Il s’agit donc d’une spectrométrie de masse ambiante unique, particulièrement adaptée à l’analyse d’échantillons biologiques, in vitro et in vivo. Comme cela ne nécessite pas régulièrement un prétraitement spécial des échantillons, comme le tri cellulaire, la fractionnement et la concentration, il peut analyser un échantillon avec une perte minimale de composants biologiques, en particulier ceux qui existent comme très petite quantité. Cette technique vous permet d’analyser les matières premières directement en une minute par spectrométrie de masse.
La rapidité se détériore dans la robustesse du système, principaux avantages inhérents à cette technique. Tout ce que vous avez à faire est de simplement préparer la silice, 10 milligrammes de tissu spécimen, et 10 microlitres de proliférer. Et mettez-les dans une cartouche jetable.
Il est réglé sur la machine PESI-MS, et vous obtiendrez le résultat en quelques minutes. En choisissant le spectromètre de masse approprié, vous pouvez annoter l’identité moléculaire. Pour commencer, récupérez le foie ou le tissu rénal du congélateur.
Sur une plaque de liège, couper le spécimen de tissu à environ deux par deux par deux millimètres à l’aide d’un scalpel ou d’un couteau. Alternativement, frappez l’échantillon avec le Trepan et coupez la longueur de la colonne à deux millimètres. Si le tissu est contaminé par du sang, lavez-le brièvement avec de la solution saline tamponnée de phosphate glacé.
Placer environ 10 milligrammes de l’échantillon coupé ou perforé dans un microtube en plastique et ajouter 100 microlitres de 50 % d’éthanol. Utilisez un micropestre pour homogénéiser l’échantillon. Ensuite, avec le pipetman, placez 10 microlitres de l’homogénéité dans le puits de la cartouche du spectromètre de masse.
Placez la cartouche dans la chambre d’ionisation du spectromètre de masse d’ionisation de sonde directe et installez la sonde d’aiguille de vol inoxydable qui sera employée pour l’ionisation d’échantillon. Fermez fermement le couvercle de la chambre pour activer automatiquement le dispositif de sécurité. Démarrez l’ordinateur de bord en cliquant sur l’icône de démarrage pour analyser, à l’aide des panneaux à l’écran, appliquer une tension de 2,3 kilovolts à l’aiguille pour générer l’électrospray et s’assurer que la fréquence de l’aiguille est de trois hertz.
Attendez 30 secondes pour que la mesure soit terminée. Après avoir mesuré chaque échantillon, jetez la cartouche et l’aiguille dans un disposer biohazard. Pour analyser les spectres de masse, ouvrez le logiciel associé au spectromètre de masse.
Cliquez sur le fichier L-C-D dans la fenêtre du navigateur de fichiers de données du logiciel. Choisir de cliquer sur un seul pic de la fenêtre de spectre de masse, et de représenter automatiquement un E-I-C. Vérifiez le T-I-C et l’E-I-C, et cliquez sur l’icône moyenne du spectre pour sélectionner la plage de temps pour générer le spectre de masse.
Exportez les données de texte spectral de masse. Pour analyser les fluides corporels, dessinez jusqu’à 10 microlitres de l’échantillon de sérum et distribuez-le dans un microtube de 1,5 millilitre. Ajouter 190 microlitres de 50% d’éthanol au tube, puis vortex pendant deux minutes à température ambiante.
Pour éliminer tous les globules rouges, centrifugez le liquide à 15 000 fois G pendant une à cinq minutes à quatre degrés Celsius. Transférer 10 microlitres du supernatant dans le puits de la cartouche et procéder à mesurer sur le spectromètre de masse comme précédemment. Ce protocole montre la préparation de l’échantillon pour pesi-MS sur l’échantillon solide, l’échantillon liquide, et l’animal vivant.
Le carcinome rénal humain de cellules montre des crêtes caractéristiques des lipides neutres. Il y avait des pics relativement forts dans les spectres au rapport masse-charge de 900 du tissu humain de carcinome rénal de cellules qui n’ont pas été identifiés dans le tissu non cancéreux environnant. Ces pics représentent principalement le triacyl glycérol.
L’exemple des données acquises dans les tissus normaux de foie, a dépeint la lésion néoplastique d’un patient présentant l’hépatite chronique et la cirrhose de foie. Le sérum humain de trois individus a été analysé utilisant PESI-MS, il y avait des différences claires dans les modèles spectraux parmi les individus. Pour les changements métaboliques de 5-FdU injectés par voie intraveineuse dans le vaisseau arrière d’une souris, la détection très rapide et sensible de 5-FdU avec adducteur de sodium a été réalisée dans le foie in situ.
Comme la profondeur de la pointe de l’aiguille à partir du site du tissu, joue le rôle le plus important dans l’ionisation qui lit l’acquisition de données réussie, assurez-vous de suivre les instructions. Vous pouvez identifier les espèces moléculaires en regardant dans la base de données commerciale. C’est une façon de qualifier le mécanisme moléculaire de la maladie.
De nombreux chercheurs se sont intéressés à l’application de cette technique pour prédire la prospérité de la maladie et son pronostic. Surtout en utilisant la biopsie ricket. Assurez-vous juste de ne pas être piqué par l’aiguille de la sonde.
Ceci peut être simplement évité avec un instrument spécifique pour enlever l’aiguille de la machine.
