تقنية الإعطاء داخل الأنف لمجاميع α-Synuclein

تم اقتراح مرض باركنسون للتطور والتقدم من خلال الانتشار الشبيه بالبريون لمجاميع ألفا سينوكلين. في الدراسة الحالية ، نحاول ربط أصل علم أمراض ألفا سينوكلين في البصلة الشمية في مرض باركنسون. في الآونة الأخيرة ، يعتقد أن علم أمراض ألفا سينوكلين ينتشر بطريقة تشبه البريون ، بدءا من البصلة الشمية أو النواة الظهرية للمشبك الأكبر.

على الرغم من أن أصل تجمع ألفا سينوكلين في البصلة الشمية لا يزال غير واضح ، إلا أن الدراسات الحديثة تشير إلى أن الانتشار قد يتناوب عن الغشاء المخاطي الشمي. أظهرنا أنه في إدارة أخرى لمجاميع ألفا سينوكلين في نموذج الفأر تسبب في علم أمراض ألفا سينوكلين في البصلة الشمية. توفر هذه الطريقة البسيطة طريقة أخرى لتقييم انتشار ألفا سينوكلين من الغشاء المخاطي الشمي إلى البصلة الشمية بدون تقنية جراحية.

يعد الإعطاء داخل الأنف لمجموع ألفا سينوكلين طريقة بسيطة ومباشرة للغاية. للبدء ، ارتد معدات الحماية الشخصية ، مثل القفازات والأقنعة التي تستخدم لمرة واحدة ومواد الأمان. قم بإعداد محلول ألياف ألفا سينوكلين للفأر في PBS بتركيز أربعة ملليغرام لكل مليلتر ولف الأنبوب بغشاء شفاف لمنع التلوث.

ثم املأ الحمام بالموجات فوق الصوتية لجهاز الصوتنة بالماء وأضف مكعبات الثلج لتبريده إلى أربع درجات مئوية. صوتيات 200 ميكرولتر من محلول الألياف لتوليد ألفا سينوكلين ألياف مسبقة التشكيل لمدة خمس دقائق. ضع فأرة مخدرة في وضع ضعيف على منشفة ورقية ، مع إمالة رأسه قليلا لأسفل.

بعد ذلك ، اسحب ميكرولتر واحدا من محلول ألفا سينوكلين المكون من أربعة ملليغرام لكل مليلتر في ماصة P10 وضع طرف الماصة بالقرب من أنف الماوس لتشكيل قطرة دائرية في نهاية طرف الماصة. الآن ، قم بإدارة حل فتحة الأنف أحادية الجانب. انتظر لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة للسماح للفأر باستنشاق المحلول بشكل طبيعي.

كرر هذه العملية حتى يتم إعطاء 20 ميكرولتر من ألفا سينوكلين. بعد إعطاء ألفا سينوكلين ، قم بتنظيف المقعد بمنظفات تجارية في حالة حدوث أي تلوث بالمحلول وتخلص من القفازات ، ثم قم بإعطاء أتيباميزول بمعدل ثلاثة ملليغرام لكل كيلوغرام عن طريق الحقن داخل الصفاق لتسهيل الشفاء. بعد الشفاء التام ، أعد الماوس إلى القفص.

للبدء ، قم بإعطاء ألفا سينوكلين الألياف المشكلة داخل الأنف للفئران. بعد القتل الرحيم للفأر ، قم بعمل شق بطول سنتيمترين في فروة الرأس بمشرط. باستخدام المقص ، قم بشق عظم الجمجمة بشكل جانبي من القاعدة إلى الأنف.

للحصول على البصيلات الشمية ، قم بإزالة عظم الجمجمة الذي يغطي البصيلات الشمية تماما ، ثم اقلب الرأس واقطع أعصاب الدماغ. قم بإزالة الدماغ بعناية باستخدام ملقط ، مع الحفاظ على البصيلات الشمية سليمة. للحفاظ على البصيلات ، قم بقطع الأعصاب الشمية بعناية لأنها تلتصق بعظم الجمجمة.

ضع عينات الدماغ في 4٪ من الألدهيد الطلائلي المحضر في PBS وقم بتخزينها عند أربع درجات مئوية طوال الليل. لم يلاحظ علم أمراض ألفا سينوكلين في البصلة الشمية على الجانب المعالج بعد شهر واحد من كل ثلاثة أشهر ، ولكن شوهدت مجاميع ليوي نيوريت الشبيهة ب P alpha synuclein في الكبيبات على الجانب المعالج بعد ستة و 12 شهرا. كانت هذه الركام غائبة في المصابيح على جانب التحكم.

زاد عدد مجاميع ألفا سينوكلين الشبيهة بالنيوريت ليوي بشكل كبير في البصيلات الشمية على الجانب المعالج على مدى 12 شهرا ، في حين أن الجانب الضابط كان يحتوي على عدد قليل جدا من هذه المجاميع.