Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

본 연구는 눈이 어떻게 자연적으로 염증을 예방하는지 이해하는 데 중점을 두고 있습니다. 우리의 연구는 마이콘 경로가 눈의 염증을 억제하고 스트레스를 받은 망막에서 세포 생존을 촉진하는 데 필수적이라는 것을 보여주었습니다. 이는 마이콘 경로를 비활성화하는 것이 망막 생성 질환 치료에 도움이 될 수 있음을 시사합니다.

이 프로토콜은 주사 바늘을 빼내기 전에 안압을 정상화하여 안구 구조에 대한 외상을 줄이고 허혈-재관류 구성 요소에 대한 손상을 제한합니다. 이러한 개선은 물리적 조작으로 인한 실험적 변동성을 최소화하여 이 모델의 정확도를 향상시킵니다. 우리의 연구는 세포가 생존하고 정상으로 돌아갈 수 있다는 희망으로 증상을 줄이기 위해 분자를 중화하는 대신 독특한 치료법 개념을 홍보합니다.

우리는 질병과 관련된 세포의 행동을 변화시키는 데 초점을 맞췄습니다. 이 접근법은 정상적인 세포 활동이 유도되기 때문에 만성 질환의 재발에 대한 장기적인 이점과 저항력을 제공할 수 있는 강력한 잠재력을 가지고 있습니다. 우리 모델은 쥐 눈의 허혈-재관류 손상을 연구하기 위한 정교한 기술을 제공했습니다.

그리고 이것은 장기간의 안압 또는 재관류 손상으로 인한 손상에 안구 내 구조가 어떻게 반응하는지에 대한 보다 정확한 표현을 제공할 수 있습니다. 먼저 주입 라인에 연결된 멸균 0.9% 염화나트륨 식염수 주사기와 라인 끝에 부착된 30게이지 바늘이 있는 마개를 각 마우스에 하나씩 준비하고 벤치 표면에서 120cm 위에 놓습니다. 그런 다음 라인에서 모든 기포를 씻어냅니다.

다음으로, 스폰지로 약 6 x 3cm의 움푹 들어간 곳을 자르고 스티로폼 우물이나 다른 평평한 용기에 단단히 넣어 마우스를 안정시키는 침대를 만듭니다. 마우스를 마취한 후 1%트로피카마이드 한 방울로 홍채를 확장하고 5분 동안 팽창시킵니다. 그런 다음 현미경 아래의 스폰지 침대에 마우스를 단단히 놓습니다.

식염수를 눈에 바르면 눈 표면의 부스러기나 털을 헹굴 수 있습니다. 이가 없는 집게를 사용하여 한쪽 눈을 부드럽게 잡습니다. 그런 다음 주입 라인을 닫은 상태에서 변두리에서 약 2mm 떨어진 곳에 바늘로 전방을 캐뉼링합니다.

바늘이 각막을 주변의 구부러진 각막 표면에 수직으로 뚫고 홍채 평면과 평행하게 약간 평평해지도록 합니다. 마개를 돌려 주입 라인을 실행하고 각막 상처를 통해 누출이 없는지 확인합니다. 안압이 증가함에 따라 각막이 점진적으로 팽창하도록 합니다.

안압계를 사용하여 안압이 수은 90-100mm로 상승했는지 확인합니다. 주입 라인을 테이프로 고정하여 바늘이 위치를 바꾸어 누출을 시작하지 않도록 합니다. 이제 바시트라신과 같은 안과 연고를 눈에 바르면 건조함을 예방할 수 있습니다.

마우스를 현미경에서 멀리 떨어진 가열 lamp 60분 동안 정상 체온을 유지합니다. 60분 후 마우스를 현미경으로 되돌립니다. 식염수 주사기를 마우스 높이로 낮추어 안압을 정상화합니다.

안압계로 안압을 측정하여 약 20mm의 수은이 정상에 가까운지 확인합니다. 정상화되면 렌즈나 홍채가 손상되지 않도록 바늘을 조심스럽게 제거합니다. 바시트라신 수의학 안과 연고와 같은 안과 항균 연고를 쥐의 눈에 코팅합니다.

마취에서 완전히 회복될 때까지 1-2시간 동안 가열된 표면에서 마우스를 모니터링합니다. 완전히 복구되면 마우스를 케이지로 되돌립니다. 7일째의 망막은 2일째에 비해 세포 손상과 손실이 더 컸으며, 이는 허혈 및 재관류 후 시간이 지남에 따라 더 심각한 망막 퇴행을 나타냅니다.

개인의 조직병리학적 점수는 2일째에 비해 7일째에 망막의 대부분의 층에서 더 높았으며, 시간이 지남에 따라 병리학적 변화가 증가했음을 보여주었습니다. 총 조직학적 점수는 2일차보다 7일차에 유의하게 높았으며, 이는 망막 손상의 현저한 진행을 나타냅니다.