α-突触核蛋白聚集体的鼻内给药技术

帕金森病被认为是通过 α 突触核蛋白聚集体的朊病毒样繁殖而发展和进展的。在目前的研究中，我们试图将帕金森病嗅球中 α 突触核蛋白病理学的起源联系起来。最近，α 突触核蛋白病理学被认为以朊病毒样方式传播，从嗅球或较大突触的背核开始。

尽管嗅球中 α 突触核蛋白聚集体的起源尚不清楚，但最近的研究表明，传播可能与嗅粘膜交替。我们表明，在小鼠模型中再次施用 α 突触核蛋白聚集体会在嗅球中诱导 α 突触核蛋白病理。这种简单的方法提供了另一种无需手术技术即可评估 α 突触核蛋白从嗅粘膜到嗅球传播的方法。

α 突触核蛋白聚集体的鼻内给药是一种非常简单明了的方法。首先，佩戴个人防护设备，例如一次性手套、口罩和安全手套。在 PBS 中制备浓度为 4 毫克/毫升的小鼠 α 突触核蛋白纤维溶液，并用透明薄膜包裹试管以防止污染。

然后，在超声波仪的超声波浴中装满水，并加入冰块将其冷却至 4 摄氏度。对 200 μL 原纤维溶液进行超声处理，生成 α 突触核蛋白预制原纤维，持续 5 分钟。将麻醉的老鼠仰卧在纸巾上，头部略微向下倾斜。

接下来，将每毫升 4 毫克 α 突触核蛋白溶液中吸取一微升，放入 P10 移液器中，并将移液器吸头靠近小鼠鼻子，在移液器吸头末端形成一个圆滴。现在，鼻内将溶液施用于单侧鼻孔。等待 30 秒到 1 分钟，让鼠标自然吸入溶液。

重复此过程，直到施用 20 μL α 突触核蛋白。α 突触核蛋白给药后，如果溶液发生任何污染，请用商业清洁剂清洁工作台并丢弃手套，然后通过腹膜内注射以每公斤 3 毫克的剂量给予阿替美唑以促进恢复。完全恢复后，将鼠标放回笼子里。

首先，将 α 突触核蛋白预制的原纤维鼻内给药给小鼠。对小鼠实施安乐死后，用手术刀在头皮上切开两厘米的切口。用剪刀从底部到鼻子横向切开颅骨。

要获得嗅球，请完全去除覆盖嗅球的颅骨，然后翻转头部并切断脑神经。用镊子小心地取出大脑，保持嗅球完好无损。为了保存球茎，小心地切断附着在颅骨上的嗅神经。

将脑样品放入 PBS 中制备的 4% 多聚甲醛中，并在 4 摄氏度下储存过夜。3 个月后 1 个月后在治疗侧的嗅球中未观察到 α 突触核蛋白病理，但在 6 个月和 12 个月后，在治疗侧的肾小球中观察到路易神经突样 P α 突触核蛋白聚集体。这些聚集体在控制侧的鳞茎中不存在。

在 12 个月内，处理侧嗅球中 Lewy 神经突样 α 突触核蛋白聚集体的数量显着增加，而对照侧的此类聚集体非常少。