טכניקה למתן תוך אפי של אגרגטים α-סינוקלאין

מחלת פרקינסון הוצעה להתפתח ולהתקדם באמצעות התפשטות דמוית פריון של אגרגטים אלפא סינוקלאין. במחקר הנוכחי אנו מנסים לקשר את מקור הפתולוגיה של אלפא סינוקלאין בפקעת הריח במחלת פרקינסון. לאחרונה, מאמינים כי פתולוגיית אלפא סינוקלאין מתפשטת באופן דמוי פריון, החל מפקעת הריח או הגרעין הגבי של הסינפסה הגדולה יותר.

למרות שמקור צבר אלפא סינוקלאין בפקעת הריח עדיין אינו ברור, מחקרים אחרונים מצביעים על כך שהתפשטות זו עשויה להשתנות מרירית חוש הריח. הראינו כי לתוך מתן אחר של אגרגטים אלפא סינוקלאין במודל העכבר המושרה אלפא סינוקלאין פתולוגיה בנורת הריח. שיטה פשוטה זו מספקת דרך נוספת להעריך את התפשטות אלפא סינוקלאין מרירית חוש הריח אל פקעת הריח ללא טכניקת ניתוח.

ניהול תוך אפי של צבר אלפא סינוקלאין היא שיטה פשוטה ופשוטה מאוד. בתור התחלה, לבשו ציוד מגן אישי, כגון כפפות חד פעמיות, מסכות ומשקפי בטיחות. הכינו תמיסת סיבי אלפא סינוקלאין בעכבר ב-PBS בריכוז של ארבעה מיליגרם למיליליטר ועטפו את הצינור בסרט שקוף למניעת זיהום.

לאחר מכן, למלא את האמבטיה קולית של sonicator עם מים ולהוסיף קוביות קרח כדי לקרר אותו לארבע מעלות צלזיוס. סוניק 200 מיקרוליטר של תמיסת הפיבריל כדי לייצר סיבי אלפא סינוקלאין מוכנים במשך חמש דקות. הניחו עכבר מורדם במצב שכיבה על מגבת נייר, כשראשו מוטה מעט כלפי מטה.

לאחר מכן, ציירו מיקרוליטר אחד מתוך ארבעת המיליגרם לתמיסת אלפא סינוקלאין למיליליטר לתוך פיפטה P10 והניחו את קצה הפיפטה ליד אפו של העכבר כדי ליצור טיפה עגולה בקצה קצה הפיפטה. עכשיו, תוך האף לנהל את הפתרון לנחיר חד צדדי. המתן 30 שניות עד דקה כדי לאפשר לעכבר לשאוף את הפתרון באופן טבעי.

חזור על תהליך זה עד 20 מיקרוליטר של אלפא סינוקלאין מנוהל. לאחר מתן אלפא סינוקלאין, לנקות את הספסל עם דטרגנטים מסחריים אם זיהום כלשהו עם התמיסה מתרחשת ולהשליך את הכפפות, ולאחר מכן לנהל atipamezole בשלושה מיליגרם לק"ג על ידי הזרקה intraperitoneal כדי להקל על ההתאוששות. לאחר התאוששות מלאה, להחזיר את העכבר לכלוב.

כדי להתחיל, לתת אלפא סינוקלאין סיבים מוכנים intranasally לעכברים. לאחר המתת העכבר, לבצע חתך של שני סנטימטרים בקרקפת עם אזמל. באמצעות מספריים, לחתוך את עצם הגולגולת לרוחב מן הבסיס אל האף.

כדי להשיג את נורות הריח, להסיר לחלוטין את עצם הגולגולת המכסה את נורות הריח, ולאחר מכן, להפוך את הראש לנתק את עצבי המוח. בזהירות להסיר את המוח עם מלקחיים, שמירה על נורות הריח שלם. כדי לשמר את הנורות, לחתוך בזהירות את עצבי הריח כפי שהם מתחברים לעצם הגולגולת.

הכניסו את דגימות המוח לאלדהיד פרפורמי 4% שהוכן ב-PBS ואחסנו אותן בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. פתולוגיה של אלפא סינוקלאין לא נצפתה בפקעת הריח בצד המטופל לאחר אחד לשלושה חודשים, אך אגרגטים דמויי P אלפא סינוקלאין דמויי נויריט נצפו בגלומרולי בצד המטופל לאחר שישה ו -12 חודשים. אגרגטים אלה נעדרו בנורות בצד הבקרה.

מספר אגרגטי אלפא סינוקלאין דמויי נויריט לוי גדל באופן משמעותי בנורות הריח בצד המטופל במשך 12 חודשים, בעוד שבצד הבקרה היו מעט מאוד אגרגטים כאלה.