L’objectif global de cette étude est d’examiner l’effet des lésions médullaires sur la dynamique du développement et de la guérison des ulcères de pression dans un modèle animal. Le principal avantage de cette technique est qu’elle n’altère pas les mouvements des animaux et qu’elle est très reproductible. Ce modèle fournit une plate-forme pour étudier la dynamique de la cicatrisation des plaies et tester diverses stratégies thérapeutiques pour les patients sci.
Avant de commencer la procédure assurer une anesthésie appropriée par l’absence de réponse à un pincement de la queue. Raser les cheveux sur le dorsum à l’aide d’une tondeuse électrique. Ensuite, appliquez la crème depilatory, et laisser pendant trois minutes pour enlever le reste des cheveux.
Après trois minutes, retirer la crème depilatory avec le gommage humide et laver le dorsum de la même façon. Et puis retourner les animaux dans leurs cages. Le lendemain anesthésier les animaux et appliquer l’onguent ophtalmique sur les cornées pour protéger les yeux du séchage pendant l’intervention chirurgicale.
Ensuite, frottez la peau animale trois fois chacun avec du gommage à base de bétadine et 70% d’éthanol. Avant l’incision, utiliser une seringue avec une aiguille de calibre 25 pour injecter 100 microlitres de 0,125% bupivacaine autour du site d’incision comme analgésie. Comptez à partir des nervures flottantes qui correspondent à T13 pour identifier T8 à T12.
Après avoir créé une incision d’un à 1,5 centimètre, le long de la ligne médiane, sur le dos, au niveau des vertèbres T8 à T12 effacer le tissu adipeux sous-cutané pour accéder aux muscles paraspinaux. Et puis les disséquer lentement pour exposer les processus épineux et lamina des deux côtés. Il est très essentiel de faire cette procédure très soigneusement pour éviter les saignements excessifs et toute blessure à la moelle épinière.
Effectuez une laminectomie des vertèbres T9 à T10 pour exposer la moelle épinière en épluchant doucement le lamina rachidien à l’aide de micro forceps dissecting. Utilisez des forceps pour fixer et soulever la colonne vertébrale au T8 pour exagérer la courbure spinale. Ensuite, utilisez de fines ciseaux pour sectionner la moelle épinière entre les vertèbres T9 et T10 jusqu’au plancher du canal vertébral pour assurer une transection complète.
Après avoir observé la transection complète sous un microscope chirurgical appliquer un morceau de graisse sous-cutanée sur le site de laminectomie pour fournir une protection supplémentaire à la moelle épinière avant la fermeture du site chirurgical. Enfin, fermez la plaie et suturez les muscles paravertébraux et le fascia superficiel. Ensuite, fermez la peau à l’aide de pinces de suture.
Immédiatement après la chirurgie SCI frotter le dos de l’animal avec de la bétadine et 70% d’alcool. Pour un ulcère de pression au-dessous du site de dommages de moelle épinière emploient une aiguille de calibre 25 pour injecter 10 microlitres de la solution de bupivacaine de 0.125%dans une ellipse dans la peau dorsale, près du sacrum, avec des points 0.5 à un centimètre l’un de l’autre. Soulevez doucement un pli de peau sur le dos de la souris et sandwich entre deux disques magnétiques.
Immédiatement après l’application de l’aimant, retournez les animaux dans des cages simples placées sur un coussin chauffant jusqu’à ce que la pleine conscience soit rétablie. Après 12 heures d’application aimantée, anesthésier légèrement l’animal avec de l’isoflurane et retirer les aimants. Prenez une photo des emplacements de la plaie pour enregistrer l’apparition initiale de l’ulcère de pression au point de temps zéro du jour.
Couvrir la plaie d’un film transparent pour éviter le séchage ou la contamination. Maison unique des animaux suivant la procédure. Immédiatement après la chirurgie injecter à l’animal un millilitre de 0,9% salin pour l’hydratation et buprénorphine SR pour l’analgésie.
Effectuez l’évacuation manuelle de la vessie deux fois par jour. Retirez les pinces chirurgicales sept jours après la chirurgie des lésions médullaires. Recueillir des échantillons de peau blessés de la souris euthanasiée au moment désiré après une lésion de la moelle épinière et l’induction de l’ulcère de pression cutanée.
Fixer dans 10% formalin pendant 24 heures. Après 24 heures, transférer à 70 % d’éthanol et conserver à quatre degrés Celsius jusqu’à ce qu’ils soient sectionnants. Cette image dépeint la disparition de l’épiderme chez un animal de contrôle au troisième jour de l’enlèvement post-aimant.
Les flèches indiquent les bords épidermiques des plaies situés là où la doublure épithéliale s’amincie. Chez l’animal de contrôle, l’épiderme réapparaît au septième jour. Pour les plaies créées en dessous du niveau de la SCI, chez les souris SCI, une migration significativement plus lente est observée.
Ici, la figure représente la cicatrisation et la fermeture plus lentes des plaies chez les souris SCI par rapport aux souris témoins. L’immunostaining pour Ki67, un marqueur des cellules proliférantes indiquées par les flèches rouges, a indiqué moins de prolifération dans le groupe de SCI. La coloration du CD31, un marqueur pour les vaisseaux sanguins indiqué par les flèches rouges, a révélé une densité inférieure des vaisseaux sanguins dans le groupe SCI.
Enfin, l’immunostaining pour l’actine lisse d’alpha de muscle a indiqué des niveaux inférieurs de cette protéine dans les blessures de peau des souris de SCI. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de placer les aimants correctement pour développer deux plaies circulaires séparées par une peau intacte. Cela permettra de réduire la variabilité dans le développement des plaies et la guérison.
Les ulcères de pression cutanée chez les patients blessés à la moelle épinière confèrent des coûts importants au système de soins de santé américain. Ce modèle animal fournit une plate-forme pour tester diverses stratégies thérapeutiques pour aider la guérison de l’ulcère de pression chez les patients blessés à la moelle épinière.
