Nuestra investigación se centra en comprender cómo el ojo previene la inflamación de forma natural. Nuestra investigación ha demostrado que la vía del mielimán es esencial para suprimir la inflamación en el ojo y promover la supervivencia celular en la retina estresada. Esto sugiere que la inactivación de la vía del mielimo podría ser beneficiosa para el tratamiento de enfermedades generativas de la retina.
Este protocolo normaliza la presión intraocular antes de la retirada de la aguja, reduciendo el traumatismo de las estructuras oculares y limitando la lesión del componente de isquemia-reperfusión. Este refinamiento minimiza la variabilidad experimental causada por la manipulación física, mejorando la precisión de este modelo. Nuestra investigación promueve el concepto único de terapia en lugar de neutralizar moléculas para disminuir los síntomas con la esperanza de que las células puedan sobrevivir y volver a la normalidad.
Nos centramos en cambiar el comportamiento de las células implicadas en la enfermedad. Este enfoque tiene un gran potencial para proporcionar beneficios a largo plazo y resistencia a la recurrencia de enfermedades crónicas, ya que se induce la actividad celular normal. Nuestro modelo ha ofrecido una técnica refinada para estudiar la lesión por isquemia-reperfusión en el ojo del ratón.
Y esto puede ofrecer una representación más precisa de cómo responderían las estructuras intraoculares a una lesión por presión intraocular prolongada o por una lesión de reperfusión. Para empezar, prepare jeringas de solución salina estéril de cloruro de sodio al 0,9% conectadas a una línea de infusión y una llave de paso con una aguja de calibre 30 unida al extremo de la línea, una para cada ratón, y colóquelas a 120 centímetros por encima de la superficie del banco. Luego, enjuague todas las burbujas de aire de la línea.
A continuación, cree una cama para estabilizar al ratón cortando una depresión de aproximadamente seis por tres centímetros en una esponja y colocándola de forma segura en un pozo de espuma de poliestireno u otro recipiente plano. Después de anestesiar al ratón, dilatar el iris con una gota de tropicamida al 1% y esperar cinco minutos para la dilatación. Luego, coloque firmemente el ratón en el lecho de esponja debajo del microscopio.
Aplique una solución salina en los ojos para enjuagar cualquier residuo o pelo de la superficie del ojo. Con pinzas no dentadas, sostenga suavemente uno de los ojos. Luego, con la vía de infusión cerrada, canular la cámara anterior con la aguja aproximadamente a dos milímetros del limbo.
Asegúrese de que la aguja perfore la córnea perpendicularmente a la superficie curva periférica de la córnea, luego se aplana ligeramente paralela al plano del iris. Gire la llave de paso para pasar la línea de infusión y verifique que no haya fugas a través de la herida corneal. Asegurar una distensión gradual de la córnea a medida que aumenta la presión intraocular.
Con un tonómetro, verifique que la presión intraocular se haya elevado a 90 a 100 milímetros de mercurio. Asegure la línea de infusión con cinta adhesiva, asegurándose de que la aguja no cambie de posición y comience a gotear. Ahora, aplique un ungüento oftálmico como la bacitracina en el ojo para prevenir la sequedad.
Coloque el ratón lejos del microscopio bajo una lámpara de calefacción para mantener la temperatura corporal normal durante 60 minutos. Después de 60 minutos, vuelva a colocar el ratón en el microscopio. Baje la jeringa de solución salina al nivel del ratón para normalizar la presión intraocular.
Mide la presión intraocular con el tonómetro para comprobar que está cerca de lo normal, alrededor de 20 milímetros de mercurio. Una vez normalizado, retire con cuidado la aguja, evitando dañar el cristalino o el iris. Cubra los ojos del ratón con un ungüento antibacteriano oftálmico, como el ungüento oftálmico veterinario bacitracina.
Monitoree el ratón sobre una superficie caliente durante una o dos horas hasta que se recupere por completo de la anestesia. Una vez que esté completamente recuperado, regrese el ratón a su jaula. Las retinas en el séptimo día mostraron un mayor daño y pérdida celular en comparación con el segundo día, lo que indica una degeneración retiniana más severa con el tiempo después de la isquemia y la reperfusión.
Las puntuaciones histopatológicas individuales fueron más altas en la mayoría de las capas de la retina en el séptimo día en comparación con el segundo día, mostrando un aumento de los cambios patológicos con el tiempo. Las puntuaciones histológicas totales fueron significativamente más altas en el séptimo día que en el segundo día, lo que indica una marcada progresión en el daño retiniano.
