המחברים מבקשים להודות על שיתוף הפעולה תרומות כספיות של סוכנות מימון המחקר הבאים: משק חי אלברטה בשר הסוכנות בע&quot;מ, CRC חזיר, חזיר אלברטה, החברה גנטיקה Hypor הנדריקס NSERC CRSNG.

בהתאם המועצה הקנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים באישור מדיניות Animal הפקולטה והרווחה - בעלי חיים מאוניברסיטת אלברטה, זורע בהריון היו מורדמים על ידי הצוותים מאומנים בכ יום 30 של ההריון עוברים נאספו. יש להשתמש בכפפות בדיקה בכל עת במהלך ההליכים. 1. איסוף לדוגמא אחסון מדגם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים לזרוע באמצעות בורג בשבי ואחריו exsanguination. יש להשתמש בכפפות בדיקה כדי לאסוף את שטחי הרבייה עוברת מכל חזירה מורדמת. הערה: אוסף מהיר של דגימות והעברה עוברת להתייבש קרח או חנקן נוזלי יגרום רקמות באיכות גבוהות לעבודות מולקולריות אחרות כגון microarray ו qPCR. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח הרחם בעדינות להפריד את כל העוברים בתוך ממברנות השליה extraembryonic שלהם מדופן הרחם הבסיסית 21. ודא שאין זיהום ברקמה האמהית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מִחָדָשׁאורך כבל ומשקל של כל עוברי הקיימא לפני ההקפאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף כל העובר הפרט ומיד לעטוף אותו באופן רדיד אלומיניום לפני פקיעה הקפאה עם חנקן נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את העוברים קפוא מן חנקן נוזלי ישירות במקפיא -80 ° C. </li></ol> 2. עוברים גריסה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל כל דוגמיות (15 מ&quot;ל) עם מזהה המדגם הדרוש עבור מספר דגימות להיות מנותח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו מיכל תרמי עם קרח יבש לחצי מלא להכניס את הצינור מדגם מראש שכותרתו בקרח יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תלבש כפפות חורף עם עוד זוג כפפות בדיקה על גבי להעברת המרגמות מראש מצונן העליים מ -80 ° C במקפיא להתייבש מיכל קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את העובר הקפוא בתוך המרגמה על הקרח היבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים חנקן נוזלי מספיק כדי לכסות את העובר ואת לטחון אותו עם העלי לאבקה דקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את האבקה העובר לצינור מדגם מראש שכותרתו עם microspatula (איור 1) ובמקום צינור במקפיא -80 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מראש צונן ובמכתש נקי עבור כל עובר ולשנות את בדיקת הכפפות לאחר שחיקה כל עובר כדי למנוע זיהום צולב בין הדגימות. </li></ol> 3. הכנת הדנ&quot;א הגנומי באמצעות שינוי שיטת נתרן הידרוקסידי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייבל כל צינורות microcentrifuge (1.5 מ&quot;ל) הדרושים במספר דגימות להיות מנותח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת צינורות המדגם המכיל אבקת עובר מן המקפיא -80 מעלות צלזיוס למכל עם קרח יבש לפני שמתחיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 180 μl של 50 מ&quot;מ NaOH (סודיום הידרוקסיד) לתוך צינור אחד microcentrifuge מראש שכותרתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל באינקובטור-חום מראש עד 95 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמשו בקיסם כדי להעביר את הסכום הנכון של אבקת העובר (5-10 מ&quot;ג) (איור 2) מהצינור מדגם לתוך צינור מראש שכותרתו microcentrifuge המכיל את 50 פתרון מ&quot;מ NaOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך up באותו קיסם לאט כדי להמחיש את lysate DNA כחומר דביק, דביק, לבן שקוף דמוי (איור 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת צינורות microcentrifuge עם lysate DNA אל האינקובטור מחומם מראש על 95 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. מיד להעביר את צינור לעבר קופסת קלקר מלא קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 20 μl של 1 M טריס- HCl ישירות לתוך הצינור microcentrifuge ולערבב אותו על ידי הקשה על הצינור בעדינות. השתמש בנייר pH כדי להבטיח את ה- pH הוא כ 8.0 (איור 4) לפני צנטריפוגה. הערה: כאשר מתמודדים עם מספר רב של הכנות מדגמות, מקובל דגימות לאסוף כמה באקראי כדי לבדוק את רמת חומציות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה צינור עם lysate DNA XG ב 2000 ב microcentrifuge לשתי דקות בטמפרטורת חדר כדי להסיר שאריות רקמה שלא נמס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 150 μl של supernatant ברור העליון לתוך צינור חדש או 96 צלחות היטב. הערה: lysate DNA הברור מוכן לשימוש כתבנית ב PCR תגובה היא היציבה ב 4 מעלות צלזיוס למשך שבועות, או יכול להיות כל זמן זה ב -20 מעלות צלזיוס למשך שנה. </li></ol> 4. עיצוב מין ספציפי Primers PCR <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג מספרי הצטרפות עבור אזור בקביעת מין חזירי Y (Sry) (NM_214452.3) ו וחלבון אבץ אצבע צמוד X (ZFX) גנים (XM_005673501.1) מאתר צמח שדה http://www.ncbi.nlm.nih.gov /. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העתק והדבק מספרים ההצטרפות צמח השדה אלה לכלי עיצוב פריימר באינטרנט. הערה: המידע פריימרים הטובים כולל אורך, TM ו% GC וכן גודל המוצר PCR (נ&quot;ב) יופק על מסך המחשב (איור 5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמת את הספציפיות של פריימרים אלה באמצעות תוכנית הפיצוץ נוקלאוטיד (Blastn) מול מסד הנתונים הגנומי חזירי הנוכחי 104 כדי להבטיח רצפים אלה ממוקמים רק על X ו- Y כרומוזום עבור Sry ו ZFX בהתאמה (איור 6). </li></ol> 5. הדנ&quot;א הגנומי PCR ישירות מ- DNA Lysates <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לְהִשְׁתַמֵשׁרק 1 μl של lysate DNA כתבנית לתגובה PCR 15 μl. הערה: שיטת הקרנת תפוקה גבוהה עבור PCR 96-גם צלחות יכול להתבצע באופן דומה באמצעות פיפטה רבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע את הפעולות הבאות פשוט עבור PCR הראשון: להכין צינור PCR אחת עבור כל שליטה תבנית שלילית ושני צינורות נוסף עבור בקרות חיוביות על ידי הוספת 1 μl (0.5 ng) של הדנ&quot;א הגנומי חזירי מין ידוע שהושג באופן מסחרי. מאוחר יותר, כולל מדגם מניתוח זיהוי המין באמצע המוצלח האחרון כביקורת חיובית ולהפעיל יחד עם תגובת PCR החדשה לקביעת מין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכל שילוב HotStart מוכן אנזים PCR ולהכין תערובת אמן על ידי פריימרים הוספה במים nuclease חינם בהתאם למספר הכולל של התגובות PCR. הוסף 1 μl של lysate DNA לתוך צינור PCR קיים מראש עם 14 μl של מיקס מאסטר PCR. להוסיף פריימרים כך הריכוז הסופי של פריימרים משני גנים מין ספציפי הוא 0.3 מיקרומטר בסך הכל של 15 μl PCR reaction. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את תכנית ה- PCR הבא Cycler תרמית: 95 מעלות צלזיוס במשך 3 דקות, 35 מחזורים כל אחד עם צעד היתוך 20 שניות 98 ° C, ואחריו צעד חישול 15 שניות על 65 מעלות צלזיוס, ואחריו צעד התארכות 15 שניות על 72 מעלות צלזיוס. בצעד סופי, דגירת תגובות דקות 1 ב 72 ° C ולהמשיך לדגור על 4 מעלות צלזיוס עד הסרת צינור PCR עבור אימות ג&#39;ל אלקטרופורזה כדי לקבוע את המין. הערה: תנאי PCR ואופטימיזציה הנם בהתאם במדריך של ערכת ה- PCR המוזכרים לוח החומרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את הכמות המתאימה של כתם ג&#39;ל DNA SYBR הניאון ירוק רעיל בעת הכנת ג&#39;ל agarose 2% TBE. הערה: ברומיד Ethidium ניתן להחליף כתם בירוק ניאון אם היא אינה זמינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1.5 μl של צבע הטעינה (10x) לתוך הצינור PCR ומערבבים היטב על ידי pipetting למאגר תגובת PCR ו- up- למטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10 טענו μl של מדגם לתוך באר run הג&#39;ל agarose עם הגדרות מתח מתאים (מנגנון ג&#39;ל קטן ב -100 V, מנגנון ג&#39;ל 96-גם ב 150 V עד הלהקה לצבוע רץ חצי דרך ג&#39;ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפד להתאים את עוצמות להקות תחת ההגדרה אור ניאון באמצעות סורק לייזר ללכוד תמונה של הג&#39;ל. הערה: תרמי ג&#39;ל נפוצה ניתן להחליף את הג&#39;ל ברומיד ethidium. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את המין עובר החזיר ידי זיהוי עובר עם להקה אחת כנקבה ושתי להקות כזכר (איור 7). </li></ol>

<ol>
	<li>Seidel, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Economics+of+selecting+for+sex:+the+most+important+genetic+trait.">Economics of selecting for sex: the most important genetic trait.</a> Theriogenology. 59, 585-598 (2003).</li><li>Guti&#233;rrez-Ad&#225;n, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+consequences+of+sexual+dimorphism+during+pre-implantation+embryonic+development.">Development consequences of sexual dimorphism during pre-implantation embryonic development.</a> Reprod. Domest. Anim. 41, 54-62 (2006).</li><li>Rosenfeld, C. S., Roberts, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+diet+and+other+factors+affecting+offspring+sex+ratio:+a+review.">Maternal diet and other factors affecting offspring sex ratio: a review.</a> Biol Reprod. 71, 1063-1070 (2004).</li><li>Gorecki, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+ratio+in+litters+of+domestic+pigs+(Sus+scrofa+f.+domestica+Linnaeus,+1758).">Sex ratio in litters of domestic pigs (Sus scrofa f. domestica Linnaeus, 1758).</a> Biol. Lett. 40, 111-118 (2003).</li><li>Chen, Z. Y., Dziuk, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+initial+length+of+uterus+per+embryo+and+gestation+stage+on+prenatal+survival,+development,+and+sex+ratio+in+the+pig.">Influence of initial length of uterus per embryo and gestation stage on prenatal survival, development, and sex ratio in the pig.</a> J. Anim. Sci. 71, 1895-1901 (1993).</li><li>Vinsky, M. D., Novak, S., Dixon, W. T., Dyck, M. K., Foxcroft, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+restriction+in+lactating+primiparous+sows+selectively+affects+female+embryo+survival+and+overall+litter.">Nutritional restriction in lactating primiparous sows selectively affects female embryo survival and overall litter.</a> Reprod. Fertil. Dev. 18, 347-355 (2006).</li><li>Cassar, G., King, W. A., King, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+sex+on+early+growth+of+pig+conceptuses.">Influence of sex on early growth of pig conceptuses.</a> J. Reprod. Fertil. 101, 317-320 (1994).</li><li>Zudova, D., Rezacova, O., Kubickova, S., Rubes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy+detection+in+porcine+embryos+using+fluorescence+in+situ+hybridization.">Aneuploidy detection in porcine embryos using fluorescence in situ hybridization.</a> Cytogenet Genome Res. 102, 179-183 (2003).</li><li>Hornak, M., Oracova, E., Hulinska, P., Urbankova, L., Rubes, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneuploidy+detection+in+pigs+using+comparative+genomic+hybridization:+from+the+oocytes+to+blastocysts.">Aneuploidy detection in pigs using comparative genomic hybridization: from the oocytes to blastocysts.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Handyside, A. H., Pattinson, J. K., Penketh, R. J., Delhanty, J. D., Winston, R. M., Tuddenham, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopsy+of+human+preimplantation+embryos+and+sexing+by+DNA+amplification.">Biopsy of human preimplantation embryos and sexing by DNA amplification.</a> Lancet. 1, 347-349 (1989).</li><li>Wilton, L. J., Shaw, J. M., Trounson, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+single-cell+biopsy+and+cryopreservation+of+preimplantation+mouse+embryos.">Successful single-cell biopsy and cryopreservation of preimplantation mouse embryos.</a> Feri. Steril. 51, 513-517 (1989).</li><li>Peura, J. M., Turunen, M., Janne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+sex+determination+assay+for+bovine+preimplantation+embryos+using+the+polymerase+chain+reaction.">A reliable sex determination assay for bovine preimplantation embryos using the polymerase chain reaction.</a> Theriogenology. 35, 547-555 (1991).</li><li>Rao, K. B., Pawshe, C. H., Totey, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+determination+of+in+vitro+developed+buffalo+(Buhalus+buhalis.)+embryos+by+DNA+amplification.">Sex determination of in vitro developed buffalo (Buhalus buhalis.) embryos by DNA amplification.</a> Mol. Reprod. Dev. 36, 291-296 (1993).</li><li>Herr, C. M., Matthaei, K. I., Petrzak, U., Reed, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+Y-chromosome-detecting+ovine+embryo+sexing+assay.">A rapid Y-chromosome-detecting ovine embryo sexing assay.</a> Theriogenology. 33, 245 (1990).</li><li>Fajfar-Whetstone, C. J., LaneRayburn, A., Schook, L. B., Wheeler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+determination+of+porcine+during+preimplantation+embryos+via+y-chromosome+specific+DNA+sequences.">Sex determination of porcine during preimplantation embryos via y-chromosome specific DNA sequences.</a> Animal Biotechnology. 4, 183-193 (1993).</li><li>Pomp, D., Good, B. A., Geisert, R. D., Corbin, C. J., Conley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+identification+in+mammals+with+polymerase+chain+reaction+and+its+use+to+examine+sex+effects+on+diameter+of+day-10+or+-11+pig+embryos.">Sex identification in mammals with polymerase chain reaction and its use to examine sex effects on diameter of day-10 or -11 pig embryos.</a> J. Anim. Sci. 73, 1408-1415 (1995).</li><li>Aasen, E., Medrano, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amplification+of+the+ZFY+and+ZFX+genes+for+sex+identification+in+humans,+cattle,+sheep+and+goats.">Amplification of the ZFY and ZFX genes for sex identification in humans, cattle, sheep and goats.</a> Biotechnology (N Y). 8, 1279-1281 (1990).</li><li>Oliver, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+feed+intake+in+lactating+primiparous+sows.+II.+Effects+on+subsequent+litter+sex+ratio+and+embryonic+gene+expression.">Restricted feed intake in lactating primiparous sows. II. Effects on subsequent litter sex ratio and embryonic gene expression.</a> Reprod Fertil. Dev. 23, 899-911 (2011).</li><li>Truett, G. E., Heeger, P., Mynatt, R. L., Truett, A. A., Walker, J. A., Warman, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+PCR-quality+mouse+genomic+DNA+with+hot+sodium+hydroxide+and+tris+(HotSHOT).">Preparation of PCR-quality mouse genomic DNA with hot sodium hydroxide and tris (HotSHOT).</a> Biotechniques. 29, 52-54 (2000).</li><li>Meeker, N. D., Hutchinson, S. A., Ho, L., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+isolation+of+PCR-ready+genomic+DNA+from+zebrafish+embryos.">Method for isolation of PCR-ready genomic DNA from zebrafish embryos.</a> Biotechniques. 43, 610-614 (2007).</li><li>Almeida, F. C. R. L., Machado, G. S., Borges, A. L. C. C., Rosa, B. O., Fontes, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+different+dietary+energy+sources+during+folliculardevelopment+on+subsequent+fertility+of+cyclic+gilts.">Consequences of different dietary energy sources during folliculardevelopment on subsequent fertility of cyclic gilts.</a> Animal. 8, 293-299 (2014).</li><li>Foxcroft, G. R., Dixon, W. T., Dyck, M. K., Novak, S., Harding, J. C. S., Almeida, F. C. R. L., Rodriguez-Martinez, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+programming+of+postnatal+development+in+the+pig.">Prenatal programming of postnatal development in the pig.</a> Control of Pig Reproduction VIII. , 212-213 (2009).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

רוב הפרוטוקולים קיימים הקשורים הקלדת מין DNA העוברי חזירית מתאימים רק בשלב טרום-השתלה בשלבים מוקדמים 15,16. פתחנו בהצלחת פרוטוקול מתאים להקרנה עובר חזירי במהלך ההריון מאוחר. בהתבסס על מחקרים עם שלבי התפתחות דומות של עוברים ממחקרים קודמים 6,18, בפרוטוקול הנוכח...

החזיר המקומי הפך להיות נושא מחקר בסיסי בפיתוח, גנטיקה ותזונה הן במגזרים האדם ואת בעלי החיים. הפוטנציאל של חזירים כמודלים ביו למחקר אנושי ניתן לייחס הדמיון הפיזיולוגי שלהם. ב בעלי חיים, מניפולציה של יחס מינים יכולים לשפר את האפקטיביות של תוכניות בחירה ושיפור גנטי 1. זיהוי מין העוברים הפרט הוא כלי בסיסי המשמש בחקירות ניסיוני רבים, כולל אך לא מוגבל גנוטיפ, אפיגנטיקה X איון של dimorphism מינית במהלך ההתפתחות העובר המוקדם 2. מחקרים בעכברים מראים כי דיאטה אימהית וגורמים אחרים עלולים לגרום חוסר איזון בין מיני 3. חזירים, הגורם לחוסר איזון יחס מינים כוללים גזע אבהי 4, רחם קיבולת 5, ותנאי המטבולית של החזירה 6. מאז ההבדלים שנצפו עובר המלטות יכולים להיות מושפע sedimorphism xual, החוקרים צריכים להיות מודעים מין העובר ויחסי מין בהסקת מסקנות לגבי המחקר שלהם. פיתוחם של הכלים ופרוטוקולים יעילים זיהוי מין עובר חזיר יום 30 של פיתוח יידון כאן. שיטות שונות של הקלדת מין פותחו למחקרים גנטיים באורגניזמים מודל ובעלי חיים. בעיקר בעלי חיים, זיהוי עובר זכר ונקבה מוקדם הוא נוהג נפוץ מאוד כדי לשפר את הבחירה גנטית תוכניות רבייה. עובריים מוקדם karyotyping ב חזיר באמצעות Giemsa 7 או טכניקות 8,9 הקרינה האינטנסיבית שמש במשך הקלדת מין. עם זאת, שיטות אלו זמן רב ולא מתאים להקרנה מספר גדול של עוברים במהירות ובאופן מדויק. שיטת הקלדת מין היעילה ביותר היא ההגברה DNA באמצעות DNA פולימרז יציבה חום זוג פריימרים. זיהוי מין באמצעים DNA בשיטת PCR הוא יותר ספציפי, מהיר ורגיש, only הדורשים כמות זעירה של חומרים הסלולר. זיהוי מין באמצעים העובר PCR מבוסס הראשונה בוצעה על בני אדם 10, ומאוחר יותר בעכברים 11, בקר 12, 13 תאו וכבשים 14 בעוברים בשלב טרום ההשתלה. ב החזיר, שיטת הקלדת DNA המין המוקדמת הוקמה עבור בעוברים בשלב טרום השתלה באמצעות זוג אחד של פריימרים DNA הספציפיים Y כרומוזום 15. עם זאת, פריימרים PCR הנפוצים ביותר לקביעת מין נבחרו מתוך ה- Y כרומוזום של גן Sry ספציפי זכר 16 ובאזור המפלה שאינו המין של גן אבץ-אצבע הממוקם הוא X ו- Y כרומוזום 17. בהמשך לכך, פריימרים אלה יושמו כדי לקבוע את המין של יום 30 עוברים במחקר זה עם סגוליות משופרים של פריימרים לזהות רק כרומוזום ה- X של גן אבץ-אצבע. הדנ&quot;א הגנומי מעוברת טרום השרשה חזירית ניתן לחלץ באמצעות חשיפת הבלסטוציסט שלם למאגר עם proteinasדואר K 16 או על ידי לקיחת ביופסיה של כמה תאים מן המחשוף מוקדם בודדים עוברים 15 והשימוש בהם עבור ישירה PCR. עם זאת, שחרור של דנ&quot;א מהדם חזירי, שיער, רקמות או conceptus גדול על פני כמה סנטימטרים בגודל לא נעשה ביעילות בשיטת K proteinase. חילוץ שיטות DNA עבור חומרים אלה הוקמו באף זמן רב פרוטוקולי פנול / כלורופורם 6 או ערכות יקרות בהתבסס עמודה 18. על מנת למנוע את השימוש בכימיקלים רעילים, קיימת מגמה לפתח שיטות מיצוי DNA זול, קל פנול-חינם. סוג זה של פרוטוקול לבידוד של הדנ&quot;א הגנומי PCR באיכות מהעכבר 19 ו דג הזברה 20 רקמות כבר נקבעה באמצעות נתרן הידרוקסידי חם טריס (hotshot). מחקר זה מספק פרוטוקול להשיג DNA עם זוגות פריימר דופלקס מאצ ו מחדש שונה לסקס PCR להקליד ישירות lysates התא של יום 30 עוברים חזירי עםדיוק גבוה.

<table><tbody><tr><td>KAPA HiFi HotStart Ready Mix PCR kit&amp;nbsp;</td><td>KAPABiosystems</td><td>KR0370</td><td>other Hot Start Taq polymerase can be used after optimization</td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain</td><td>Life Technologies</td><td>S33102</td><td>Ethidium bromide can be substituted for SYBR Safe</td></tr><tr><td>Pig female and male genomic DNA</td><td>Zyagen</td><td>GP-160-F1 &amp;amp; GP-160-M5</td><td>Postive controls from the tissues of known sex DNA can be used.</td></tr><tr><td>Typhoon FLA 9500 laser scanner</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>28-9969-43</td><td>other imaging system can be used</td></tr><tr><td>Free Soft Nitrile Examination Gloves</td><td>WWR</td><td>89038-270</td><td>any other examination glove can be used</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide, solid&amp;nbsp;</td><td>Fisher</td><td>BP 359 -212</td><td>Molecular Biology Grade</td></tr><tr><td>Eppendorff DNA LoBind Tubes, 1.5 ml, PCR clean</td><td>Eppendorff</td><td>0030 108.051</td><td>heat resistant</td></tr><tr><td>ThermoStat plus</td><td>Eppendorff</td><td>22670204</td><td>Use as a incubator for 95 &amp;#176;C , don&#039;t need to use the heater</td></tr><tr><td>Toothpick</td><td>Bunzl Plc</td><td>75200815</td><td>Any round wooden toothpicks can be used - quality wood</td></tr><tr><td>Microcentrifuge 5417R/5417C</td><td>Eppendorff</td><td>22621807</td><td>This model was discontinued. But another newer model can be used</td></tr><tr><td>Microspatula</td><td>Fisher</td><td>SDI28540115</td><td>Autoclaved before use each time.</td></tr></tbody></table>

accurate and phenol free dna sexing of day 30 porcine embryos by pcr

מחקר לתוך תכנות טרום לידתי של חזיר הוכיח כי מינו של העובר המתפתח או העובר יכול להשפיע על תוצאות התפתחותיות. לכן, היכולת לקבוע מין העובר יש צורך בניסויים רבים במיוחד לגבי טיפוח מוקדם. הפרוטוקול הנוכחי מדגים הכנה זולה, מהירה ולא רעילה של הדנ&quot;א הגנומי חזיר לשימוש עם PCR. יש לאסוף בצורה הומאנית 30 עוברים יום בהתאם להנחיות שקבע מדיניות בבעלי חיים מוסדיים וועדות הרווחה עבור הפרוטוקול הנוכחי. הכנת העובר כולו בזכות טכניקת זיהוי מין באמצעים מבוסס זה PCR פשוט כרוכה שחיקה העובר הקפוא לאבקה דקה בעזרת מכתש מראש צוננת ועליי. PCR באיכות DNA משתחרר כמות קטנה של אבקה העובר על ידי החלת דגירה חמה מגיב תמוגה אלקליין. בשלב הבא, את פתרון ה- DNA מעורבב עם חיץ נטרול ושימשו במישרין לצורך פעילות PCR. שני זוגות פריימר נוצרות כדי detect ספציפי מין בקביעה באזור של כרומוזום א- (Sry) ו ZFX באזור של כרומוזום ה- X עם דיוק וספציפי גבוהים. באותו פרוטוקול יכול להיות מיושם על עוברים מוארכים אחרים (יום 10 עד יום 14) לפני יום 30. כמו כן, פרוטוקול זה יכול להתבצע עם צלחות 96-נקוו כאשר הקרנת מספר גדול של עוברים, מה שהופך את זה אפשרי עבור אוטומציה גבוהה הקלדת מין תפוקה.

תוצאת נציג של קביעת הזוויג מ 345 הקרנת lysates DNA על ידי PCR מוצגת באיור 7 ו מסוכמת בטבלת 1. כפי שניתן לראות בתרשים 7, טמפרטורת החישול פריימרים על 65...

Watch this Scientific Journal Video about Accurate and Phenol Free DNA Sexing of Day 30 Porcine Embryos by PCR at JoVE.com

Accurate and Phenol Free DNA Sexing of Day 30 Porcine Embryos by PCR

This protocol describes an accurate, inexpensive, rapid and non-toxic method to determine the sex of Day 30 porcine embryo using PCR method after grinding an embryo into powder without phenol chloroform extraction and DNA column purification.

חינם מדויק פנול DNA זיהוי מין של יום 30 חזירים העוברים על ידי PCR

Research into prenatal programming in the pig has shown that the sex of the developing embryo or fetus can influence the developmental outcome. Therefore, ...

accurate-and-phenol-free-dna-sexing-of-day-30-porcine-embryos-by-pcr

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

10.0K Views.  University of Alberta. This protocol describes an accurate, inexpensive, rapid and non-toxic method to determine the sex of Day 30 porcine embryo using PCR method after grinding an embryo into powder without phenol chloroform extraction and DNA column purification.

Video: Accurate and Phenol Free DNA Sexing of Day 30 Porcine Embryos by PCR

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse preimplantation embryos. The procedures necessary for embryo collection, immunofluorescence, imaging on a confocal microscope, and image segmentation and analysis are described. This method allows quantitation of the expression of multiple nuclear markers and the spatial (XYZ) coordinates of all cells in the embryo. It takes advantage of MINS, an image segmentation software tool specifically developed for the analysis of confocal images of preimplantation embryos and embryonic stem cell (ESC) colonies. MINS carries out unsupervised nuclear segmentation across the X, Y and Z dimensions, and produces information on cell position in three-dimensional space, as well as nuclear fluorescence levels for all channels with minimal user input. While this protocol has been optimized for the analysis of images of preimplantation stage mouse embryos, it can easily be adapted to the analysis of any other samples exhibiting a good signal-to-noise ratio and where high nuclear density poses a hurdle to image segmentation (e.g., expression analysis of embryonic stem cell (ESC) colonies, differentiating cells in culture, embryos of other species or stages, etc.).

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analysis of protein expression to study lineage specification in mouse preimplantation embryos. The procedures necessary for collection of blastocysts, whole-mount immunofluorescent detection of proteins, imaging of samples on a confocal microscope, and nuclear segmentation and image analysis are described.

ניתוח כמותי של ביטוי חלבון לחקר מפרט Lineage עכבר preimplantation עוברים

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Loss- and Gain-of-function Approach to Investigate Early Cell Fate Determinants in Preimplantation Mouse Embryos

Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene modification in preimplantation embryos provides a means to study the underlying mechanisms of genes implicated in, for instance, cellular differentiation into the trophectoderm (TE) and the inner cell mass (ICM). Here, we describe a protocol that examines the role of neogenin as an authentic receptor for initial cell fate determination in preimplantation mouse embryos. First, we discuss the experimental manipulations that were used to produce gain and loss of neogenin function by microinjecting neogenin cDNA and shRNA; the effectiveness of this approach was confirmed by a strong correlation between the pair-wise expression levels of either red fluorescent protein (RFP) or green fluorescent protein (GFP) and the immunocytochemical quantification of neogenin expression. Secondly, overexpression of neogenin in preimplantation mouse embryos leads to normal ICM development while neogenin knockdown causes the ICM to develop abnormally, implying that neogenin could be a receptor that relays extracellular cues to drive blastomeres to early cell fates. Given the success of this detailed protocol in investigating the function of a novel embryonic developmental stage-specific receptor, we propose that it has the potential to aid in exploration and identification of other stage-specific genes during embryogenesis.

The goal of this protocol is to describe a loss- and gain-of function method that is applicable to identify neogenin as a stage-specific receptor that leads to trophectoderm and inner cell mass differentiation in preimplantation mouse embryos.

Loss- ו-של-פונקצית רווח גישה לחקר תא מוקדם קובעי גורל preimplantation עכבר עובר

 Gene silencing and overexpression techniques are instrumental for the identification of genes involved in embryonic development. Direct target gene ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo development due to their similar developmental process. Although genetic factors are known to affect early embryonic development, the discovery of such factors has been a serious challenge. Microarray technology allows quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. One of the main decisions that have to be made when planning a microarray experiment is whether to use a one- or two-color approach. Two-color design increases technical replication, minimizes variability, improves sensitivity and accuracy as well as allows having loop designs, defining the common reference samples. Although microarray is a powerful biological tool, there are potential pitfalls that can attenuate its power. Hence, in this technical paper we demonstrate an optimized protocol for RNA extraction, amplification, labeling, hybridization of the labeled amplified RNA to the array, array scanning and data analysis using the two-color analysis strategy.

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Microarray technology allows quantitative measurement and gene expression profiling of transcripts on a genome-wide basis. Therefore, this protocol provides an optimized technical procedure in a two-color custom made bovine array using Day 7 bovine embryos to demonstrate the feasibility of using low amount of total RNA.

Transcriptome Profiling של<em&gt; In-Vivo</em&gt; עוברי אדם שור הופק באמצעות פלטפורמת microarray שני צבעים

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

High-throughput DNA Extraction and Genotyping of 3dpf Zebrafish Larvae by Fin Clipping

Zebrafish (Danio rerio) possess orthologues for 84% of the genes known to be associated with human diseases. In addition, these animals have a short generation time, are easy to handle, display a high reproductive rate, low cost, and are easily amenable to genetic manipulations by microinjection of DNA in embryos. Recent advances in gene editing tools are enabling precise introduction of mutations and transgenes in zebrafish. Disease modeling in zebrafish often leads to larval phenotypes and early death which can be challenging to interpret if genotypes are unknown. This early identification of genotypes is also needed in experiments requiring sample pooling, such as in gene expression or mass spectrometry studies. However, extensive genotypic screening is limited by traditional methods, which in most labs are performed only on adult zebrafish or in postmortem larvae. We addressed this problem by adapting a method for the isolation of PCR-ready genomic DNA from live zebrafish larvae that can be achieved as early as 72 h post-fertilization (hpf). This time and cost-effective technique, improved from a previously published genotyping protocol, allows the identification of genotypes from microscopic fin biopsies. The fins quickly regenerate as the larvae develop. Researchers are then able to select and raise the desired genotypes to adulthood by utilizing this high-throughput PCR-based genotyping procedure.

Zebrafish have been used as reliable genetic model organisms in biomedical research, especially with the advent of gene-editing technologies. When larval phenotypes are expected, DNA extraction and genotype identification can be challenging. Here, we describe an efficient genotyping procedure for zebrafish larvae, by tail clipping, as early as 72-h post-fertilization.

מיצוי DNA תפוקה גבוהה, Genotyping של הזחלים דג זברה 3dpf על-ידי המסיכה פין

Zebrafish (Danio rerio) possess orthologues for 84% of the genes known to be associated with human diseases. In addition, these animals have a short ...

Genetics

Semiconductor Sequencing for Preimplantation Genetic Testing for Aneuploidy

Chromosomal aneuploidy, one of the main causes leading to embryonic development arrest, implantation failure, or pregnancy loss, has been well documented in human embryos. Preimplantation genetic testing for aneuploidy (PGT-A) is a genetic test that significantly improves reproductive outcomes by detecting chromosomal abnormalities of embryos. Next-generation sequencing (NGS) provides a high-throughput and cost-effective approach for genetic analysis and has shown clinical applicability in PGT-A. Here, we present a rapid and low-cost semiconductor sequencing-based NGS method for screening of aneuploidy in embryos. The first step of the workflow is whole genome amplification (WGA) of the biopsied embryo specimen, followed by construction of sequencing library, and subsequent sequencing on the semiconductor sequencing system. Generally, for a PGT-A application, 24 samples can be loaded and sequenced on each chip generating 60&#8722;80 million reads at an average read length of 150 base pairs. The method provides a refined protocol for performing template amplification and enrichment of sequencing library, making the PGT-A detection reproducible, high-throughput, cost-efficient, and timesaving. The running time of this semiconductor sequencer is only 2&#8722;4 hours, shortening the turnaround time from receiving samples to issuing reports into 5 days. All these advantages make this assay an ideal method to detect chromosomal aneuploidies from embryos and thus, facilitate its wide application in PGT-A.

Here, we introduce a semiconductor sequencing method for preimplantation genetic testing for aneuploidy (PGT-A) with the advantages of short turnaround time, low cost, and high throughput.

רצפי מוליכים למחצה עבור השרשה בדיקה גנטית עבור אנאפלואידיה

Chromosomal aneuploidy, one of the main causes leading to embryonic development arrest, implantation failure, or pregnancy loss, has been well documented ...

Bottlenose Dolphin (Tursiops truncatus) Spermatozoa: Collection, Cryopreservation, and Heterologous In Vitro Fertilization

The use of cryopreserved dolphin spermatozoa facilitates the exchange of genetic material between aquatic parks and makes spermatozoa accessible to laboratories for studies to further our understanding of marine mammal reproduction. Heterologous IVF, a replacement for homologous IVF, could provide a means to test the sperm fertility potential; to study gamete physiology and early embryo development; and to avoid the use of valuable dolphin oocytes, which are difficult to obtain. Here, we present protocols that have been successfully used to collect and cryopreserve dolphin spermatozoa. The collection of semen is performed by manual stimulation on trained dolphins. Cryopreservation is accomplished using a TRIS egg-yolk based extender with glycerol. In addition, we present a protocol that describes heterologous IVF using dolphin spermatozoa and bovine oocytes and that verifies the hybrid nature of the resulting embryo using PCR. Heterologous fertilization raises questions on fertilization and can be used as a tool to study gamete physiology and early embryo development. In addition, the success of heterologous IVF demonstrates the potential of this technique to test dolphin sperm fertilizing capacity, which is worth further examination.

Bottlenose Dolphin Tursiops truncatus Spermatozoa: Collection, Cryopreservation, and Heterologous In Vitro Fertilization

Here, we present protocols that have been successfully used for dolphin spermatozoa collection, cryopreservation, and heterologous IVF performance using bovine oocytes.

Spermatozoa דולפין (והוולדות truncatus) קצר: אוסף, הקפאה קריוגנית ו Heterologous הפריה

The use of cryopreserved dolphin spermatozoa facilitates the exchange of genetic material between aquatic parks and makes spermatozoa accessible to ...

Chromosome Screening of Human Preimplantation Embryos by Using Spent Culture Medium: Sample Collection and Chromosomal Ploidy Analysis

In clinical in vitro fertilization (IVF), the prevailing method for PGT-A requires biopsy of a few cells from the trophectoderm (TE). This is the lineage that forms the placenta. This method, however, requires specialized skills, is invasive, and suffers from false positives and negatives because the chromosome numbers in the TE and the inner cell mass (ICM), which develops into the fetus, are not always the same. NICS, a technology requiring sequencing of DNA that released into the culture medium from both TE and ICM, may offer a way out to these problems but has previously been shown to have limited efficacy. The present study reports the full protocol of NICS, which includes culture medium sampling methods, whole genome amplification (WGA) and library preparation, and NGS data analysis by analysis software. Considering the different cryopreservation times in different embryo laboratories, embryologists have two methods for collecting embryo culture medium that can be selected according to the actual conditions of the IVF laboratory.

The present study reports a protocol for chromosome screening of human embryos that uses spent culture medium, which avoids embryo biopsy and enables chromosome ploidy identification using NGS. The present article presents the detailed procedure, including the preparation of culture medium, whole genome amplification (WGA), next-generation sequencing (NGS) library preparation, and data analysis.

בדיקת כרומוזומים של עוברים אנושיים טרום השרשה באמצעות מדיום תרבית משומש: איסוף דגימות וניתוח פלואידיות כרומוזומליות

In clinical in vitro fertilization (IVF), the prevailing method for PGT-A requires biopsy of a few cells from the trophectoderm (TE). This is the lineage ...

Efficient Genome Editing of Mice by CRISPR Electroporation of Zygotes

With exceptional efficiency, accuracy, and ease, the CRISPR/Cas9 system has significantly improved genome editing in cell culture and lab animal experiments. When generating animal models, the electroporation of zygotes offers higher efficiency, simplicity, cost, and throughput as an alternative to the gold standard method of microinjection. Electroporation is also gentler, with higher viability, and reliably delivers Cas9/single-guide RNA (sgRNA) ribonucleoproteins (RNPs) into the zygotes of common laboratory mouse strains (e.g., C57BL/6J and C57BL/6N) that approaches 100% delivery efficiency. This technique enables insertion/deletion (indels) mutations, point mutations, the deletion of whole genes or exons, and small insertions in the range of 100-200 bp to insert LoxP or short tags like FLAG, HA, or V5. While constantly being improved, here we present the current state of CRISPR-EZ in a protocol that includes sgRNA production through in vitro transcription, embryo processing, RNP assembly, electroporation, and the genotyping of preimplantation embryos. A graduate-level researcher with minimal experience manipulating embryos can obtain genetically edited embryos in less than 1 week using this protocol. Here, we offer a straightforward, low-cost, efficient, high-capacity method that could be used with mouse embryos.

Here, we describe a simple technique intended for the efficient generation of genetically modified mice called CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). This method delivers editing reagents by electroporation into embryos at an efficiency approaching 100%. This protocol is effective for point mutations, small genomic insertions, and deletions in mammalian embryos.

עריכה גנומית יעילה של עכברים על ידי CRISPR אלקטרופורציה של זיגוטים

With exceptional efficiency, accuracy, and ease, the CRISPR/Cas9 system has significantly improved genome editing in cell culture and lab animal ...

בידוד וגנוטיפ של עובר עכבר גסטרולציה לריצוף תא בודד

Single-Cell RNA Sequencing of Mutant Whole Mouse Embryos: From the Epiblast to the End of Gastrulation

Over the last decade, single-cell approaches have become the gold standard for studying gene expression dynamics, cell heterogeneity, and cell states within samples. Before single-cell advances, the feasibility of capturing the dynamic cellular landscape and rapid cell transitions during early development was limited. In this paper, a robust pipeline was designed to perform single-cell and nuclei analysis on mouse embryos from embryonic day E6.5 to E8, corresponding to the onset and completion of gastrulation. Gastrulation is a fundamental process during development that establishes the three germinal layers: mesoderm, ectoderm, and endoderm, which are essential for organogenesis. Extensive literature is available on single-cell omics applied to wild-type perigastrulating embryos. However, single-cell analysis of mutant embryos is still scarce and often limited to FACS-sorted populations. This is partially due to the technical constraints associated with the need for genotyping, timed pregnancies, the count of embryos with desired genotypes per pregnancy, and the number of cells per embryo at these stages. Here, a methodology is presented designed to overcome these limitations. This method establishes breeding and timed pregnancy guidelines to achieve a higher chance of synchronized pregnancies with desired genotypes. Optimization steps in the embryo isolation process coupled with a same-day genotyping protocol (3 h) allow for microdroplet-based single-cell to be performed on the same day, ensuring the high viability of cells and robust results. This method further includes guidelines for optimal nuclei isolations from embryos. Thus, these approaches increase the feasibility of single-cell approaches of mutant embryos at the gastrulation stage. We anticipate that this method will facilitate the analysis of how mutations shape the cellular landscape of the gastrula.

Author Spotlight: צינור לניתוח עוברים מוטנטיים ספציפיים לשושלת ברזולוציה של תא בודד

This paper establishes a pipeline for high-quality single-cell and nuclei suspensions of gastrulating mouse embryos for sequencing of single cells and nuclei.

ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה

Over the last decade, single-cell approaches have become the gold standard for studying gene expression dynamics, cell heterogeneity, and cell states ...

חינם מדויק פנול DNA זיהוי מין של יום 30 חזירים העוברים על ידי PCR

Summary

Explore More Videos

ניתוח כמותי של ביטוי חלבון לחקר מפרט Lineage עכבר preimplantation עוברים

Loss- ו-של-פונקצית רווח גישה לחקר תא מוקדם קובעי גורל preimplantation עכבר עובר

Transcriptome Profiling של

מיצוי DNA תפוקה גבוהה, Genotyping של הזחלים דג זברה 3dpf על-ידי המסיכה פין

רצפי מוליכים למחצה עבור השרשה בדיקה גנטית עבור אנאפלואידיה

Spermatozoa דולפין (והוולדות truncatus) קצר: אוסף, הקפאה קריוגנית ו Heterologous הפריה

בדיקת כרומוזומים של עוברים אנושיים טרום השרשה באמצעות מדיום תרבית משומש: איסוף דגימות וניתוח פלואידיות כרומוזומליות

עריכה גנומית יעילה של עכברים על ידי CRISPR אלקטרופורציה של זיגוטים

ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה

ריצוף RNA חד-תאי של עוברי עכברים שלמים מוטנטיים: מהאפיבלסט ועד סוף הגסטרולציה