The authors would like to acknowledge the Infectious Disease Department at Brigham and Women&#8217;s Hospital especially Michael S. Calderwood, MD, MPH for helping us construct this protocol. We would also like to thank the Institution&#8217;s endoscopy center and it&#8217;s leadership team for their support.

NOTA: En el momento de esta publicación manuscrito no se requiere un nuevo fármaco en investigación (IND) para realizar una FMT para CDI recurrente en la práctica clínica. Sin embargo, si FMTs se llevan a cabo como parte de un estudio o para otra indicación, una IND o aplicación equivalente pueden ser necesarios 18. Los organismos reguladores probablemente seguirán para evaluar la seguridad y eficacia de FMT como se aplica a condiciones médicas CDI y otros y por lo que se aconseja verificar los requerimientos regulatorios en su respectiva ubicación antes de la iniciación de un programa de FMT y cada uno a dos meses una vez realizando activamente FMT. NOTA Los candidatos deben estar dispuestos a dar su consentimiento para el trasplante fecal, así como la colonoscopia. 1. Identificación de candidatos apropiados para FMT <ol><li> Los pacientes que tienen CDI recurrente o en pacientes con enfermedad refractaria que no responde a los antibióticos tradicionales son appropriate candidatos para FMT. NOTA: recidivante CDI se define como una historia de tres o más episodios de CDI confirmados por pruebas de toxina o PCR, o dos episodios que requirieron hospitalización. </li><li> Asegúrese de que el paciente es capaz de someterse a una colonoscopia de forma segura. Esto es a discreción del endoscopista. </li></ol> 2. Heces Selección de Donantes NOTA: La selección de donantes de heces se aplica al tratamiento de CDI y puede no ser aplicable al tratamiento de otros trastornos. <ol><li> Asegúrese de que el paciente identifica un donante. Los posibles donantes deben estar presentes con el destinatario en el momento de la visita inicial a la clínica de gastroenterología. Los donantes pueden ser cónyuges, familiares o amigos. Los donantes pueden vivir en la misma residencia que el destinatario, siempre que se cumplan otros criterios. </li></ol> Elegibilidad 3. Donantes <ol><li> Criterios de inclusión: Asegúrese de que el donante es un adulto sano (≥18 años) y tiene una forma diaria intestinal movement. </li><li> Criterios de exclusión: <ol><li> Asegúrese de que el donante no está tomando antibióticos o no ha tomado antibióticos en los tres meses anteriores o cualquier medicamento para una infección. </li><li> Asegúrese de que el donante no tiene un historial de estreñimiento o de uso de laxantes crónicamente. Además, asegúrese de que el donante no tiene un historial de enfermedad inflamatoria intestinal, diarrea crónica, colitis microscópica, una historia personal de intestino / malignidad colónica, o un historial de derivación otra cirugía gástrica / pérdida de peso. </li><li> Asegúrese de que el donante no ha viajado recientemente (en los últimos tres meses) a un área donde la diarrea infecciosa es una preocupación. Si han viajado y experimentado diarrea deben exluded. </li><li> Asegúrese de que el donante no está tomando ningún agentes inmunosupresores y no está en la quimioterapia sistémica. </li><li> Asegúrese de que el donante no tiene síndrome metabólico, enfermedades autoinmunes o enfermedades atópicas. </li></ol></li><li> Obtener con escritoenviado desde el donante y el receptor antes de la selección debido a la naturaleza sensible de las pruebas de detección. Tranquilizar a ambas partes de que los resultados del examen no serán compartidos con la otra parte. </li></ol> 4. Proyección NOTA: Este protocolo de cribado fue adaptada para los pacientes en el Hospital Brigham y de Mujeres en Massachusetts, EE.UU. Considere consulta al departamento de enfermedades infecciosas y el control de infecciones del hospital antes de iniciar el protocolo FMT para asegurarse de que todas las pruebas de evaluación correspondientes se han considerado. <ol><li> Beneficiario: <ol><li> En el momento de la visita inicial a la clínica, enviar los siguientes exámenes de laboratorio para la detección del receptor (para establecer las pruebas de referencia para estas enfermedades infecciosas y para asegurar que no hay cuestión de la transmisión en el futuro). </li><li> Realizar la hepatitis A (IgG e IgM), la hepatitis B (HbsAg / Ab y HBcAb), Hepatitis C Ab, el VIH-1/2 (Ab y la carga viral) y Sífilis (TP-IgG) de sangre de laboratorio tTER. </li><li> Obtener una historia completa de las alergias alimentarias en esta evaluación inicial. </li></ol></li><li> Donante: <ol><li> Coordinar con el laboratorio de microbiología antes de cribado para asegurar heces formadas no se descarta. </li><li> Ordene las pruebas de laboratorio a continuación para la selección de donantes si el donante cumple con los criterios de elegibilidad según la sección 3. </li><li> Realizar la hepatitis A (IgG e IgM), la hepatitis B (HBsAg / Ab y HBcAb), Hepatitis C Ab, el VIH-1/2 (carga viral y Ab) y Sífilis (TP-IgG) análisis de sangre de laboratorio. </li><li> Realizar C. difficile (por la cultura), coprocultivo rutina, antígeno de Giardia, Cryptosporidium antígeno y pruebas de heces de laboratorio los óvulos y los parásitos. </li><li> Pantalla del donante no más de 30 días, pero preferiblemente 1 - 2 semanas antes del procedimiento programado. NOTA: Si el donante desarrolla diarrea o heces líquido que ya no son elegibles para la donación. </li></ol></li><li> El abogado del donante en los alimentos para evitar, con base enalergias a los alimentos del destinatario. El donante no debe ingerir alimentos a los que el destinatario es alérgica a los 5 días antes de la donación. </li></ol> 5. Pre-Procedimiento de preparación <ol><li> Beneficiario: <ol><li> En la visita inicial a la clínica, si el destinatario no está ya en la vancomicina oral, iniciar vancomicina 125 mg cada 6 h durante al menos siete a diez días antes del procedimiento. </li><li> Proporcionar al destinatario con las instrucciones del centro de la endoscopia para la preparación del intestino antes de la colonoscopia por hacer el día antes del procedimiento programado. Los beneficiarios también deben seguir las instrucciones de la dieta estándar del centro de la endoscopia para la semana antes del procedimiento. </li><li> Instruya al destinatario a tomar su última dosis de vancomicina la noche antes del procedimiento. </li></ol></li><li> Donante: <ol><li> Proporcionar al donante con varias tazas de recogida de heces. Inserciones aseo Label (sombreros) y tazas con la etiqueta del destinatario, así como 3 sp vacíoecimen contenedores. Pregunte al donante para iniciar la recopilación de heces no más de 6 horas antes de su elaboración (tiempo de procedimiento). NOTA: Si el donante proporciona múltiples muestras de heces, deben estar etiquetados con fechas y horas. Utilice el ejemplo más fresco (una taza llena de muestras será suficiente). </li><li> Asegúrese de que el destinatario trae muestra de heces del donante con ellos para el procedimiento. </li><li> Almacenar las muestras de heces a temperatura ambiente. Excluir cualquier evacuación líquida. Deseche cualquier heces sin utilizar en un sistema de alcantarillado sanitario (a menos que el ahorro para fines de investigación). </li></ol></li></ol> 6. Preparación de heces NOTA: Asegúrese de que este procedimiento es discutido y aprobado por el departamento de control de infecciones del hospital. <ol><li> Use el equipo de protección personal cuando se prepara la materia fecal. </li><li> Preparar las heces en la sala de endoscopia en un área designada de trabajo en el que hay una zona de salpicadura de dieciocho pulgadas que evita la contaminación de OTHmateriales er. </li><li> Antes de evacuar preparación, limpiar el área designada con un desinfectante aprobado por el hospital. </li><li> Cubra el área con una almohadilla desechable para evitar la contaminación. </li><li> Transferir el taburete formado en un catorce oz licuadora sola velocidad y agregar 500 cc de solución salina normal. </li><li> Mezclar el contenido durante al menos un minuto o hasta que alcanza una consistencia de lechada líquida. Tenga cuidado para evitar que se derrame al extraer la tapa de la licuadora. </li><li> Vierta la solución a través del colador en un plástico cuenca ocho cuartos para eliminar cualquier residuo sólido. Deseche el filtro. </li><li> Elaborar la solución tensa en 60 cc jeringas luer lock (aproximadamente ocho a nueve de FMT norma por la colonoscopia). Elaborar un extra de 60 cc de solución salina normal para los rubores. </li></ol> 7. Trasplante fecal mediante colonoscopia <ol><li> Llevar equipo de protección personal de acuerdo con las políticas de la unidad de endoscopia al realizar o ayudar con la Infusion. </li><li> Considere sedación ligera, si es posible, de manera que el paciente puede ser capaz de cooperar con retención de las heces después del procedimiento. </li><li> Realice una colonoscopia para el íleon terminal (o la medida de lo técnicamente posible). En la inserción del colonoscopio, el lavado y aspiración cualquier heces líquidas residual. </li><li> Inspeccione las paredes mucosas evidencia de inflamación de la mucosa, pero las biopsias no se realizan de forma rutinaria durante el procedimiento FMT. NOTA: Determinar si una colonoscopia completa es seguro debido al grado de inflamación. Si no, considere una sigmoidoscopia flexible más limitada con la infusión (usar la mitad de la suspensión de heces). </li><li> Infundir 60 cc (una jeringa) una vez en el íleon terminal a través del canal de biopsia del colonoscopio usando la tapa de canal de biopsia con tubo de extensión. </li><li> Entre las aplicaciones de jeringas de heces, enjuague el canal con solución salina normal para evitar obstrucciones. </li><li> Infundir otros 60 cc de heces en el intestino ciego y luego repetir en el c derechoOlón. </li><li> Continuar la infusión de 30 cc cada cinco a diez cm, mientras que de manera uniforme la distribución de la suspensión en los cuatro cuadrantes pared del colon hasta que se alcanza el colon transverso medio. Recuerde que debe enjuagar con solución salina entre jeringas de heces. NOTA: Si la suspensión es muy viscosa puede ser necesario para empujar con una fuerza considerable en la jeringa. Tenga cuidado de que el tapón del canal de biopsia no se separa de la colonoscopio y causar derrame el contenido de heces. Frecuente ruborización permitirá un pasaje más fácil de la lechada. Si hay dificultad continuada en empujar la suspensión, considere re-forzar las heces donante que quede por segunda vez o diluir aún más con solución salina normal. </li><li> Aspirar el exceso de aire al retirar al cambiar las jeringas con cuidado de no succionar cualquier heces líquidas. NOTA: Si el paciente ha conocido la incontinencia fecal, la última jeringa debe infundirse no inferior al ángulo hepático para evitar fugas durante y después del procedimiento. </li><li> Una vez ªe colonoscopia con FMT es completa, aconsejar al paciente para retener las heces, siempre que pueda. Ellos pueden reanudar su dieta normal y los medicamentos Dos horas después de la colonoscopia es completa. </li></ol> 8. La colonoscopia con FMT Limpieza <ol><li> Realizar reprocesamiento equipo después del procedimiento, el medio ambiente de limpieza / desinfección y eliminación de residuos de acuerdo con el protocolo del hospital. </li><li> Deseche todo el material fecal en el contenedor de residuos sanitarios apropiados. </li><li> Llevar el colonoscopio a la zona de descontaminación para el procesamiento de rutina por el protocolo estándar. </li><li> Deseche la licuadora y filtro con cualquier otro residuo sucio. NOTA: Si los mezcladores y filtros de un solo uso no son factibles en un suplente cada institución métodos de mezcla puede ser considerado. Un ejemplo: pasar las heces a través de una patata arrocera de acero inoxidable que se puede limpiar en autoclave. Le recomendamos que tratar todos los métodos posibles con dep control de infecciones de su centroartamento. </li><li> Descontaminar todas las superficies que se utilizaron para el procedimiento a través de los productos de la instalación aprobada. </li></ol> 9. Seguimiento <ol><li> Concertar una cita de seguimiento en consulta de gastroenterología para el paciente de aproximadamente 30 días después de la FMT. </li><li> Aconsejar al paciente sobre el riesgo de recurrencia C. difficile con los futuros cursos de antibióticos. </li></ol> 10. Notificación de Eventos Adversos <ol><li> Aunque FMT se considera un procedimiento seguro, es muy recomendable hacer un seguimiento de todos los eventos adversos sintieron que se asocia con el procedimiento y que informe a los consejos reguladores apropiados. </li><li> Con el fin de documentar la seguridad a largo plazo de la FMT, mantener una base de datos confiable que se puede consultar de forma periódica. </li></ol>

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The authors have nothing to disclose relevant to the material presented in this manuscript.

Trasplantes fecales han demostrado ser un tratamiento eficaz y seguro para CDI recurrente. Hemos diseñado un protocolo estándar para la FMT a través de la colonoscopia y se incluyen los resultados de 22 pacientes que se sometieron al procedimiento de CDI recurrente. Nuestros resultados hasta el momento son comparables con los datos publicados para la enfermedad recurrente con sólo un paciente recurrente un mes después FMT. Un paso crítico del procedimiento es la visita de preselección para asegurar que e...

Trasplantes fecales para el tratamiento de la colitis pseumembranous fueron descritos por primera vez en 1958 1. Sin embargo, los informes de la ingestión de heces para el tratamiento de la intoxicación alimentaria y la diarrea severa fecha de vuelta ya en China 2 cuarto siglo. Fecal trasplante de microbiota (FMT) también se denomina en la literatura &quot;bacterioterapia fecal&quot;, &quot;infusión probiótico humano&quot;, &quot;trasplante de heces&quot;, &quot;restauración microbioma intestinal&quot;, y &quot;transferencia fecal&quot;. Se trata de recoger las heces de un donante sano, pre-seleccionados y la entrega de una suspensión preparada en el tracto gastrointestinal del destinatario a través de sonda nasogástrica, esophagogastricduodenoscopy, la colonoscopia o enema 3. Muchas series de casos han reportado la eficacia de la administración a través de sonda nasogástrica y enema, sin embargo estudios más recientes han demostrado que la administración de las heces de los donantes a través de una colonoscopia es segura y altamente eficaz 4.Aunque se han reportado otros métodos, como la administración por sonda nasogástrica, la entrega de las heces de los donantes a través de la colonoscopia tiene menos efectos secundarios inmediatos (por ejemplo, hinchazón abdominal y náuseas) 4 y hemos encontrado que los pacientes son más receptivos a la idea de FMT cuando se realiza por colonoscopia. Una de las ventajas terapéuticas de FMT a través de la colonoscopia es la reducción de la biomasa del colon debido a la lavado intestinal que se realiza antes del procedimiento 4. Múltiples estudios han investigado el papel de FMT para el tratamiento de la colitis y diarrea causada por el patógeno oportunista C. difficile (CDI). La incidencia de CDI sigue aumentando y es una causa importante de morbilidad y la mortalidad con una gran carga económica en todo el mundo. El tratamiento de primera línea para el CDI consiste en la terapia con antibióticos, sin embargo las tasas de recurrencia se han reportado entre 15 a 35% 5. Varias series de casos y los informes que hacercumented la seguridad y eficacia de FMT para CDI refractaria al tratamiento médico estándar con antibióticos 4,6-16. Un estudio que examinó a largo plazo de seguimiento de los pacientes después de FMT a través de la colonoscopia para CDI informó una tasa de curación primaria del 91% en 77 pacientes 17. En nuestro Centro (Brigham y Hospital de la División de la Mujer de Gastroenterología, Hepatología y Endoscopia), iniciamos un programa de trasplante fecal en pacientes con CDI recurrente o refractario. Candidatos apropiados se definen como pacientes que tienen CDI recurrente (una historia de 3 o más episodios, o 2 episodios que requiere hospitalización), o en pacientes con enfermedad refractaria que no responde a los antibióticos tradicionales. Creemos que un enfoque sistemático para todas las fases de este procedimiento maximiza la eficacia. En este manuscrito y el vídeo que acompaña, detallamos el protocolo que hemos empleado en nuestro Centro, que incluye el examen del paciente y del donante, la preparación de heces, y la entrega de las heces de unt el tiempo de la colonoscopia. Este método ha dado resultados positivos comparables a la literatura publicada. PRESENTACIÓN DEL CASO: Este paciente representa un típico paciente referido para el trasplante fecal. La paciente es una mujer de 69 años de edad, con antecedentes de leucemia linfocítica crónica que tuvo una recaída de la enfermedad que requiere tratamiento adicional con quimioterapia. Ella sufría de tres episodios de CDI en el pasado año, y por lo tanto se refiere a nuestra clínica para el examen de FMT antes quimioterapia para volver a iniciar. Su primer episodio de CDI ocurrido en octubre de 2012. Ella no había tenido ningún antibiótico precedentes. Ella estaba muy enfermo en la UCI tras presentar con shock séptico y se sometió a desviar la ileostomía en asa con anterógrada vancomicina enemas para un curso de 6 semanas en combinación con vancomicina oral dada la gravedad de su enfermedad. Lo hizo muy bien con la resolución de la diarrea y ella fue capaz de llegarantibióticos fuera. Ella desarrolló una hernia alrededor de su estoma por lo que se invirtió. Poco después de la reversión de ostomía volvió desarrolló diarrea y se encontró de nuevo a ser C. difficile positiva. Completó otro curso de 6 semanas de vancomicina oral y fue capaz de disminuir de éxito. Sin embargo, varios meses después, volvió desarrolló diarrea que era C. difficile positiva y se inició en su tercer curso de la vancomicina oral. Ella estaba haciendo bien en los antibióticos cuando se observó que su conteo de glóbulos blancos aumentó a&gt; 100 y ella ha encontrado que tienen una recurrencia de su CLL en la biopsia de médula ósea. Sus oncólogos estaban preocupados por iniciar la quimioterapia sin resolución completa de la CDI y por lo que les pidió realizar FMT.

<table><tbody><tr><td>Blender</td><td>Hamilton Beach</td><td>51101</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Hamilton-Beach-51101-Personal-Blender/dp/B00065L6CU/ref=pd_sim_k_2?ie=UTF8&amp;amp;refRID=1Q06MXAE9XKTB4QG0AEN&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Strainer</td><td>Winco</td><td>MS3A-8S</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.amazon.com/Winco-MS3A-8S-Strainer-Single-Wooden/dp/B001VZ5E40/ref=sr_1_3?s=home-garden&amp;amp;ie=UTF8&amp;amp;qid=1395001295&amp;amp;sr=1-3&amp;amp;keywords=kitchen+strainer+wooden+handle&quot; target=&quot;_blank&quot;&gt;Link to Amazon.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Disposable pads (chux), 17 x 24 in.</td><td>hospital standard</td><td></td><td>one package</td></tr><tr><td>Pink rectangular hospital standard wash basin, 8 quart</td><td>hospital standard</td><td></td><td>1 or 2</td></tr><tr><td>500 cc bottle of sterile normal saline</td><td>hospital standard</td><td></td><td>2</td></tr><tr><td>60 cc luer lock syringes</td><td>hospital standard</td><td></td><td>8 or 9</td></tr><tr><td>Biopsy channel cap with extension</td><td>hospital standard</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fecal microbiota transplantation via colonoscopy for recurrent c. difficile infection

Fecal microbiota Trasplante (FMT) es un tratamiento seguro y muy eficaz para recurrente y refractaria C. infección difficile (CDI). Varios métodos de administración FMT se han reportado en la literatura incluyendo sonda nasogástrica, endoscopia superior, enema y la colonoscopia. FMT a través de rendimientos colonoscopia excelentes tasas de curación y también es bien tolerado. Hemos encontrado que los pacientes encuentran esto un modo de entrega aceptable y tolerable. En nuestro centro, hemos iniciado un programa de trasplante fecal en pacientes con CDI recurrente o refractario. Hemos desarrollado un protocolo usando un proceso iterativo de revisión y hemos realizado 24 trasplantes fecales en 22 pacientes con tasas de éxito comparables a la literatura actual publicada. Un enfoque sistemático para la evaluación de los pacientes y de los donantes, la preparación de las heces, y la entrega de las heces maximiza el éxito terapéutico. Aquí nos detalle cada paso del protocolo FMT que se puede llevar a cabo en cualquier endoscopiacentro con un alto grado de seguridad y el éxito.

Hemos realizado 24 FMTs en 22 pacientes en nuestra Center (Tabla 1) utilizando el protocolo anterior. Nueve pacientes tenían IBD concurrente (seis con la enfermedad de Crohn y tres con colitis ulcerosa). Los nueve tenían resolución de CDI. Uno de los pacientes con enfermedad de Crohn fue status publicar una colectomía total para la colitis de Crohn. Inicialmente se sometió FMT a través de la colonoscopia sin embargo después de experimentar una recurrencia segunda semana después FMT fue sometido ...

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Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

Fecal Microbiota trasplante a través de la colonoscopia es un tratamiento seguro y eficaz para la infección recurrente y refractario C. difficile. Un enfoque sistemático para el paciente y la selección de donantes, la preparación de las heces, y la entrega de la materia fecal durante la colonoscopia maximizará el éxito terapéutico.

Fecal microbiota Trasplante mediante colonoscopia para Recurrente<em&gt; C. difficile</em&gt; Infección

Fecal Microbiota Transplantation (FMT) is a safe and highly effective treatment for recurrent and refractory C. difficile infection (CDI). Various methods ...

fecal-microbiota-transplantation-via-colonoscopy-for-recurrent-c

Universidad de Cartagena UDEC

Research

JoVE Journal

Medicine

Fecal Microbiota Transplantation via Colonoscopy for Recurrent C. difficile Infection

27.0K vistas.  Brigham and Women‘s Hospital.  Fecal Microbiota trasplante a través de la colonoscopia es un tratamiento seguro y eficaz para la infección recurrente y refractario C. difficile. Un enfoque sistemático para el paciente y la selección de donantes, la preparación de las heces, y la entrega de la materia fecal durante la colonoscopia maximizará el éxito terapéutico. 

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A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations and do not accurately simulate tumor biology and tumor cell dissemination. Genetically engineered mouse models have been introduced to overcome these limitations; however, such models are technically demanding, especially in large organs such as the colon in which only a single tumor is desired.
As a result, an immunocompetent, genetically engineered mouse model of colorectal cancer was developed which develops highly uniform tumors and can be used for tumor biology studies as well as therapeutic trials. Tumor development is initiated by surgical, segmental infection of the distal colon with adeno-cre virus in compound conditionally mutant mice. The tumors can be easily detected and monitored via colonoscopy. We here describe the surgical technique of segmental adeno-cre infection of the colon, the surveillance of the tumor via high-resolution colonoscopy and present the resulting colorectal tumors.

A protocol for the establishment of a genetically engineered mouse model of colorectal cancer by segmental adeno-cre infection and its surveillance via high-resolution colonoscopy is presented.

Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is a significant nosocomial pathogen. C. difficile is notoriously difficult to isolate and cultivate and is extremely sensitive to even low levels of oxygen in the environment. Here, methods for isolating C. difficile from fecal samples and subsequently culturing C. difficile for preparation of glycerol stocks for long-term storage are presented. Techniques for preparing and enumerating spore stocks in the laboratory for a variety of downstream applications including microscopy and animal studies are also described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which maintains a consistent anaerobic environment to ensure proper conditions for optimal C. difficile growth. We provide protocols for transferring materials in and out of the chamber without causing significant oxygen contamination along with suggestions for regular maintenance required to sustain the appropriate anaerobic environment for efficient and consistent C. difficile cultivation.

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile is a pathogenic bacterium that is a strict anaerobe and causes antibiotic associated diarrhea (AAD). Here, methods for isolating, culturing and maintaining C. difficile vegetative cells and spores are described. These techniques necessitate an anaerobic chamber, which requires regular maintenance to ensure proper conditions for optimal C. difficile cultivation.

El cultivo y mantenimiento<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; En un ambiente anaeróbico

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Inmunología e Infección

Murine Ileocolic Bowel Resection with Primary Anastomosis

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer being two common examples. Despite the frequency of these procedures, a significant knowledge gap remains in describing the inherent effects of intestinal resection on host physiology and disease pathophysiology. This article provides detailed instructions for an ileocolic resection with primary end-to-end anastomosis in mice, as well as essential aspects of peri-operative care to maximize post-operative success. When followed closely, this procedure yields a 95% long-term survival rate, no failure to thrive, and minimizes post-operative complications of bowel obstruction and anastomotic leak. The technical challenges of performing the procedure in mice are a barrier to its wide spread use in research. The skills described in this article can be acquired without previous surgical experience. Once mastered, the murine ileocolic resection procedure will provide a reproducible tool for studying the effects of intestinal resection in models of human disease.

Ileocolic resection is commonly performed in several human diseases; however, little is known regarding the impact of intestinal resection on surgical illnesses. This article provides instruction on executing the procedure in mice with high success, providing a means to study the effects of ileocolic resection in models of disease.

Murino ileocólica Resección intestinal con anastomosis primaria

Intestinal resections are frequently required for treatment of diseases involving the gastrointestinal tract, with Crohn&#8217;s disease and colon cancer ...

Medicina

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and consequently poses an urgent threat to public health. Recurrence of a C. difficile infection (CDI) after successful treatment with antibiotics is high, occurring in 20-30% of patients, thus necessitating the discovery of novel therapeutics against this pathogen. Current animal models of CDI result in high mortality rates and thus do not approximate the chronic, insidious disease manifestations seen in humans with CDI. To evaluate therapeutics against C. difficile, a mouse model approximating human disease utilizing a clinically-relevant strain is needed. This protocol outlines the cefoperazone mouse model of CDI using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Techniques for clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol. Compared to other mouse models of CDI, this model is not uniformly lethal at the dose administered, allowing for the observation of a prolonged clinical course of infection concordant with the human disease. Therefore, this cefoperazone mouse model of CDI proves a valuable experimental platform to assess the effects of novel therapeutics on the amelioration of clinical disease and on the restoration of colonization resistance against C. difficile.

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

This protocol outlines the cefoperazone mouse model of Clostridium difficile infection (CDI) using a clinically-relevant and genetically-tractable strain, R20291. Emphasis on clinical disease monitoring, C. difficile bacterial enumeration, toxin cytotoxicity, and histopathological changes throughout CDI in a mouse model are detailed in the protocol.

Cefoperazona tratados modelo de ratón clínicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Therapeutic Evaluation of Fecal Microbiota Transplantation in an Interleukin 10-Deficient Mouse Model

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted considerable attention. Accumulating evidence suggests that dysbiotic microbiota plays an active role in triggering or worsening the inflammatory process in IBD and that fecal microbiota transplantation (FMT) is an attractive therapeutic strategy since transferring a healthy microbiota to IBD patient could restore the appropriate host-microbiota communication. However, the molecular mechanisms are unclear, and the efficacy of FMT has not been very well established. Thus, further studies in animal models of IBD are necessary. In this method, we applied FMT from wild-type C57BL/6J mice to IL-10 deficient mice, a widely used mouse model of colitis. The study elaborates on collecting fecal pellets from the donor mice, making the fecal solution/suspension, administering the fecal solution, and monitoring the disease. We found that FMT significantly mitigated the cardiac impairment in IL-10 knockout mice, underlining its therapeutic potential for IBD management.

The interaction of genetic susceptibility, mucosal immunity, and intestinal microecological environment is involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). In this study, we applied fecal microbiota transplantation to IL-10 deficient mice and investigated its impact on colonic inflammation and heart function.

Evaluación terapéutica del trasplante de microbiota fecal en un modelo de ratón deficiente en interleucina 10

With the development of microecology in recent years, the relationship between intestinal bacteria and inflammatory bowel disease (IBD) has attracted ...

Murine Fecal Isolation and Microbiota Transplantation

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal microbiota transplantation (FMT) is a valuable approach to delineating a direct role of the total microbiota or isolated species in disease pathophysiology. It is a safe treatment option for patients with recurrent Clostridium difficile infection. Preclinical studies demonstrate that manipulating the gut microbiota is a useful tool to study the mechanistic link between dysbiosis and disease. Fecal microbiota transplantation may help elucidate novel gut microbiota-targeted therapeutics for the management and treatment of cardiometabolic disease. Despite a high success rate in rodents, there remains translational changes associated with the transplantation. The goal here is to provide guidance in studying the effects of gut microbiome in experimental cardiovascular disease. In this study, a detailed protocol for the collection, handling, processing, and transplantation of fecal microbiota in murine studies is described. The collection and processing steps are described for both human and rodent donors. Lastly, we describe using a combination of the Swiss-rolling and immunostaining techniques to assess gut-specific morphology and integrity changes in cardiovascular disease and related gut microbiota mechanisms.

The goal here is to outline a protocol to investigate the mechanisms of dysbiosis in cardiovascular disease. This paper discusses how to aseptically collect and transplant murine fecal samples, isolate intestines, and use the "Swiss-roll" method, followed by immunostaining techniques to interrogate changes in the gastrointestinal tract.

Aislamiento fecal murino y trasplante de microbiota

Gut microbiota dysbiosis plays a role in the pathophysiology of cardiovascular and metabolic disorders, but the mechanisms are not well understood. Fecal ...

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of the specific role of individuals, defined or complex groups of microorganisms in host response. Traditionally bred and reared in flexible-film or semi-rigid isolators, germ-free mouse husbandry and experimental manipulation are costly and require numerous trained staff and a large space footprint in animal housing facilities. The IsoPositive caging system allows for experimental manipulation of germ-free mice in individual, hermetically-sealed, positive-pressure isolator cages (isocages), reducing cost and enabling greater flexibility in experimental manipulations. 
Here, a protocol is described for transferring germ-free mice from breeding isolators to isocages and subsequent fecal transfer from human donor stool into mice to create stable long-term gut "humanized" mice for future studies. The materials and preparation needed for the utilization of the isocage system are described, including the use of chlorine-dioxide sterilant chemical sterilant to clean cages, supplies, equipment, and personal protective equipment. The methods for confirming the germ-free status of transferred mice and how to determine contamination in the caging system are discussed. The procedure for husbandry, including bedding, food, and water supply, is further discussed. The protocol for human fecal slurry preparation and gavage into germ-free mice to create gut "humanized" mice, along with stool collection to monitor the microbial community composition of these mice, are described. An experiment illustrates that two weeks post-human fecal transplant allows for stable colonization of donor microbiota in the murine hosts, enabling subsequent experimental usage. Furthermore, the collection of humanized mouse feces in viability preservation media, enabling use in further functional experiments, is described. Overall, these methods allow for the safe and effective establishment of humanized mouse communities in experimental gnotobiotic cages for further manipulation.

This protocol describes the best practices for germ-free mouse transfer to and housing in experimental single-cage isolators (isocages) while maintaining sterile conditions. Methods for fecal transplant into germ-free mice and the collection of viable bacteria from these gut "humanized" mice for further applications are discussed.

Preparación y mantenimiento del experimento de jaula IsoPositive de bioexclusión para el trasplante fecal humano en ratones libres de gérmenes

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the biological function of intestinal bacteria as a whole or at the species level. Several different FMT methods have been published. Here, we present an FMT protocol that successfully depletes gut microbiota in a matter of days, followed by transplantation of fecal microbiota from fresh or frozen donor intestinal contents to conventional mice. Real time-PCR is applied to test the efficacy of bacterial depletion. Sequencing of the 16S ribosomal RNA (rRNA) is then applied to test the relative abundance and identity of gut microbiota in recipient mice. We also present a flow cytometry-based detection method of immunoglobulin A (IgA)-coated bacteria in the gut.

We established an efficient way to deplete intestinal bacteria in three days, and subsequently transplant fecal microbiota via gavage of fecal fluid prepared from fresh or frozen intestinal contents in mice. We also present an optimized method to detect the frequency of IgA-coated bacteria in the gut.

Gut microbiota exert pleiotropic roles in human health and disease. Fecal microbiota transplantation (FMT) is an effective method to investigate the ...

Biología

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in alleviating colitis remain undefined. Most analysis methods rely on limited diversity and abundance of gut microorganisms. Therefore, observational studies cannot establish causation. In this study, we applied antibiotic-induced pseudo-germ-free mice to investigate the role of gut microbiota in regulating the probiotic effects of Bacillus&#160;cereus (B. cereus)&#160;on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. This process allows for evaluating the bidirectional regulating effect of B. cereus&#160;supplementation on health and provides stable and reproducible results. Here, the detailed protocols for B. cereus cultivation, gavage operation, stool collection, and antibiotic clearance treatment on colitis mice are provided. The optimization methods are also applicable for other chronic inflammatory-associated disorders. The results showed that B. cereus administration decreased body weight loss, colon length shortening, disease activity index, and histopathological scores. However, treatment with antibiotics suppressed the positive effect of B. cereus on colitis. These results indicate that gut microbiota are needed for the alleviating effects of B. cereus on colitis. Therefore, exploring the beneficial effects of probiotics in this research is a promising approach for developing novel treatment strategies for alleviating the symptoms of chronic inflammatory-associated disorders.

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Here, we present a protocol to establish the antibiotic-induced pseudo-germ-free dextran sulfate sodium-induced colitis mouse model to investigate the role of gut microbiota in regulating the positive effects of Bacillus cereus on colitis.

Gut microbiota dysbiosis is thought to exert a role in the progression of colitis. However, the precise standards for probiotic administration in ...

Generating a Double Humanized BLT (Bone-Marrow, Liver, Thymus) Mouse Model

Source: Daharsh, L. et al., <a href="https://appjove.unicartagenaproxy.elogim.com/v/59773">A Double Humanized BLT-mice Model Featuring a Stable Human-Like Gut Microbiome and Human Immune System.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2019)
This video demonstrates the method for generating a double humanized bone BLT (marrow, liver, and thymus) mouse with a functional human immune system and a stable engrafted human-like gut microbiome.

Generación de un modelo de ratón BLT (médula ósea, hígado, timo) doblemente humanizado

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. Mice ...

Fecal microbiota Trasplante mediante colonoscopia para Recurrente

Resumen

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Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

El cultivo y mantenimiento

Murino ileocólica Resección intestinal con anastomosis primaria

Cefoperazona tratados modelo de ratón clínicamente relevante

Evaluación terapéutica del trasplante de microbiota fecal en un modelo de ratón deficiente en interleucina 10

Aislamiento fecal murino y trasplante de microbiota

Preparación y mantenimiento del experimento de jaula IsoPositive de bioexclusión para el trasplante fecal humano en ratones libres de gérmenes

Fecal Microbiota Transplantation and Detection of Prevalence of IgA-Coated Bacteria in the Gut

Investigating the Alleviating Effects of Bacillus cereus Administration on Colitis through Gut Microbiota Modulation

Generación de un modelo de ratón BLT (médula ósea, hígado, timo) doblemente humanizado