プローブエレクトロスプレーイオン化質量分析のためのサンプル調製

したがって、これはユニークな周囲質量分析であり、特に生体外および生体内の両方の生物学的サンプルの分析に適しています。これは、細胞の並べ替え、分画、および濃度などのサンプルの特別な前処理を定期的に必要としないので、生物学的成分、特に非常に少量として存在するものの最小損失でサンプルを分析することができます。この技術により、質量分析法により、原料物質を1分間で直接分析することができます。

迅速性は、システムの堅牢性、この技術に固有の主な利点で妨げられない。あなたがしなければならないのは、シリカ、10ミリグラムの組織標本、および10マイクロリットルの増殖を準備することだけです。そして、使い捨てカートリッジにそれらを入れてください。

これは、PESI-MSマシンに設定され、数分で結果が得られます。適切な質量分析計を選択することで、分子の同一性にアポイントニングすることができます。まず、冷凍庫から肝臓または腎臓組織を取り出します。

コルク板で、メスやナイフを使って組織標本を約2個2×2ミリメートルに切ります。または、サンプルをトレパンでパンチアウトし、カラムの長さを2ミリメートルにトリミングします。組織が血液で汚染されている場合は、氷冷リン酸緩衝生理食塩水で短時間洗います。

約10ミリグラムの切り取りまたはパンチアウトサンプルをプラスチックマイクロチューブに入れ、100マイクロリットルの50%エタノールを加えます。サンプルを均質化するためにマイクロペステスルを使用してください。次にピペットマンとともに、ホモネートの10マイクロリットルを質量分析計のカートリッジのウェルに入れる。

直接プローブイオン化質量分析計のイオン化チャンバーにカートリッジを置き、サンプルイオン化に使用するステンレススチールニードルプローブを取り付けます。チャンバーの蓋をしっかりと閉じて、安全装置を自動的に作動させます。画面上のパネルを使用して、分析するスタートアイコンをクリックしてオンボードコンピュータを起動し、エレクトロスプレーを生成し、針の周波数が3ヘルツであることを確認するために針に2.3キロボルトの電圧を適用します。

測定が完了するまで30秒待ちます。各サンプルを測定した後、カートリッジと針をバイオハザード・プロジャーに入れて配置します。質量スペクトルを解析するには、質量分析計に関連付けられたソフトウェアを開きます。

ソフトウェアのデータファイルブラウザウィンドウでL-C-Dファイルをクリックします。マススペクトルウィンドウの単一のピークをクリックして選択し、自動的にE-I-Cを描写します。T-I-CとE-I-Cを確認し、平均スペクトルアイコンをクリックして、マススペクトルを生成する時間枠の範囲を選択します。

マススペクトルテキストデータをエクスポートします。体液を分析するには、最大10マイクロリットルの血清サンプルを採取し、1.5ミリリットルのマイクロチューブに分配します。50%エタノールの190マイクロリットルをチューブに加え、室温で2分間渦を加えます。

すべての赤血球を排除するために、液体を摂氏4度で1〜5分間Gの15,000倍に遠心分離する。上清の10マイクロリットルをカートリッジのウェルに移し、以前のように質量分析計で測定に進みます。このプロトコルは、固体試料、液体サンプル、および生きている動物に対するPESI-MSのサンプル調製物を示す。

ヒト腎細胞癌は、中性脂質の特徴的なピークを示す。周囲の非癌組織では同定されなかったヒト腎細胞癌組織からの900の質量電荷比でスペクトルに比較的強いピークがあった。これらのピークは主にトリアシルグリセロールを表す。

正常な肝組織で取得したデータの例は、慢性肝炎および肝硬変を有する患者からの新生性病変を描写した。3人体からのヒト血清をPESI-MSを用いて分析し、個体間のスペクトルパターンに明確な違いがあった。マウスの尾血管に静脈内に注入された5-FdUの代謝変化については、インセクツ中の肝臓において、5-FdUの非常に迅速かつ敏感な検出が肝臓で達成された。

組織の部位からの針先端の深さは、データ取得の成功を読み取るイオン化において最も重要な役割を果たし、指示に従うようにしてください。分子種を識別するには、商用データベースを調べています。これは、病気の分子メカニズムを修飾する方法です。

多くの研究者は、病気の繁栄を予測するためのこの技術の応用に興味を持つようになり、予後です。特にくる病生検を使用する。ただ、プローブ針に刺されないようにしてください。

これは機械から針を取除く特定の器械によって単に避けることができる。