Optimización de la visualización del transporte axonal de carga endógena mediante microscopía de fluorescencia en Caenorhabditis elegans vivos

El inicio clásico se usa comúnmente para las proteínas de transporte axonal para la visualización del transporte axonal, pero el comportamiento de la carga endógena difiere. Los niveles de proteínas endógenas son bajos, lo que dificulta la visualización. Ofrecemos ideas para optimizar las condiciones de adquisición para una mejor visualización del GPR3 endógeno, que marca los precursores vasculares sinápticos.

La abundancia de proteínas citosólicas en el campo de transporte axonal, dificulta la visualización de su dinámica, utilizando microscopía de fluorescencia convencional. Este protocolo sugiere el uso de la etapa de ablación, junto con enfoques de etiquetado controlados temporalmente para superar estos desafíos. Recientemente hemos podido visualizar el transporte axonal del espectro endógeno.

Al optimizar los parámetros de adquisición descritos en este protocolo, emparejamos nuestro enfoque de etiquetado de control temporal. Esto nos permitió identificar los primeros componentes de la maquinaria que median el transporte.