著者は、動物飼育のリネア Tankred とダイアナの Rydholm をありがとうございます。

どちらの性別の BALB/c マウスの子犬は、Ophthalmologic とビジョンの研究における動物の使用のためステートメントに従って使用され、プロトコルは、倫理的な動物の研究のための委員会によって承認されました。マウスが一緒に 12 時間昼/夜サイクル、食料と水への無料アクセスと、看護の母の仔で収容され、毎日監視します。
注: 外科的処置マウスと揮発性のイソフルレン麻酔下で保たれました。眼軟膏は眼の処置中に推奨されません彼らは治療に使用される物質を妨げる可能性があります。必要に応じて、ドライ眼を防ぐために滅菌生理食塩水一滴適用できます。脈絡膜穿刺が自己治癒が、された脈絡膜穿刺中ように注意不妊手術器具で。手術後の治療と生理食塩水を皮下、含まれて、テトラカイン塩酸塩の眼局所投与による鎮痛効果。子犬は、胸骨の横臥加熱パッドの上にきれいなケージで看護の母に返される前に回復を許されました。リットルは、ストレスを避けるために同じ看護母と保たれました。
1. 麻酔
<ol><li>イソフルラン麻酔の管理、マウスの小さなマスクをまた結合することを確認し、麻酔誘導室を準備します。 注: は、すべての該当する倫理的な許可に一致してすべての動物実験を実行します。</li>
	<li>3-4% 大気中揮発性イソフルランと誘導室を自動設定します。 注: 別の麻酔物質をイソフルランよりも他に従って使用する、倫理的な許可。揮発性麻酔薬の手順は、換気のベンチやヒューム フードに行われるべき。</li>
	<li>場所誘導室で産後 (P) 12.5 日古い BALB/c マウス子犬。麻酔器誘導室にイソフルランを提供する準備ができたことを確認します。 注: マウスの子犬は、壊れやすいと襟首最高処理。ストレスを避けるために看護の母、ごみとして子犬を一緒に保ちます。</li>
	<li>麻酔が完全に子犬を許可します。</li>
	<li>そっと首筋をマウスの子犬を拾います。 注意: 安全で安定した誘導のすべての回で閉じた誘導室。</li>
	<li>齧歯動物のマスクにマウスを転送します。マウスを移動するときに誘導室からの麻酔の流れをマスクに切り替えることを確認します。</li>
	<li>つま先ピンチ麻酔を確認するを実行します。</li>
</ol>2. 穿刺手術万国実体写真の下のプロシージャ
<ol><li>横臥床位置にマウスを配置します。マウス眼、万国実体写真のビューのフィールドでは、マスクはよく配置を確認します。</li>
	<li>優しく、万国実体写真へ目が向いているのでマウスの頭を回転させます。 注: での株分け業目の明確な焦点を達成べきであります。40 X を使用して、手術の手順を実行する必要がありますがの位置決めは 16 X の倍率をお勧めします。倫理的な許可許可されている場合、ひげの先端をトリミングで目の可視化を促進できます。</li>
	<li>背側と腹側の目にまぶたに下向きの圧力を適用することによって子犬の目を突出する小さな抱き合わせ鉗子を使用して、慎重に。</li>
	<li>小鉗子で子犬のまぶたの優しいがしっかりホールドを保ちます。 注: 眼球突出を実行し、非支配的な手で押し蓋の利き手は穿刺の手順を実行する必要があります、それをお勧めします。</li>
	<li>株分け業を使用して、角膜の輪部を探します。アルビノ BALB/c 角膜は、角膜の後方循環の血管叢によって簡単に識別できます。</li>
	<li>0.25 mm 直径 (30 G) 斜め針でブドウの後方の輪部の限界近くの小さな脈絡膜穿刺を実行します。針の先端のみを使用・ (0.5 mm 相当)、以上 2 のベベル穿刺ブドウ。脈絡膜穿刺、セルフシール、正常に実行された場合はまだ研究物質の眼内注射は同じの刺し傷を介して管理できます。 注: マウス眼球解剖を経験、鋸状の毛様体と脈絡膜穿刺が実行されます。注意が必要脈絡膜穿刺を行っている間、レンズの破裂を避けるために。</li>
	<li>最初の穿刺部位から目の反対側のサイトの 2 番目の脈絡膜穿刺を実行します。穿刺の位置や距離を最適化します。できるだけ背側にされている 12 の 12 と 6 刺し傷を検討してください。</li>
	<li>P24.5 まで 4 日毎脈絡膜穿刺の手順を繰り返します。すべての連続した脈絡膜穿刺前に脈絡膜穿刺または明白な減少の眼圧の基礎値の間にレンズの損傷による外傷性白内障の存在に特に注意を払って動物の状態を監視します。最適な効果の前のパンクと同じ位置に繰り返し穿刺の実行を目指してください。</li>
</ol>3. 非侵襲体内監視
<ol><li>穿刺や各実験日に注射の前に上記で実行としてマウスを麻酔します。</li>
	<li>横臥床位置にマウスでそっと目を突出します。</li>
	<li>手術万国実体写真虹彩血管に焦点を当てます。</li>
	<li>手術万国実体写真に合うカメラで虹彩血管の写真を撮る。 注: 必要のない、減数分裂を誘導できますアイリス動物面積を正規化します。減数分裂誘導剤を選択する際は、倫理的な許可を検討してください。慎重にフォーカス虹彩血管のいる場合は、さらに定量分析が容易になります。40 倍の大きさをお勧めします。</li>
</ol>4. 手術後のケア
<ol><li>齧歯動物のマスクから BALB/c 子犬を外し、優しく手術マット層加熱パッドに転送。</li>
	<li>パンクの目に 1% テトラカイン溶液の一滴を適用します。 注: 他の鎮痛ソリューション使用できます、倫理的な許可によると。</li>
	<li>200 μ L の滅菌生理食塩水の皮下注入で動物をメタンハイド レートします。</li>
	<li>子犬をマウスのきれいなケージで看護の母に戻ります。</li>
	<li>リカバリ ・ プロセスを監視します。子犬は、deambulate、くずに戻るはずです。</li>
</ol>5. 眼球摘出
<ol><li>頚部転位によって、動物を安楽死させます。プロシージャのより良い視覚化の摘出と堅実の下郭清を実行します。 注: 異なる安楽死プロシージャを使用できます。倫理的な許可を遵守することをお勧めします。</li>
	<li>目に露出を改善するまぶたを離れて引っ張る。</li>
	<li>眼蓋の外眼角近く湾曲したボン目はさみで小さなカット (約 0.5 cm) を作る。</li>
	<li>軌道に (下) 世界の背後にあるマイクロ抱き合わせ鉗子を挿入するのに露出眼周囲スペースを使用します。</li>
	<li>目を囲む組織をつかむし、そっと上に引き上げます。眼球に保持しないでください、目のソケットを使って、周囲の組織に近い。</li>
	<li>軌道で、眼球の後ろに湾曲したボン目はさみを挿入します。</li>
	<li>目がソケットから外れるまで、周囲の組織をカットします。 注: この手法の目の解剖学を維持し、その後の分析の利点します。</li>
	<li>目から余分な組織の除去に進みます。好ましい場合、固定した後余分な組織の除去を実行できます。 注: BALB/c マウスは、メラニン欠乏、したがって、コントラスト、暗い背景勧め術を容易にします。</li>
	<li>簡単に滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 満ちているペトリ皿でリンス全体目。</li>
	<li>目を 4% 緩衝ホルマリン溶液 1.5 mL を含む 2 mL チューブに転送します。</li>
	<li>室温で 6 時間目を修正します。 注: 固定組織の剛性を付与して虹彩の解剖が容易になります。時間を修正する必要がありますテストおよび調整するさまざまなアプリケーション。</li>
</ol>6 万国実体写真下アイリス術
<ol><li>固定液をチューブ 1.5 mL プラスチック パスツール ピペット (または類似した) から外し、新鮮な PBS の 3 回目を洗います。</li>
	<li>上向き、前房内で滑らかな乾燥表面 (解剖台) に固定の目を配置します。</li>
	<li>ベベル 30 G 針と角膜の後方のエントリ ポイントを実行します。</li>
	<li>小さな抱き合わせ鉗子で前部を持ち、以前に作成したオープニングに clayman 氏による Vannas ストレートはさみの先端を挿入します。 注: 非支配的な手で、鉗子と、支配的なシザーを制御することをお勧めします。</li>
	<li>回転させながら抱き合わせ鉗子が付いている目は目の後方のセグメントを削除する角膜の周りカット。 注: に部分的なカットを実行する組織と大きく継続するハサミの内側先端プロセスを容易になります。</li>
	<li>下向き、レンズを公開する前のセグメントを配置します。</li>
	<li>小鉗子でつかんで、上に引き上げ、レンズを慎重に削除します。 注: ベベル針は穿刺し、レンズをプルする使用できます。</li>
	<li>下向き角膜とビューのフィールドに垂直カット前のセグメントを配置します。</li>
	<li>優しく小さな抱き合わせ鉗子で後部毛様体組織をつかみます。</li>
	<li>Clayman 氏による Vannas まっすぐハサミ小柱網を外し、虹彩を分離する毛様体にちょうど前方トリムに進みます。小柱網が削除されたことを確認します。虹彩は角膜内移動する必要があります。</li>
	<li>200 μ L の PBS を含む 96 ウェル プレートに、角膜を押さえ、小さな抱き合わせ鉗子で前方のアイカップを慎重に転送します。</li>
	<li>井戸に角膜を保持し続けるそしてピペットで PBS でフラッシュして虹彩を解剖します。 注: 現在・ 30 G 針の傾斜面にいくつかの小柱網、角膜にアイリスのまま付着可能性がある場合は、虹彩を置換する使用できます。</li>
	<li>小さな抱き合わせ鉗子で 96 ウェルから角膜を削除し、孤立したアイリスをおいてさらに分析用の井戸。</li>
	<li>4 ° C でフローティング虹彩サンプルを格納します。 注: 固定されているにもかかわらずアイリス浮遊サンプルの長期保存は推奨されません。</li>
</ol>7. 可能な実験的読み出し
<ol><li>切り裂かれたアイリスの血管を可視化、フローティング ホール マウント免疫血小板内皮細胞接着分子 (PECAM)-1 のようなマーカーのための染色法を使用して、または isolectin B4。また、蛍光標識高分子量 dextrans などの血管の染色と全身灌流を使用します。</li>
	<li>インシリコフラット マウントを実行し、適切なイメージング ソフトウェアにおける虹彩血管を定量化する生体内で非侵襲的画像を使用します。 注: 血管を定量化することができます、両方との in vitro、デンシトメトリーを使用してまたは血管解析ソフトウェア9。</li>
	<li>核酸とタンパク質抽出、PCR または免疫ブロット方法、パンクした目の分子生物学的解析を実行する全体の眼球を処理します。 注: 組織の分子解析は、非固定ティッシュ最高実行行われますが非固定アイリスの解剖が非常に挑戦的な全体の目の使用が以前の研究8で統計的に有意な結果を表示しました。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterior+collateral+circulation+in+the+primate+eye.">Anterior collateral circulation in the primate eye.</a> Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).</li><li>Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+Angiogenesis.">Ocular Angiogenesis.</a> J Ophthalmol. 2015, 892043 (2015).</li><li>Breuss, J. M., Uhrin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-initiated+angiogenesis+and+the+uPA/uPAR+system.">VEGF-initiated angiogenesis and the uPA/uPAR system.</a> Cell Adh Migr. 6 (6), 535-615 (2012).</li><li>Rodrigues, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascular+glaucoma:+a+review.">Neovascular glaucoma: a review.</a> Int J Retina Vitreous. 2, 26 (2016).</li><li>Stahl, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+retina+as+an+angiogenesis+model.">The mouse retina as an angiogenesis model.</a> Invest Ophth Vis Sci. 51 (6), 2813-2826 (2010).</li><li>DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+wound+repair:+when+enough+is+enough.">Angiogenesis and wound repair: when enough is enough.</a> J Leukocy Biol. 100 (5), 979-984 (2016).</li><li>Eming, S., Brachvogel, B., Odorisio, T., Koch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+angiogenesis:+Wound+healing+as+a+model.">Regulation of angiogenesis: Wound healing as a model.</a> Prog Histochem Cytoc. 42 (3), 115-170 (2007).</li><li>Beaujean, O., Locri, F., Aronsson, M., Kvanta, A., Andr&#233;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+in+vivo+model+of+puncture-induced+iris+neovascularization.">A novel in vivo model of puncture-induced iris neovascularization.</a> PloS One. 12 (6), e0180235 (2017).</li><li>Zudaire, E., Gambardella, L., Kurcz, C., Vermeren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Computational+Tool+for+Quantitative+Analysis+of+Vascular+Networks.">A Computational Tool for Quantitative Analysis of Vascular Networks.</a> PloS One. 6 (11), (2011).</li><li>Dorrell, M., Uusitalo-Jarvinen, H., Aguilar, E., Friedlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+neovascularization:+basic+mechanisms+and+therapeutic+advances.">Ocular neovascularization: basic mechanisms and therapeutic advances.</a> Surv Ophthalmol. 52 Suppl 1, S3-S19 (2007).</li><li>Kvanta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+angiogenesis:+the+role+of+growth+factors.">Ocular angiogenesis: the role of growth factors.</a> Acta Ophthalmol. 84 (3), 282-288 (2006).</li><li>Salman, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasilicone+Bevacizumab+Injection+for+Iris+Neovascularization+after+Vitrectomy+for+Proliferative+Diabetic+Retinopathy.">Intrasilicone Bevacizumab Injection for Iris Neovascularization after Vitrectomy for Proliferative Diabetic Retinopathy.</a> Ophthalmic Res. 49 (1), 20-24 (2013).</li><li>Jeong, Y. C., Hwang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology+and+Features+of+Eyes+with+Rubeosis+Iridis+among+Korean+Patients:+A+Population-Based+Single+Center+Study.">Etiology and Features of Eyes with Rubeosis Iridis among Korean Patients: A Population-Based Single Center Study.</a> PloS One. 11 (8), e0160662 (2016).</li><li>Speier, S., Nyqvist, D., K&#246;hler, M., Caicedo, A., Leibiger, I. B., Berggren, P. -. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+high-resolution+in+vivo+imaging+of+cell+biology+in+the+anterior+chamber+of+the+mouse+eye.">Noninvasive high-resolution in vivo imaging of cell biology in the anterior chamber of the mouse eye.</a> Nat Protoc. 3 (8), 1278-1286 (2008).</li><li>Stefansson, E., Landers, M. B., Wolbarsht, M. L., Klintworth, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neovascularization+of+the+Iris+-+an+Experimental-Model+in+Cats.">Neovascularization of the Iris - an Experimental-Model in Cats.</a> Invest Ophth Vis Sci. 25 (3), 361-364 (1984).</li><li>Nork, T. M., Tso, M., Duvall, J., Hayreh, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Mechanisms+of+Iris+Neovascularization+Secondary+to+Retinal+Vein+Occlusion.">Cellular Mechanisms of Iris Neovascularization Secondary to Retinal Vein Occlusion.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 107 (4), 581-586 (1989).</li><li>Hjelmeland, L. M., Stewart, M. W., Li, J. W., Toth, C. A., Burns, M. S., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Experimental-Model+of+Ectropion+Uveae+and+Iris+Neovascularization+in+the+Cat.">An Experimental-Model of Ectropion Uveae and Iris Neovascularization in the Cat.</a> Invest Ophth Vis Sci. 33 (5), 1796-1803 (1992).</li><li>Tolentino, M. J., Miller, J. W., Gragoudas, E. S., Chatzistefanou, K., Ferrara, N., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor+is+sufficient+to+produce+iris+neovascularization+and+neovascular+glaucoma+in+a+nonhuman+primate.">Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate.</a> Arch Ophthalmol-Chic. 114 (8), 964-970 (1996).</li><li>Paula, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+Rubeosis+Iridis+Induced+by+Intravitreal+Latex-derived+Angiogenic+Fraction.">Rabbit Rubeosis Iridis Induced by Intravitreal Latex-derived Angiogenic Fraction.</a> Curr Eye Res. 36 (9), 857-859 (2011).</li><li>Takei, A., Ekstr&#246;m, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Transfer+of+Prolyl+Hydroxylase+Domain+2+Inhibits+Hypoxia-inducible+Angiogenesis+in+a+Model+of+Choroidal+Neovascularization.">Gene Transfer of Prolyl Hydroxylase Domain 2 Inhibits Hypoxia-inducible Angiogenesis in a Model of Choroidal Neovascularization.</a> Sci Rep. 7, 42546 (2017).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

この議定書でアイリス脈絡膜穿刺による血管反応の誘導手法を提案する.穿刺は、創傷治癒のメカニズムをトリガーし、アイリス10,11血管反応を促進します。これはラオスと NVG、目の後方のセグメントで網膜から悪化血管新生反応が虹彩ルベオーシス、アイリス12 の増加血管新生の臨床状態で絶頂に達するなど、眼の病態と一致してい?...

虹彩、毛様体と脈絡膜には、目の最も血管柄付きの組織であるブドウが装備されています。虹彩血管は目の前房内の恒常性を維持するために不可欠です。動脈と静脈との間豊富な吻合部の接続の結果として虹彩血管は栄養素自体は、アイリスにだけでなく、目1の全体の前部に酸素の供給を提供します。
新しい血管や既存の物から血管新生の形成が開発や創傷治癒2などの生理学的プロセスの基礎。血管新生は血管内皮増殖因子 (VEGF)、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤 (PAI) などの標準的な要因だけでなく、複数の炎症性要因の多数によって細かく規制されて、これらの因子の不均衡は病理学的につながることができます。新生3。
目の血管新生増殖糖尿病網膜症 (ラオス) と新生血管緑内障 (NVG) などの視力を脅かす疾患の原因であります。これらの眼の疾患に焦点の血管新生は一般的網膜組織まだ炎症性の不均衡に位置し、後方と前方眼両院で目の血管新生因子は虹彩ルベオーシス、関連付けられている、アイリス病理学的促進4臨床用語。これらの病態は、血管新生を受ける成人のアイリスの能力を示しています。マウスで眼の血管は出生後成熟していないと産後の成熟を続けています。開発のこの特徴は、酸素誘起性網膜症、未熟児5の網膜症の臨床症状によく似たモデルのマウスモデルで利用されます。さらに、血管新生と炎症創傷治癒のメカニズム6、極めて重要な役割を果たすし、創傷治癒の自体が血管新生モデル7に関連付けられています。
本研究ではアイリスの穿刺による血管新生のモデルをについて説明します。脈絡膜穿刺は、創傷治癒システムをトリガーすることによって虹彩血管新生を誘導する角膜輪部の外側の限界近く実行されます。角膜の透明性のため虹彩血管をすることができます簡単に生体内で非侵襲的方法で分析します。パンクした目は、プラスミノーゲンを活性化し、炎症マーカー8の増加に関連付けられている虹彩の血管床の増加を提示します。提示されたモデル血管新生と血管新生の化合物をスクリーニング研究するための新しいツールとして大きな可能性がありますでき、直接生体内で血管新生のプロセスの可視化。

<table><tbody><tr><td>Bonn eye scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>23060</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas curved scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E3383 C</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas straight scissors</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E3383 S</td><td></td></tr><tr><td>Objective adapter for camera</td><td>Handcrafted</td><td>N/A</td><td>Or any system that allows adapting a camera to the microscope</td></tr><tr><td>Heating Pad 100-110 watts</td><td>Non Applicable</td><td>N/A</td><td>Available in pet/veterinarian stores</td></tr><tr><td>Hypodermic 30g beveled needle</td><td>KDM GmBH germany</td><td>911914</td><td></td></tr><tr><td>Iphone 4S</td><td>Apple</td><td>Non Applicable</td><td>Or other high resolution image acquistion device</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>KDG 9623</td><td></td></tr><tr><td>McPherson tying forceps</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>E1815 S</td><td></td></tr><tr><td>Micro tying forceps</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>Minims tetracaine hydrochloride</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb</td><td>N/A</td><td>1 % (w/v) Eye Drops</td></tr><tr><td>Neutral-buffered formalin</td><td>Bioreagens</td><td>0018-40</td><td></td></tr><tr><td>Normal saline solution</td><td>Fresenius Kabi</td><td>210352</td><td>0.9 % (w/v) NaCl in injectable water</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td></tr><tr><td>Petri dish 10 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish 3 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3900</td><td></td></tr><tr><td>Safe Seal Tube 2.0 mL</td><td>Starstedt</td><td>72.685.200</td><td>Or any eppendorf style tubes</td></tr><tr><td>TC plate 96-well</td><td>Starstedt</td><td>83.3924</td><td></td></tr><tr><td>Transfer pipette 3.5 mL</td><td>Starstedt</td><td>86.1171</td><td>Or any other Pasteur pipette style</td></tr><tr><td>Univentor 400 anesthesia unit</td><td>Univentor Limited</td><td>N/A</td><td>Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia</td></tr><tr><td>Wild M650 surgical microscope</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>N/A</td><td>Or other surgical or magnifying stereoscope</td></tr></tbody></table>

puncture-induced iris neovascularization as a mouse model of rubeosis iridis

血管新生の非侵襲的評価のための一般的なモデルとしてアイリスの穿刺による血管新生のモデルについて述べる。モデルは血管新生緑内障、糖尿病網膜症の視力を脅かす合併症をターゲットとの関連も。このメソッドは、BALB/c マウスでセルフシール脈絡膜穿刺のシリーズによって虹彩血管反応の誘導に基づいており、マウス眼血管の産後の成熟を活用します。マウスの子犬は、生後 12.5、子犬が当然のことながら生後 24.5 まで彼らの目を開くときから脈絡膜穿刺を受けます。角膜の透明性のため虹彩血管から分析できます簡単に時間生体に非侵襲的方法で。さらに、BALB/c マウスの半透明のアイリスは、最小限の非固有の背景を汚すと詳細な免疫組織学的解析のための flatmounted をすることができます。このモデルで血管新生は、主に炎症によって駆動、プラスミノーゲンの活性化システム。穿刺誘発モデルは小さい齧歯動物、虹彩血管新生を誘導する最初で、直接非侵襲体内血管形成プロセスの解析をできるという利点。また、モデル併用血管新生調節物質、体内視点による血管新生の研究でその可能性を強調します。

P12.5 でアルビノ BALB/c マウスの子犬 4 毎日繰り返される脈絡膜の穿刺を受けた (実験的一日 0、4、8、12)、P24.5 まで。P27.5 でマウスを安楽死させ、アイリス慎重に解剖 (15 日間実験)。マウスの目の絵は、虹彩血管反応の非侵襲的評価を評価する実験的毎日のすべてのパンク シリーズの前に外科的万国実体写真に装着されたカメラで撮影されました。脈絡膜穿刺は、創傷?...

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Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

虹彩新生血管、網膜虚血性疾患の一般的な合併症は、血管新生緑内障の視力を脅かす可能性があります。ここでは、血管新生調節物質の非侵襲的評価に使用するかもしれない実験虹彩血管新生を誘導するためのマウス プロトコルについて述べる。

虹彩ルベオーシスのマウス モデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

8.7K ビュー.  Karolinska Institutet. 虹彩新生血管、網膜虚血性疾患の一般的な合併症は、血管新生緑内障の視力を脅かす可能性があります。ここでは、血管新生調節物質の非侵襲的評価に使用するかもしれない実験虹彩血管新生を誘導するためのマウス プロトコルについて述べる。

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A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) research. By administering targeted laser injury to the RPE and Bruch&#8217;s membrane, the procedure induces angiogenesis, modeling the hallmark pathology observed in neovascular AMD. 
First developed in non-human primates, the laser-induced CNV model has come to be implemented into many other species, the most recent of which being the mouse. Mouse experiments are advantageously more cost-effective, experiments can be executed on a much faster timeline, and they allow the use of various transgenic models. The miniature size of the mouse eye, however, poses a particular challenge when performing the procedure. Manipulation of the eye to visualize the retina requires practice of fine dexterity skills as well as simultaneous hand-eye-foot coordination to operate the laser. However, once mastered, the model can be applied to study many aspects of neovascular AMD such as molecular mechanisms, the effect of genetic manipulations, and drug treatment effects. 
The laser-induced CNV model, though useful, is not a perfect model of the disease. The wild-type mouse eye is otherwise healthy, and the chorio-retinal environment does not mimic the pathologic changes in human AMD. Furthermore, injury-induced angiogenesis does not reflect the same pathways as angiogenesis occurring in an age-related and chronic disease state as in AMD.
Despite its shortcomings, the laser-induced CNV model is one of the best methods currently available to study the debilitating pathology of neovascular AMD. Its implementation has led to a deeper understanding of the pathogenesis of AMD, as well as contributing to the development of many of the AMD therapies currently available.

Here, we present the mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) protocol, an experimental model that re-creates the vascular hallmarks of neovascular age-related macular degeneration (AMD). Once mastered, it can reliably and effectively induce CNV as a model system to test various experimental measures.

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

医学

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this protocol, we aim to guide the reader not simply through the technical considerations of generating laser-induced lesions to trigger neovascular processes, but rather focus on the powerful information that can be obtained from multimodal longitudinal in vivo imaging throughout the follow-up period.
The laser-induced mouse CNV model was generated by a diode laser administration. Multimodal in vivo imaging techniques were used to monitor CNV induction, progression and regression. First, spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) was performed immediately after the lasering to verify a break of Bruch&#39;s membrane. Subsequent in vivo imaging using fluorescein angiography (FA) confirmed successful damage of Bruch&#39;s membrane from serial images acquired at the choroidal level. Longitudinal follow-up of CNV proliferation and regression on days 5, 10, and 14 after the lasering was performed using both SD-OCT and FA. Simple and reliable grading of leaky CNV leasions from FA images is&#160;presented. Automated segmentation for measurement of total retinal thickness, combined with manual caliber application for measurement of retinal thickness at CNV sites, allow unbiased evaluation of the presence of edema. Finally, histological verification of CNV is performed using isolectin GS-IB4 staining on choroidal flatmounts. The staining is thresholded, and the isolectin-positive area is calculated with ImageJ.
This protocol is especially useful in therapeutics studies requiring high-throughput-like screening of CNV pathology as it allows fast, multimodal, and reliable classification of CNV pathology and retinal edema. In addition, high resolution SD-OCT enables the recording of other pathological hallmarks, such as the accumulation of subretinal or intraretinal fluid. However, this method does not provide a possibility to automate CNV volume analysis from SD-OCT images, which has to be performed manually.

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Here, we present the usefulness of longitudinal in vivo imaging in the follow-up of morphological changes of laser-induced choroidal neovascularization in mice.

生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

神経科学

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Optimization of the Retinal Vein Occlusion Mouse Model to Limit Variability

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a detailed method pointing out critical steps is provided with recommendations for optimization to achieve consistently successful occlusion rates across different genetically modified mouse strains. The RVO mouse model consists primarily of the intravenous administration of a photosensitizer dye followed by laser photocoagulation using a retinal imaging microscope attached to an ophthalmic guided laser. Three variables were identified as determinants of occlusion consistency. By adjusting the wait time after rose bengal administration and balancing the baseline and experimental laser output, the variability across experiments can be limited and a higher success rate of occlusions achieved. This method can be used to study retinal diseases that are characterized by retinal edema and hypoxic-ischemic injury. Additionally, as this model induces vascular injury, it can also be applied to study the neurovasculature, neuronal death, and inflammation.

Here, we describe an optimized protocol for retinal vein occlusion using rose bengal and a laser-guided retinal imaging microscope system with recommendations to maximize its reproducibility in genetically modified strains.

変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化

Mouse models of retinal vein occlusion (RVO) are often used in ophthalmology to study hypoxic-ischemic injury in the neural retina. In this report, a ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Quantification of Vascular Parameters in Whole Mount Retinas of Mice with Non-Proliferative and Proliferative Retinopathies

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, gliosis&#160;and a progressive change in vascular function and structure. Although the onset of the retinopathies is characterized by subtle disturbances in visual perception, the modifications in the vascular plexus are the first signs detected by clinicians. The absence or presence of neovascularization determines whether the retinopathy is classified as either non-proliferative (NPDR) or proliferative (PDR). In this sense, several animal models tried to mimic specific vascular features of each stage to determine the underlying mechanisms involved in endothelium alterations, neuronal death and other events taking place in the retina. In this article, we will provide a complete description of the procedures required for the measurement of retinal vascular parameters in adults and early birth mice at postnatal day (P)17. We will detail the protocols to carry out retinal vascular staining with Isolectin GSA-IB4 in whole mounts for later microscopic visualization. Key steps for image processing with Image J Fiji software are also provided, therefore, the readers will be able to measure vessel density, diameter and tortuosity, vascular branching, as well as avascular and neovascular areas. These tools are highly helpful to evaluate and quantify vascular alterations in both non-proliferative and proliferative retinopathies.

This article describes a well-established and reproducible lectin stain assay for the whole mount retinal preparations and the protocols required for the quantitative measurement of vascular parameters frequently altered in proliferative and non-proliferative retinopathies.

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic nerve and retinal ganglion cell (RGC) degeneration, resulting in visual dysfunction by interrupting the transmission of visual information from the eye to the brain. Elevated intraocular pressure is the most important risk factor; thus, several models of ocular hypertension have been developed in rodents by either genetic or experimental approaches to investigate the causes and effects of the disease. Among those, some limitations have been reported such as surgical invasiveness, inadequate functional assessment, requirement of extensive training, and highly variable extension of retinal damage. The present work characterizes a simple, low-cost, and efficient method to induce ocular hypertension in rodents, based on low-temperature, full-circle cauterization of the limbal vascular plexus, a major component of aqueous humor drainage. The new model provides a technically easy, noninvasive, and reproducible subacute ocular hypertension, associated with progressive RGC and optic nerve degeneration, and a unique post-operative clinical recovery rate that allows in vivo functional studies by both electrophysiological and behavioral methods.

The goal of this protocol is to characterize a novel model of glaucomatous neurodegeneration based on 360&#176; thermic cauterization of limbal vascular plexus, inducing subacute ocular hypertension.

げっ歯類の外科的緑内障に対する辺縁血管神経叢の全周焼灼

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

<meta charset="utf8"></head><body>網膜病理を研究するための網膜虚血-再灌流障害のマウスモデル

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, and other vaso-occlusive conditions. This manuscript presents a method for inducing ischemia-reperfusion injury in a mouse model. The method utilized anterior chamber cannulation attached to a saline reservoir, generating hydrostatic pressure to raise the intraocular pressure to 90-100 mmHg. This method effectively caused constriction of retinal capillaries to induce retinal ischemia. At the end of the ischemic period (60 min), the intraocular pressure was normalized (&#8804;20 mmHg) before removing the cannula from the anterior chamber to initiate reperfusion. Days after the ischemia/reperfusion procedure, the eyes were collected and sectioned for histological staining. The histopathology of the retinal sections was scored by evaluating eight parameters of retinal injury: folds, hemorrhage, deformation, cell loss in the ganglion cell, inner nuclear, outer nuclear, and photoreceptor layers, and damage to retinal pigment epithelial cells. This method provided a reproducible model to study the mechanisms and pathology of retinal ischemia/reperfusion injury. In addition, this model can facilitate the discovery of potential therapeutic targets to treat retinal ischemia/reperfusion injury, advancing the study of retinal pathologies and improving patient outcomes.

<meta charset="utf8"></head><body>マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

This protocol models retinal ischemia-reperfusion injury in a mouse eye by inducing retinal ischemia via anterior chamber cannulation and intraocular pressure elevation, followed by intraocular pressure normalization to initiate the reperfusion.

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

Ischemia-reperfusion injuries are known to cause a range of retinal pathologies, including diabetic retinopathy, glaucoma, retinal vascular occlusions, ...

虹彩ルベオーシスのマウスモデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

要約

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レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

生体内でマルチモーダルイメージングとマウスレーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル

変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

げっ歯類の外科的緑内障に対する辺縁血管神経叢の全周焼灼

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

虹彩ルベオーシスのマウス モデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

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眼圧の上昇を通じて、網膜虚血再灌流障害のマウスモデル

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ラットおよびマウスの Circumlimbal 縫合による緑内障のモデル

変動性を制限するための網膜静脈閉塞マウスモデルの最適化

げっ歯類における虚血性網膜症の酸素誘導網膜症モデル

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

げっ歯類の外科的緑内障に対する辺縁血管神経叢の全周焼灼

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

マウス眼モデルにおける網膜虚血-再灌流障害の誘導

虹彩ルベオーシスのマウスモデルとして虹彩新生血管を穿刺誘発

生体内でマルチモーダルイメージングとマウスレーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析