W chromatografii wykluczania wielkościowego (SEC), znanej również jako chromatografia wykluczania cząsteczkowego lub chromatografia żelowo-permeacyjna, cząsteczki są rozdzielane na podstawie ich rozmiarów. Ta technika jest ważna w przypadku rozdzielania dużych cząsteczek, takich jak polimery i biocząsteczki. Dwiema klasami faz stacjonarnych o wielkości mikronów spotykanymi w SEC są cząstki krzemionki i usieciowane kulki żywicy polimerowej. Oba materiały są porowate, ale ich rozmiary porów znacznie się różnią.
Cząsteczki krzemionki oferują zalety, takie jak sztywność, stabilność i zgodność z różnymi rozpuszczalnikami. Natomiast kulki polimerowe mają różne rozmiary porów i mogą być hydrofilowe (lubiące wodę) lub hydrofobowe (odpychające wodę). Żele hydrofilowe, takie jak agar i poliakrylamid, są używane do rozdzielania w wodzie, podczas gdy żele hydrofobowe, takie jak polistyren-diwinylobenzen, są preferowane w przypadku rozpuszczalników niepolarnych. Cząsteczki krzemionki używane do wykluczania wielkości są dezaktywowane, aby zapobiec niepożądanym interakcjom, podczas gdy żywice polimerowe są syntetyzowane bez miejsc wymiany.
Mniejsze substancje rozpuszczone spędzają więcej czasu w porach fazy stacjonarnej, co skutkuje dłuższym czasem elucji z kolumny. Objętość retencji substancji rozpuszczonej zależy od jej współczynnika dystrybucji, który waha się od 0 na granicy wykluczenia do 1 na granicy inkluzji. Odzwierciedla to, jak dobrze substancja rozpuszczona przenika przez pory.
SEC jest godnym uwagi zastosowaniem w analizie mieszanin białek i określaniu wag formuły. Krzywe kalibracji można przygotować między granicami wykluczenia i inkluzji, ale dokładne określenie wag formuły wymaga starannie dobranych standardów w celu zminimalizowania wpływu kształtu.
Tę technikę można przeprowadzić przy użyciu konwencjonalnej aparatury HPLC, zastępując kolumnę HPLC odpowiednią kolumną wykluczania wielkości. Do uzyskania chromatogramów zwykle stosuje się detektor UV/Vis.Chromatografia wykluczania wielkościowego
Z rozdziału 11:
Now Playing
Principles of Chromatography
514 Wyświetleń
Principles of Chromatography
1.7K Wyświetleń
Principles of Chromatography
1.8K Wyświetleń
Principles of Chromatography
613 Wyświetleń
Principles of Chromatography
476 Wyświetleń
Principles of Chromatography
428 Wyświetleń
Principles of Chromatography
531 Wyświetleń
Principles of Chromatography
283 Wyświetleń
Principles of Chromatography
350 Wyświetleń
Principles of Chromatography
1.1K Wyświetleń
Principles of Chromatography
1.3K Wyświetleń
Principles of Chromatography
1.5K Wyświetleń
Principles of Chromatography
521 Wyświetleń
Principles of Chromatography
377 Wyświetleń
Principles of Chromatography
442 Wyświetleń
See More
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone