ciclo rítmico de 12 horas de luz-escuridão e livre acesso a comida e água. Pegue um fio vermelho de fenol bem embalado para medição de rasgo.
Depois de anestesiar o camundongo de olho seco por deficiência aquosa, puxe suavemente para baixo a pálpebra inferior do olho a ser medido. Posicione a parte superior do fio vermelho de fenol nos terços interno e externo da pálpebra inferior e inicie o cronômetro imediatamente. Após o tempo previsto, retraia cuidadosamente a pálpebra inferior e remova o fio vermelho de fenol para baixo com cuidado.
Utilize a escala fornecida no saco externo do fio vermelho de fenol para medir do topo do fio até a totalidade da porção vermelha. Empregue um cronômetro eletrônico para registrar com precisão a duração do teste. Para preparar fatias de tecido para coloração, pegue os globos oculares extraídos do camundongo sacrificado.
Em seguida, incorpore os globos oculares em um composto de temperatura de corte ideal e utilize um micrótomo congelado para obter fatias de tecido congelante de cinco a sete micrômetros de espessura. Para extração de mRNA da córnea, use tesouras e fórceps para cortar o globo ocular do pólo posterior sob o microscópio. Separe a lente e limpe o excesso de esclera e íris, mas deixe a esclera branca de 0,5 milímetro e toda a córnea.
Após um período de duas semanas após a ressecção das glândulas lacrimais, a secreção lacrimal nos camundongos com olho seco diminuiu notavelmente em comparação com o grupo normal. Metaplasia escamosa e acúmulo de células inflamatórias foram observados no epitélio da córnea e na camada estromal do grupo olho seco. A expressão de queratina 12 foi significativamente menor nas células epiteliais da córnea do grupo olho seco em comparação com o grupo normal.
A expressão de Pax6 foi significativamente reduzida nas células epiteliais da córnea do grupo de olho seco em comparação com o grupo normal. A expressão de Sprr1b, um marcador de células epiteliais da córnea anormalmente diferenciadas, foi significativamente maior no grupo de olho seco do que no grupo normal.
