O objetivo geral deste estudo é examinar o efeito da lesão medular na dinâmica do desenvolvimento e cura da úlcera de pressão em um modelo animal. A principal vantagem dessa técnica é que ela não prejudica os movimentos dos animais, e é muito reprodutível. Este modelo fornece uma plataforma para estudar a dinâmica da cicatrização de feridas e testar várias estratégias terapêuticas para o paciente de SCI.
Antes de iniciar o procedimento, garanta a anestesia adequada pela falta de resposta a uma pitada de cauda. Raspe o cabelo sobre o dorso com um cortador elétrico. Em seguida, aplique o creme depilatório e deixe por três minutos para remover o cabelo restante.
Depois de três minutos, retire o creme depilatório com o esfoliante molhado e lave o dorso da mesma forma. E então devolva os animais para suas gaiolas. No dia seguinte, anestesia os animais e aplique a pomada oftalmica nas córneas para proteger os olhos da secagem durante o procedimento cirúrgico.
Em seguida, esfregue a pele animal três vezes cada com esfoliação betadina e 70% de etanol. Antes da incisão, use uma seringa com uma agulha de calibre 25 para injetar 100 microlitres de 0,125% bupivacaína ao redor do local da incisão como analgesia. Conte de volta das costelas flutuantes que correspondem a T13 para identificar T8 a T12.
Depois de criar uma incisão de um a 1,5 centímetros, ao longo da linha média, na parte de trás, ao nível das vértebras T8 a T12, limpe o tecido adiposo subcutâneo para acessar os músculos paraspinais. E então dissecá-los lentamente para expor os processos espinhosos e lamina em ambos os lados. É muito crítico fazer este procedimento com muito cuidado para evitar sangramento excessivo e qualquer lesão na medula espinhal.
Realize uma laminectomia das vértebras T9 a T10 para expor a medula espinhal, descascando suavemente a lamina espinhal usando micro fórceps dissecando. Use fórceps para fixar e levantar a coluna vertebral em T8 para exagerar a curvatura espinhal. Em seguida, use uma tesoura fina para seção da medula espinhal entre as vértebras T9 e T10 até o chão do canal vertebral para garantir a transeção completa.
Depois de observar a transeção completa sob um microscópio cirúrgico aplique um pedaço de gordura subcutânea sobre o local da laminectomia para fornecer proteção adicional à medula espinhal antes do fechamento do local cirúrgico. Por fim, feche a ferida e sutura os músculos paravertebral e a fáscia superficial. Em seguida, feche a pele usando clipes de sutura.
Imediatamente após a cirurgia sci esfregar a parte de trás do animal com betadina e 70% de álcool. Para uma úlcera de pressão abaixo do local da lesão medular, use uma agulha de calibre 25 para injetar 10 microlitadores de solução de bupivacaína de 0,125% em uma elipse na pele dorsal, perto do sacro, com pontos de 0,5 a um centímetro de distância. Levante delicadamente uma dobra de pele na parte de trás do mouse e sanduiche-a entre dois discos magnéticos.
Imediatamente após a aplicação do ímã, os animais retornam para gaiolas únicas colocadas em uma almofada de aquecimento até que a consciência completa seja recuperada. Após 12 horas de aplicação do ímã anestesia levemente o animal com isoflurano e remova os ímãs. Tire uma foto dos locais da ferida para registrar a aparência inicial da úlcera de pressão no ponto zero do dia.
Cubra a ferida com filme transparente para evitar secagem ou contaminação. Casinha dos animais após o procedimento. Imediatamente após a cirurgia, injete um mililitro de 0,9% de soro fisiológico para hidratação e buprenorfina sr para analgesia.
Faça evacuação manual da bexiga duas vezes ao dia. Remova os clipes cirúrgicos sete dias após a cirurgia de lesão medular. Coletar amostras de pele feridas do camundongo eutanizado no ponto de tempo desejado após lesão medular e indução de úlcera de pressão da pele.
Fixe em 10% de formalina por 24 horas. Após 24 horas transfira para 70% de etanol e armazene a quatro graus Celsius até a secção. Esta imagem mostra o desaparecimento da epiderme em um animal de controle até o terceiro dia de remoção pós-ímã.
As setas indicam as bordas da ferida epidérmica localizadas onde o revestimento epitelial se afina. No animal de controle a epiderme reaparece no sétimo dia. Para feridas criadas abaixo do nível do SCI, em camundongos SCI, é vista uma migração significativamente mais lenta.
Aqui, a figura retrata a cicatrização e o fechamento mais lentos das feridas nos camundongos SCI em comparação com os ratos de controle. A imunossuagem para Ki67, um marcador de células proliferantes indicadas pelas setas vermelhas, revelou menos proliferação no grupo SCI. A coloração para CD31, um marcador para vasos sanguíneos indicados pelas setas vermelhas, revelou menor densidade dos vasos sanguíneos no grupo SCI.
Finalmente, a imunostaining para o músculo alfa liso actin revelou níveis mais baixos desta proteína nas feridas da pele de camundongos SCI. Ao tentar este procedimento é importante lembrar de colocar os ímãs corretamente para desenvolver duas feridas circulares separadas pela pele intacta. Isso reduzirá a variabilidade no desenvolvimento e cura das feridas.
Úlceras de pressão cutânea em pacientes feridos na medula espinhal dão custos significativos ao sistema de saúde dos EUA. Este modelo animal fornece uma plataforma para testar várias estratégias terapêuticas para ajudar a cicatrização de úlceras de pressão em pacientes feridos na medula espinhal.
