Otimizando a visualização do transporte axonal de carga endógena por microscopia de fluorescência em Caenorhabditis elegans vivos

O início clássico é comumente usado para proteínas de transporte axonal para visualização do transporte axonal, mas o comportamento da carga endógena difere. Os níveis de proteína endógena são baixos, tornando a visualização desafiadora. Oferecemos ideias para otimizar as condições de aquisição para melhor visualização do GPR3 endógeno, que rotula precursores vasculares sinápticos.

A abundância de proteínas citosólicas no campo de transporte axonal, dificulta a visualização de sua dinâmica, utilizando a microscopia de fluorescência convencional. Este protocolo sugere o uso da etapa de ablação, juntamente com abordagens de rotulagem controladas temporalmente para superar esses desafios. Recentemente, conseguimos visualizar o transporte axonal do espectro endógeno.

Ao otimizar os parâmetros de aquisição descritos neste protocolo, emparelhamos nossa abordagem de rotulagem de controle temporal. Isso nos permitiu identificar os primeiros componentes do maquinário que medeiam o transporte.