α-Synuclein凝集体の鼻腔内投与技術

パーキンソン病は、αシヌクレイン凝集体のプリオン様増殖を通じて発症し進行することが提唱されました。現在の研究では、パーキンソン病の嗅球におけるαシヌクレイン病理の起源を関連付けようとしています。近年、αシヌクレインの病理は、嗅球や大きなシナプスの背側核からプリオン様に伝播すると考えられています。

嗅球の起源であるαシヌクレイン凝集体は不明ですが、最近の研究では、嗅覚粘膜から伝播が交互に行われる可能性が示唆されています。私たちは、マウスモデルでのαシヌクレイン凝集体の別の投与に、嗅球にアルファシヌクレインの病理が誘発されることを示しました。この簡単な方法は、手術技術なしで嗅覚粘膜から嗅球へのアルファシヌクレインの伝播を評価する別の方法を提供します。

αシヌクレイン凝集体の鼻腔内投与は、非常にシンプルでわかりやすい方法です。まず、使い捨て手袋、マスク、安全ゴブルなどの個人用保護具を着用してください。マウスαシヌクレイン繊維溶液をPBS中に4ミリグラム/ミリリットルの濃度で調製し、チューブを透明フィルムで包んで汚染を防ぎます。

次に、超音波発生器の超音波浴に水を入れ、角氷を加えて摂氏4度に冷却します。200マイクロリットルのフィブリル溶液を超音波処理して、αシヌクレイン予備形成フィブリルを5分間生成します。麻酔をかけたマウスをペーパータオルの上に仰臥位に置き、頭を少し下に傾けます。

次に、1ミリグラム/ミリリットルのαシヌクレイン溶液のうち1マイクロリットルをP10ピペットに吸い込み、ピペットの先端をマウスの鼻の近くに置き、ピペットの先端に丸い液滴を形成します。次に、片側の鼻孔に溶液を鼻腔内に投与します。マウスが溶液を自然に吸い込むまで、30秒から1分待ちます。

20マイクロリットルのαシヌクレインが投与されるまで、このプロセスを繰り返します。αシヌクレイン投与後、溶液による汚染が発生した場合は市販の洗剤でベンチを洗浄し、手袋を廃棄し、その後、腹腔内注射によりアチパメゾールを1キログラムあたり3ミリグラムで投与して回復を促進します。.完全に回復したら、マウスをケージに戻します。

まず、αシヌクレイン予め形成された線維をマウスに鼻腔内投与します。マウスを安楽死させた後、メスで頭皮に2センチの切開を行います。ハサミを使用して、頭蓋骨の基部から鼻に向かって横方向に切開します。

嗅球を取得するには、嗅球を覆っている頭蓋骨を完全に取り除き、頭をひっくり返して脳神経を切断します。嗅球を無傷に保ちながら、鉗子で脳を慎重に取り除きます。球根を保存するために、頭蓋骨に付着する嗅神経を慎重に切断します。

脳サンプルをPBSで調製した4%パラホルムアルデヒドに入れ、摂氏4度で一晩保存します。治療側の嗅球では3ヶ月に1回後にはαシヌクレインの病態は認められなかったが、治療側の糸球体では6ヶ月後と12ヶ月後にレビー神経突起様Pαシヌクレイン凝集体が認められた。これらの凝集体は、制御側の球根には存在しませんでした。

レビー神経突起様αシヌクレイン凝集体の数は、治療側の嗅球で12か月にわたって有意に増加しましたが、対照側ではそのような凝集体はほとんどありませんでした。